楊立娜

(遼陽市第三人民醫(yī)院 檢驗科， 遼寧 遼陽 111000)

·論著·

巨細胞病毒性肺炎兒童體內(nèi)中性粒細胞表面黏附分子CD11b表達及臨床意義

楊立娜

(遼陽市第三人民醫(yī)院 檢驗科， 遼寧 遼陽 111000)

目的 探討感染巨細胞病毒(CMV)感染性肺炎的兒童體內(nèi)中性粒細胞表面黏附分子CD11b的表達及診斷價值。方法 收集2014年11月至2016年10月在我院收治的CMV感染性肺炎兒童113例，年齡2～4歲，其中男80例，女33例，通過CMV-pp65抗原檢測將CMV肺炎的兒童分為CMV肺炎高活動性感染組、CMV肺炎活動性感染組和非CMV肺炎感染陰性對照組，同時選取我院門診體檢健康同年齡段兒童男21例、女12例作為健康對照組。采用流式細胞儀分別檢測上述各組的中性粒細胞表面黏附分子CD11b表達比例。計算CD11b在診斷兒童CMV肺炎過程中的受試者工作曲線(ROC曲線)。結(jié)果CMV肺炎高活動性感染的兒童中性粒細胞表達CD11b的比例與非CMV肺炎感染陰性對照組和健康對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。CD11b診斷兒童CMV肺炎高活動性感染組的最佳臨界值為表達率40.11%，敏感度為100%，特異度為63.19%，受試者工作曲線下面積為0.612；CD11b診斷兒童CMV肺炎活動性感染組的最佳臨界值為表達率63.87%，敏感度為92.87%，特異度為98.34%，受試者工作曲線下面積為0.991。結(jié)論 兒童CMV肺炎感染后中性粒細胞CD11b表達下調(diào)，可以作為鑒別診斷兒童CMV肺炎活動性感染的實驗室依據(jù)。

肺炎，病毒性；巨細胞病毒；細胞活素類；流式細胞術(shù)

人巨細胞病毒(humancytomegalovirus，HCMV)是具有雙螺旋結(jié)構(gòu)的DNA病毒，屬于皰疹病毒科中的β亞科，在皰疹病毒家族中，其基因結(jié)構(gòu)最為復(fù)雜，且堿基的長度也最長[1]。巨細胞病毒(CMV)屬于條件致病病毒，在健康人體內(nèi)，CMV雖然可以檢測出陽性抗體，由于健康人免疫系統(tǒng)的監(jiān)視作用，能夠有效地防止CMV活動性感染的發(fā)生。但是，在免疫力低下的人群體內(nèi)，則容易發(fā)生CMV活動性感染，目前報道的容易發(fā)生CMV活動性感染的主要人群為嬰幼兒和長期服用免疫抑制劑的患者如移植術(shù)后的患者和因疾病需要大量服用激素的患者等[2-5]。CMV具有組織和細胞的泛嗜性，因此臨床表現(xiàn)也不一，可以累及泌尿生殖系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟、肺、血液循環(huán)系統(tǒng)等病變，其中以巨細胞病毒性肺炎最為常見[6-7]。我國屬于CMV病毒感染的高發(fā)區(qū)域，有研究顯示在我國通過CMVIgG抗體檢測方法檢測健康人群，其CMV的陽性感染率高達70%～100%，而孕婦CMV的感染率更是高達95%以上，對于周歲兒童CMV的陽性率約為80%[8-9]。由于兒童免疫系統(tǒng)尚處于發(fā)育期，其免疫功能有待完善，因此兒童CMV肺炎的發(fā)生比例較高，有研究報道，2～6歲CMV抗體檢測陽性的兒童罹患CMV肺炎比例可達13%[10]。如果兒童CMV肺炎活動性感染不能得到有的救治則病程發(fā)展迅速，病情兇險，嚴重者可能危及生命，因此在臨床上早期發(fā)現(xiàn)并明確診斷CMV感染對于治療該病具有重要的意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象 2014年11月至2016年10月在我院收治的兒童CMV肺炎感染者113例，其中男80例，女33例，年齡2～4歲，平均(3.3±0.2)歲；同時選取我院門診體檢健康同齡兒童33例，男21例，女12例，作為健康對照組，本研究經(jīng)我院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)，選擇研究納入人群均獲得其兒童監(jiān)護人的同意并簽署知情同意書。

1.2 試劑及檢測方法CMV-pp65抗原檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)定性檢測，采用CMVBriteTMTurboKit試劑盒(荷蘭IQ公司)，將兒童的血液在肝素抗凝后采用密度梯度離心法分離白細胞，并調(diào)整白細胞的密度為2×106/ml，將調(diào)整好的白細胞液滴入載玻片內(nèi)并使用試劑盒中的固定液和打孔劑分別處理白細胞，將pp65的一抗在濕盒中孵育6小時后，取出在避光條件下使用高倍鏡下鏡檢。CD11b檢測：CD11b購買于美國BD公司，使用破膜固定液將白細胞分離后，使用磷酸鹽緩沖溶液(PBS)將白細胞密度調(diào)整為5×106/ml細胞懸液，取出195μl，并加入5μlCD11b流式抗體，避光保存20分鐘后，采用流式細胞儀檢測。

1.3CMV活動性感染診斷標(biāo)準(zhǔn) 兒童外周血中CMV-pp65抗原檢測陽性，CMV-pp65抗原檢驗陽性細胞>100個/5×104白細胞為高活動性CMV感染，CMV-pp65抗原檢驗陽性細胞<100個/5×104白細胞診斷為CMV活動性感染。

兒童CMV肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1998年由中華醫(yī)學(xué)會兒科分會制定的《CMV感染診斷方案》[11]：①從兒童受檢的血、尿、唾液或組織等任何一種中分離出CMV；②用特異的單克隆抗體從受檢的組織或細胞中檢測到CMV抗原如早期速發(fā)抗原(IEA)、熱病抗原(FA)或pp65等；③從外周血白細胞中查得CMV抗原(以上3項中有任何一項陽性時，不僅可以診斷CMV感染，并能診斷為產(chǎn)毒性感染)；④用分子雜交或PCR法從受檢材料中檢出CMV-mRNA，表明產(chǎn)毒性感染，如檢出CMV-DNA特異片段，只能表明CMV感染，不能區(qū)分為產(chǎn)毒性或潛伏性感染。

2 結(jié) 果

2.1CMV-pp65抗原檢測結(jié)果 根據(jù)CMV-pp65抗原檢測結(jié)果，將兒童分為CMV高活動性感染組、CMV活動性感染組和非CMV感染陰性對照組。其中兒童CMV高活動性感染組20例，占試驗組兒童總數(shù)的17.7%，CMV活動性感染組48例，占試驗組兒童總數(shù)的42.48%，陰性對照組45例，占試驗組兒童總數(shù)的39.82%。

2.2CD11b在中性粒細胞表達 經(jīng)過流式CD11b抗體標(biāo)記后，兒童CMV肺炎高活動性感染兒童體內(nèi)中性粒細胞可以檢測CD11b表達的比例占中性粒細胞總數(shù)的(38.17±5.22)%，與CMV活動性感染組(49.23±4.22)%、陰性對照組(61.56±4.37)%和健康對照組(63.34±5.27)%比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(圖1)。CD11b診斷兒童CMV高活動性感染的最佳臨界值為表達率40.11%，敏感度為100%，特異度為63.19%，受試者工作曲線下面積為0.612；CD11b診斷兒童CMV活動性感染的最佳臨界值為表達率63.87%，敏感度為92.87%，特異度為98.34%，受試者工作曲線下面積為0.991(圖2)。

與健康對照組比較，**P<0.01；與非CMV感染陰性對照組比較，##P<0.01

圖1 各組中CD11b在中性粒細胞表面的表達

圖2CD11b診斷兒童CMV高活動性感染和CMV活動性感染的ROC曲線

3 討 論

嬰幼兒由于免疫力低下容易誘發(fā)丙型肝炎病毒、柯薩奇B病毒、風(fēng)疹病毒、流行性腮腺炎病毒、輪狀病毒和CMV等病毒感染[12]。而CMV是已知的病原微生物中最容易引起嬰幼兒急、慢性感染的病毒之一，而且CMV具有潛伏-活化的生物學(xué)特征，有研究顯示1周歲兒童CMV抗原的陽性檢出率高達80%，一旦兒童的免疫功能低下，CMV就可以直接誘發(fā)CMV的活化并最終導(dǎo)致CMV活動性感染，其臨床表現(xiàn)以兒童CMV肺炎最為常見[10]。兒童CMV肺炎的病理改變主要集中在細支氣管，可以出現(xiàn)細支氣管周圍炎，臨床表現(xiàn)則與間質(zhì)性肺炎相似，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽并伴有肺哮鳴音，嚴重者可以出現(xiàn)呼吸困難。在早期由于缺乏特異性的檢測指標(biāo)，因此極易引起誤診，造成病情延誤[13-14]。同時，CMV具有泛嗜性的特點，特別是在免疫力低下的患者中，CMV感染可以引起多個器官的病變，而且臨床表現(xiàn)往往不典型，臨床上鑒別診斷CMV感染十分困難。如果長時間不能得到有效的救治，還可以并發(fā)兒童免疫功能的損傷，嚴重危害兒童的身體健康。因此，臨床上應(yīng)對兒童CMV性肺炎引起高度重視，及時完善相關(guān)檢查，做好鑒別診斷并采用適當(dāng)治療方案，實現(xiàn)搶先治療，以改善兒童病情及預(yù)后，提高兒童生存質(zhì)量。

白細胞黏附分子是介導(dǎo)細胞之間的相互接觸和結(jié)合分子的統(tǒng)稱，其主要是存在于細胞表面或者細胞基質(zhì)中的糖蛋白，發(fā)揮作用形式是通過受體與配體的相結(jié)合介導(dǎo)細胞間的信號傳導(dǎo)。當(dāng)受體與配體結(jié)合后，細胞之間、細胞與周圍的基質(zhì)間和細胞-基質(zhì)-細胞之間的相互黏附，參與了細胞信號的整個轉(zhuǎn)導(dǎo)與活化的過程。在中性粒細胞表面有多種黏附分子，其中包括整合素家族、選擇素家族、黏蛋白樣家族、免疫球蛋白超家族和鈣粘素家族[15]。其中整合素是一種能夠介導(dǎo)細胞與其周圍環(huán)境之間的連接的跨膜受體。在細胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中，整合素可以將細胞外基質(zhì)的信號等有關(guān)信息傳入細胞，同時也可以由細胞內(nèi)向細胞外傳遞信號。整合素是由α(120 000～185 000)和β(90 000～110 000)兩個亞單位形成的異二聚體[16]。CD11b是整合素家族中β2亞族的中的一員，相對分子質(zhì)量約為160 000，基因位點在16號染色體短臂p11～p13.1，單核巨噬細胞和自然殺傷(NK)細胞表面均可以表達，成熟的中性粒細胞表面CD11b處于非活化狀態(tài)，在在體內(nèi)的其他細胞中僅有低水平表達。CD11b的活化與多種因素有關(guān)，其中包括補體片段、一些趨化因子和細菌代謝的內(nèi)毒素和脂多糖等，當(dāng)白細胞與上述小分子接觸后在數(shù)分鐘內(nèi)就可以高表達CD11b，因此CD11b的上調(diào)被認為是炎癥相關(guān)的早期標(biāo)志物之一。因此，CD11b的上調(diào)被認為是中性粒細胞被激活的標(biāo)志。有研究報道，新生兒在重癥肺炎的早期就有中性粒細胞表面CD11b高表達，且隨著病情好轉(zhuǎn)CD11b表達逐漸降低[17]。這一過程提示CD11b在重癥肺炎早期就可發(fā)生變化。兒童發(fā)生CMV病毒感染時，病毒的代謝產(chǎn)物可以引起機體內(nèi)腫瘤壞死因子α等炎癥趨化因子的高表達，這些炎癥因子則可以誘發(fā)早期中性粒細胞表面黏附分子CD11b的變化[18]。但是，這個過程在體內(nèi)存在時間很短，如果當(dāng)誘發(fā)因素沒有得到有效控制，CD11b上調(diào)的現(xiàn)象會隨著時間而下降，這一過程可能與中性粒細胞轉(zhuǎn)變?yōu)槟摷毎ド飳W(xué)活性有關(guān)。

由于兒童CMV感染型肺炎的特點為隱匿性發(fā)病，早期的臨床癥狀不典型，不易被察覺，因此兒童CMV感染性肺炎在早期往往不能被及時發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)臨床癥狀后，感染程度加重，CD11b的表達下調(diào)。CD11b診斷兒童CMV肺炎活動性感染的ROC曲線下面積為0.991，具有較好的診斷價值，特異度可達98.34%，即出現(xiàn)CMV活動性感染后中性粒細胞表面CD11b表達明顯降低，對鑒別診斷CMV活動性感染具有重要價值；而診斷CMV高活動感染ROC曲線下面積為僅0.612，診斷價值不如CMV活動性感染高，但敏感度仍較高可達100%。

綜上所述，兒童CMV感染性肺炎外周血中性粒細胞表面CD11b表達下調(diào)這一現(xiàn)象對CMV活動感染的診斷有重要意義。配合中性粒細胞表面CD11b指標(biāo)可以有效地提高CMV感染的檢出率，使兒童在早期能夠得到有效地診治，實現(xiàn)“搶先治療”。

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ExpressionandsignificanceofneutrophilsurfaceadhesionmoleculesCD11bfromcytomegalovirusinfectioninchildren

YangLina

DepartmentofLaboratory，theThirdPeople’sHospitalofLiaoyang，Liaoyang111010，China

YangLina，Email：lindayony2014@hotmail.com

ObjectiveTostudydiagnosisandclinicalsignificanceofneutrophilsurfaceadhesionmoleculesincludingCD11bfromcytomegalovirus(CMV)infectionpneumoniainchildren.MethodsBloodsampleswerecollectedfrom113childrenofCMVinfectionpneumoniaincludingmale80andfemale40casesbetweenNovember2014andOctober2016.Healthymale21casesandfemale12casesservedashealthycontrolgroupfromoutpatientsinthesameperiod.ChildrenofCMVinfectionpneumoniaweredividedintohighactiveCMVinfectiongroup，CMVinfectiongroupandthenegativecontrolgroup，andhealthygroupasnormalcontrolgroupaccordingtoCMV-pp65antigendetection.NeutrophilsurfaceadhesionmoleculeCD11bwasanalyzedbyflowcytometryandcomparedrespectively.ROCcurveofCD11binchildrenofCMVinfectionpneumoniawasmade.ResultsTheexpressionratioofCD11binhighactiveCMVinfectiongroupwassignificantlydifferentascomparedwithnegativecontrolgroupandcontrolgroup(P<0.05);optimalcut-offvalueofCD11binhighactiveCMVinfectiongroupwas40.11%，thesensitivitywas100%，thespecificityinhighactiveCMVinfectiongroupwas63.19%，andtheareaundertheROCwas0.612.Theoptimalcut-offvalueofCD11binCMVinfectiongroupwas63.87%，thesensitivityofCD11bwas92.87%，thespecificityofCD11bwas98.34%，andtheareaunderofROCofCD11bwas0.991.ConclusionTheneutrophilsCD11bexpressioninchildrenofCMVinfectionpneumoniaisdownregulation.CD11bexpressioncanbeusedasalaboratorydiagnosisbasisofchildren’sCMVinfection.

pneumonia，viral;cytomegalovirus;cytokines;flowcytometry

楊立娜，Email：lindayony2014@hotmail.com

R

A

1004-583X(2017)08-0703-04

10.3969/j.issn.1004-583X.2017.08.014

2017-05-05 編輯:武峪峰