張?zhí)炷?，歐 寧，張宏文

·論 著·

艾普拉唑腸溶片在中國健康人體中藥代動力學(xué)及絕對生物利用度研究

張?zhí)炷?，歐 寧2，張宏文2

目的 采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)分析方法研究艾普拉唑腸溶片在中國健康人體中的吸收特性。 方法 采用隨機交叉自身對照試驗設(shè)計,16名健康受試者隨機等分成4組,先后口服艾普拉唑腸溶片或靜脈注射艾普拉唑鈉，采用UPLC-MS/MS測定血漿藥物濃度。利用WinNonlin(V6.1)軟件標(biāo)準(zhǔn)非房室模型方法進行藥代動力學(xué)參數(shù)的計算。 結(jié)果 注射用艾普拉唑鈉(10 mg)的主要藥代動力學(xué)參數(shù)：最大血藥濃度(Cmax)為(834.3±101.2)ng/mL，消除半衰期(t1/2)為(3.4±0.9)h，表觀分布容積(Vz)為(14.0±2.2)L, 0到t時間藥時曲線下面積(AUC0_t)為(3 520.9±915.3)ng·h/mL，血漿清除率(CL)為(3.0±0.9)L/h。艾普拉唑腸溶片(10 mg)的主要藥代動力學(xué)參數(shù)：Cmax為(347.9±176.3)ng/mL，t1/2為(3.5±0.8)h，Vz為(29.1±12.2)L,AUC0_t為(1970.2±834.7)ng·h/mL，CL為(5.9±2.5)L/h。與靜脈給藥相比，口服艾普拉唑腸溶片的絕對生物利用度為(55.2±13.9)%。 結(jié)論 艾普拉唑腸溶片生物利用度良好，適于開發(fā)。

艾普拉唑；藥代動力學(xué)；絕對生物利用度；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜

艾普拉唑(ilaprazole，IY-81149)由韓國的一洋制藥公司與麗珠醫(yī)藥集團股份有限公司在中國合作研發(fā)的新一代質(zhì)子泵抑制劑(PPI)，并且首次在小鼠、大鼠、犬和豬動物模型上進行體外研究[1-3]。艾普拉唑是一種新型的離子泵抑制劑，屬于苯并咪唑類，與奧美拉唑和蘭索拉唑化學(xué)結(jié)構(gòu)相似，但在苯并咪唑上用吡咯環(huán)取代了氫，在吡啶環(huán)上用氫取代了甲基。它可以有效并長久地抑制胃酸分泌[4-5]，并可高效、安全地治療十二指腸潰瘍及胃酸相關(guān)的一些疾病,如應(yīng)激性胃潰瘍等[6-7]。艾普拉唑在治療十二指腸潰瘍時特別是在較低劑量(10/5 mg/d艾普拉唑vs20 mg/d奧美拉唑)下與奧美拉唑一樣可耐受，安全和有效[8-9]。注射用艾普拉唑鈉是艾普拉唑鈉的凍干粉針劑，是麗珠集團研發(fā)的化學(xué)藥品2類新藥。2013年1月，該藥獲中華人民共和國國家食品藥品監(jiān)督管理總局(SFDA)批準(zhǔn)進行臨床試驗(藥物臨床試驗批件號：2013L00143)，麗珠集團委托南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院進行I期臨床研究。本研究用于評價艾普拉唑靜脈注射與口服片劑生物利用度，為推薦Ⅱ期臨床試驗方案提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑 艾普拉唑、奧美拉唑-d2標(biāo)準(zhǔn)品均由麗珠集團醫(yī)藥研究所提供，純度分別為99.7%和98.3%。注射用艾普拉唑鈉，規(guī)格：10 mg(以艾普拉唑計)/瓶，批號：130401；艾普拉唑腸溶片，規(guī)格：5 mg(以艾普拉唑計)/片，批號：20120822。均由麗珠集團麗珠制藥廠提供；乙腈和甲酸為HPLC級，分別為Burdick&Jackson及Sigma-Aldrich產(chǎn)品。乙酸乙酯和異丙醇為HPLC級，均為Thermo-Fisher產(chǎn)品。氨水和乙酸銨為分析純，分別由北京化學(xué)試劑公司和國藥集團試劑公司提供。

1.1.2 儀器 使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)系統(tǒng)進行測定，LC-20A超高效液相色譜儀、Xevo TQS質(zhì)譜儀來自美國Waters公司。離心機(Megaguge 1.0R,德國Heraeus產(chǎn)品)。分析天平(AX105DR,瑞士METTLER TOLEDO產(chǎn)品)。氮吹儀(DB-3D，TECHNE產(chǎn)品)。Milli-Q超純水機(Millipore Inc. USA)。

1.1.3 色譜及質(zhì)譜條件 美國Waters Acquity BEH C18色譜柱(2.1 × 50 mm，1.7 μm)；流動相為乙腈-含0.08%氨水的10 mM乙酸銨水溶液(55∶45，V/V，pH=9.0)，流速為0.4 mL/min，柱溫為室溫。進樣體積為3 μL，每個樣品的分析時間為2.0 min。串聯(lián)質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源(ESI),用正離子方式檢測，選用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)的質(zhì)譜掃描方式測定，用于定量的離子反應(yīng)分別為m/z 367.10→m/z 183.97(艾普拉唑)和m/z 348.16→m/z 198.00(奧美拉唑-d2)。脫溶劑氣溫度為450 ℃；霧化氣設(shè)置(氮氣)參數(shù)為7.0；毛細(xì)管電壓為2.5 kV;碰撞氣設(shè)置(氬氣)參數(shù)為15 unit。

1.2 臨床試驗

1.2.1 對象 本試驗使用的臨床試驗方案和受試者書面知情同意書，及其修訂均在試驗開始前獲得了南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床試驗倫理委員會的書面批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號：2013-MD-039)。本研究嚴(yán)格遵守赫爾辛基宣言人體醫(yī)學(xué)研究的倫理準(zhǔn)則，SFDA頒布的藥物臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范，ICH/GCP以及國家法規(guī)部門的相應(yīng)要求。入選標(biāo)準(zhǔn)：受試者試驗前簽署知情同意書，并對試驗內(nèi)容、過程及可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)充分了解，入選健康受試者16名(男女各半)，年齡18～45 歲(包括邊界值)，體重指數(shù)(BMI)在正常19～25 kg/m2范圍內(nèi)；且同一批受試者體重不宜懸殊過大，無心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史，體格檢查顯示血壓、心率、心電圖、呼吸狀況、肝、腎功能和血象無異常，試驗前2 周內(nèi)未服任何藥物，非過敏體質(zhì)，無已知的藥物過敏史，以往無重要臟器疾病史者，無影響藥物代謝的其他因素，無吸煙、飲酒、吸毒史。排除標(biāo)準(zhǔn)：軀體殘疾者，最近3個月獻血者或參加其他臨床試驗采血者，妊娠期婦女或可能妊娠的婦女，研究者認(rèn)為不能入組的其他情況(如體弱、依從性不可控等)。退出標(biāo)準(zhǔn)：受試者依從性差，研究者認(rèn)為不能完成臨床試驗者，受試者不愿意繼續(xù)進行臨床試驗，向研究者提出退出者，使用了影響試驗結(jié)果的藥物。終止試驗標(biāo)準(zhǔn)：半數(shù)受試者出現(xiàn)中度不良反應(yīng)，達到最大劑量，申辦者要求全面終止試驗，SFDA或倫理會要求停止。

1.2.2 實驗方案 受試者于給藥前1周進行體格檢查和實驗室檢查，篩查合格后，于給藥前1天入?、衿诓》?。晚餐后開始禁食，22：00后開始禁水。第2天早上8：00開始給藥。采用隨機、開放、四周期交叉的試驗設(shè)計。16 名志愿者隨機分成4 組，每組4名，男、女各半。在不同周期內(nèi)，受試者分別口服艾普拉唑腸溶片10 mg 或靜脈注射艾普拉唑鈉10 mg。經(jīng)過1周的洗脫期，交叉后再分別給藥?？诜o藥采血時間點為給藥前及給藥后1.5、2、2.5、3、3.5、4、5、6、8、10、12、24、34、48 h；注射給藥采血時間點為給藥前及給藥后15、30、45、50、60 min及1.5、2、3、4、5、8、12、24 h。每次取血3 mL，肝素抗凝。將采集后的血樣盡快在避光條件下冰浴冷卻，并在4℃條件下高速離心分離。血漿樣品分3份堿化并置于有合適標(biāo)記的試管中，在≤-40 ℃冰箱中保存待測。血漿堿化方法為600 μL的血漿加入10 μL NaOH溶液(1 mol/L)堿化溶液，混勻后存放于在≤-40 ℃冰箱中。

1.2.3 血漿樣品的處理 取50 μL血漿樣本置于1.5 mL EP管中，依次加入10 μL內(nèi)標(biāo)溶液(1.0 μg/mL)和400 μL乙酸乙酯(含5%異丙醇)，渦旋振蕩2 min，13000 rpm離心10 min。取上清液400 μL至于潔凈玻璃管中，室溫下以N2吹干，以體積為200 μL的乙腈-含0.08%氨水的10 mM乙酸銨水溶液(55∶45，V/V)的溶液復(fù)溶后，取3 μL進樣。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 分2次精密稱取艾普拉唑標(biāo)準(zhǔn)品10.03 mg，然后轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用乙腈:10 mM乙酸銨水溶液(55∶45，V/V，pH=10.0)的溶液定容至刻度。上述儲備液分別用與配制標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控樣品，儲存于-80 ℃冰箱備用。標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液STD1(100 μg/mL):取1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液1.0 mL,轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用乙腈:10 mM乙酸銨水溶液(55∶45，V/V，pH=10.0)的溶液定容至刻度。此工作液用于配制血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線，儲存于-80 ℃冰箱備用。質(zhì)控工作液QTD1(100 μg/mL)：取1 mg/mL質(zhì)控儲備液1.0 mL,轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用乙腈:10 mM乙酸銨水溶液(55∶45，V/V，pH=10.0)的溶液定容至刻度。此工作液用于配制血漿質(zhì)控樣品，儲存于-80 ℃冰箱備用。精密稱取內(nèi)標(biāo)10.04 mg，然后轉(zhuǎn)移至1 mL容量瓶中，加入適量乙腈：10 mM乙酸銨水溶液(55∶45，V/V，pH=10.0)的溶液溶解后定容至刻度，得到1 mg/mL儲備液，儲存于-80 ℃冰箱備用。濃度為100 μg/mL內(nèi)標(biāo)工作液的配制：取1 mg/mL內(nèi)標(biāo)儲備液1.0 mL,轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用乙腈∶10 mM乙酸銨水溶液(55∶45，V/V，pH=10.0)的溶液定容至刻度，儲存于-80 ℃冰箱備用。濃度為1 μg/mL內(nèi)標(biāo)工作液的配制：取100 μg/mL內(nèi)標(biāo)儲備液1.0 mL,轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用乙腈∶10 mM乙酸銨水溶液(55∶45，V/V，pH=10.0)的溶液定容至刻度，儲存于-80 ℃冰箱備用。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察主要藥代動力學(xué)參數(shù)為：消除半衰期(t1/2)、最大血藥濃度(Cmax)、表觀分布容積(Vz)、0到t時間藥時曲線下面積(AUC0_t)、0到∞時間藥時曲線下面積(AUC0_∞)、血漿清除率(CL)。藥代動力學(xué)參數(shù)的計算根據(jù)樣本的實際采樣時間，采用藥代動力學(xué)專業(yè)統(tǒng)計分析軟件Phoenix WinNonlin(V 6.1，美國pharsight公司)，通過非房室模型方法對艾普拉唑血漿濃度數(shù)據(jù)進行藥代動力學(xué)參數(shù)的計算，分別獲得了靜脈和口服給藥后的藥時曲線下面積，通過以下公式計算艾普拉唑的絕對生物利用度：

絕對生物利用度=口服藥時曲線下面積·注射劑量/注射藥時曲線下面積·口服劑量×100%

2 結(jié) 果

2.1 方法學(xué) 按選定的LC-MS/MS條件，艾普拉唑及內(nèi)標(biāo)的保留時間分別為0.43 min及0.38 min，并且附近沒有明顯的內(nèi)源性物質(zhì)干擾，此方法專屬性強。血漿中艾普拉唑在室溫放置2 h、反復(fù)凍融3次(-80 ℃至25 ℃)、自動進樣器(4 ℃)放置24 h、-80 ℃放置180 d仍然穩(wěn)定。其儲備液在-80 ℃放置346 d穩(wěn)定性良好。本研究標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍為1～1000 ng/mL,分別為1、2、10、50、100、250、500、1000 ng/mL。在1～1000 ng/mL的范圍內(nèi)，艾普拉唑與內(nèi)標(biāo)峰面積比值與藥物濃度具有良好的線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)線性方程為：Y=0.005X+0.0007(r=0.999)。精密度實驗批內(nèi)和批間的變異系數(shù)<15%。該方法萃取回收率為70.3%～75.9%。結(jié)果表明所建立的艾普拉唑在人血漿內(nèi)LC-MS/MS分析方法符合生物樣品分析的要求。

2.2 藥代動力學(xué) 單次給藥試驗中入組16名受試者，有1名男性受試者在試驗第1周期結(jié)束后退出試驗(凝血功能中凝血酶原時間值升高較高，結(jié)合試驗前后心電圖檢查時，與電極接觸部分皮膚均出現(xiàn)異常無法短期恢復(fù)的紅斑，且受試者皮膚有疾病史，為保證受試者安全，由研究者決定其退出試驗)。15名受試者(男7名、女8名)完成所有臨床試驗。15名受試者單劑量口服或靜脈注射給予10 mg艾普拉唑后的平均血漿藥物濃度-時間曲線見圖1?？诜办o脈注射艾普拉唑試驗的主要藥代動力學(xué)參數(shù)見表1，單次靜脈注射10 mg艾普拉唑藥物后，Cmax和AUC與劑量呈現(xiàn)明顯比例關(guān)系， t1/2、CL和Vz與給藥劑量無關(guān)。非房室模型方法對艾普拉唑血漿濃度數(shù)據(jù)進行藥代動力學(xué)參數(shù)的計算，分別獲得了靜脈和口服給藥后的藥時曲線下面積，計算艾普拉唑的絕對生物利用度為(55.2±13.9)%。

參數(shù)靜脈注射組(n=15)口服組(n=15)消除半衰期(h)3 4±0 93 5±0 8達最大血藥濃度的時間(h)0 8±0 13 8±1 1最大血藥濃度(ng/mL)834 3±101 2347 9±176 30到t時間藥時曲線下面積(ng·h/mL)3520 9±915 31970 2±834 70到∞時間藥時曲線下面積(ng·h/mL)3562 6±947 81984 2±836 6表觀分布容積(L)14 0±2 229 1±12 2血漿清除率(L/h)3 0±0 95 9±2 5

a:口服10 mg艾普拉唑腸溶片;b:靜脈注射10 mg艾普拉唑鈉

圖1 受試者口服和靜脈注射艾普拉唑鈉的平均血藥濃度-時間曲線

3 討 論

艾普拉唑至2009年已在27個國家申請專利[10]。2007年12月，艾普拉唑作為治療十二指腸潰瘍的藥物被批準(zhǔn)上市。2009年，在韓國開始用于治療十二指腸潰瘍和胃潰瘍，并于2012年用于治療糜爛性食管炎[11]。麗珠集團研發(fā)的艾普拉唑原料及腸溶片于2007年12月在我國獲批，首次在全球上市，為國家Ⅰ類新藥，至今研究資料較少[12-13]。其他拉唑類藥物，如雷貝拉唑和埃索美拉唑為進口合資的質(zhì)子泵抑劑，由于價格高臨床使用受限[14]。艾普拉唑腸溶片每日晨服10 mg治療十二指腸球部潰瘍，療效較好。本試驗單次口服10 mg，單劑量靜脈注射5 mg、10 mg、20 mg注射用艾普拉唑鈉(批號130401)藥物后, 16名受試者共發(fā)生了11人次輕度不良事件，其中有7人次，以凝血功能中活化部分凝血活酶時間(APTT)和凝血酶原時間(PT)的升高為表現(xiàn)，每個劑量組中都有出現(xiàn)。結(jié)合試驗過程中出現(xiàn)的受試者凝血測定值部分異常，懷疑與處方中乙二胺四乙酸鈉(EDTA-Na)有關(guān)，將注射用艾普拉唑鈉處方中EDTA-Na的含量由2 mg/10 mg調(diào)整為1 mg/10 mg，使用新處方繼續(xù)進行試驗。單次給藥試驗劑量研究過程中無重度或嚴(yán)重不良事件發(fā)生。 本試驗結(jié)果顯示，艾普拉唑在人體內(nèi)的過程符合線性動力學(xué)特征。通過非房室模型方法對艾普拉唑血漿濃度數(shù)據(jù)進行藥代動力學(xué)參數(shù)的計算，分別獲得了靜脈和口服給藥后的藥時曲線下面積，計算艾普拉唑的絕對生物利用度。結(jié)果顯示，口服艾普拉唑腸溶片的絕對生物利用度是(55.2±13.9)%。艾普拉唑腸溶片生物利用度良好，因此適于開發(fā)。

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(本文編輯：葉華珍； 英文編輯：王建東)

Pharmacokinetics and absolute bioavailability of ilaprazole enteric-coated tablet in Chinese healthy volunteers

ZHANG Tian-nan1, OU Ning2, ZHANG Hong-wen2

(1.DepartmentofPharmacy，JiangsuProvinceHospitalofTraditionalChineseMedicine，Nanjing210029,Jiangsu,China；2.PhaseIClinicalTrialLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity,JiangsuProvinceHospital,Nanjing210029,Jiangsu,China)

Objective To study the absorption of ilaprazole enteric-coated tablet in Chinese healthy volunteer using UPLC-MS/MS. Methods A randomized crossover self-controlled trial was designed, in which sixteen subjects were randomly divided into 4 groups. Then ilaprazole enteric-coated table or ilaprazole sodium were given to each group by oral or intravenous injection. The drug concentrations were determined by UPLC-MS/MS and pharmacokinetic parameters were calculated using WinNonlin (V6.1) software with non-compartmental model. Results The pharmacokinetic parameters of ilaprazole sodium (10 mg) for injection were as follows: Cmaxwas (834.3±101.2) ng/mL t1/2was (3.4±0.9) h. Vz was (14.0±2.2) L. AUC0_twas (3520.9±915.3) ng·h/mL. CL was (3.0±0.9) L/h. The pharmacokinetic parameters of ilaprazole enteric-coated table (10 mg) were as follows: Cmax was (347.9±176.3) ng/mL. t1/2was (3.5±0.8) h. Vz was (29.1±12.2) L. AUC0_twas (1970.2±834.7) ng·h/mL. CL was (5.9±2.5) L/h. Compared with ilaprazole sodium, the mean absolute bioavailability of ilaprazole enteric-coated table was (55.2±13.9)%. Conclusion Ilaprazole enteric-coated tablet has good bioavailability and is suitable for development.

Ilaprazole; Pharmacokinetic; Absolute bioavailability; LC-MS/MS

1. 210029南京，江蘇省中醫(yī)院藥學(xué)部；2. 210029南京，南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院/江蘇省人民醫(yī)院I期臨床試驗研究室

張?zhí)炷?，歐 寧，張宏文.艾普拉唑腸溶片在中國健康人體中藥代動力學(xué)及絕對生物利用度研究[J].東南國防醫(yī)藥，2017,19(4):372-375.

R969.1

A

1672-271X(2017)04-0372-04

10.3969/j.issn.1672-271X.2017.04.010

2017-03-15;

2017-06-01)