莫吉祥+敖彩民+彭杰

摘 要：目的：分析在胰腺癌腫瘤浸潤的淋巴細胞預后方面CEACAM6和FOXP3產(chǎn)生的影響。方法：搜集2015年12月至2016年12月在中南大學湘雅醫(yī)院治療的胰腺癌患者45例，通過免疫組織的化學法對患者胰腺癌組織之中RO、CEACAM6、CD45、FOXP3、CD8與CD3表達進行檢測，同時探討各種指標和病理特征、預后之間的相關(guān)性。結(jié)果：FOXP3的表達和CD45RO、CD3以及CD8陽性T細胞低浸相關(guān)，但是和CD4+T的細胞浸潤沒有顯著相關(guān)性；CEACAM6高表達和CD45RO+T細胞、CD8+T細胞低浸潤相關(guān)，和CD4+T細胞、CD3+T細胞浸潤沒有明顯的關(guān)系。結(jié)論：腫瘤浸潤的淋巴細胞浸潤密度和胰腺癌預后、臨床分期以及組織分化息息相關(guān)，CEACAM6與FOXP3和胰腺癌的惡性程度有著相關(guān)性，且都可以對腫瘤浸潤的淋巴細胞進行抑制。

中圖分類號：R735.9文獻標識碼：A

一、引言

胰腺癌消化系統(tǒng)的惡性腫瘤，主要特點是生存期比較短、早期診斷難度大、手術(shù)切除率比較低等。即便近幾年在胰腺癌病理生理研究方面取得一定成果，但死亡率與發(fā)病率沒有變化。胰腺癌免疫功能研究始終是一個熱點，通常腫瘤浸潤的淋巴細胞（tumor infiltrating lymphocytes，TIL）主要是由腫瘤組織分離而來，含有腫瘤特異性的細胞毒性T 淋巴細胞與自然殺傷（natural killer，NK）的細胞，有抗腫瘤的反應。研究中指出，腫瘤中浸潤CD45RO+T 細胞、CD3+T 細胞以及CD8+T細胞和預后有一定關(guān)系，調(diào)節(jié)性的T細胞（regulatory T cells，T reg）有免疫抑制的效果，特異性的標志屬于核轉(zhuǎn)錄因子的叉頭盒P3（（forkhead box P3，F(xiàn)OXP3），Treg高表達和胰腺癌、卵巢癌以及結(jié)直腸癌惡性程度有正相關(guān)關(guān)系。癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）屬于蛋白家族，和細胞黏附有關(guān)，因此，也叫做癌胚抗原相關(guān)的黏附分子（CEA-related cell adhesion molecule，CEACAM）。本文將2015年12月至2016年12月在中南大學湘雅醫(yī)院治療的胰腺癌患者45例作為此次的探究對象，簡析了在胰腺癌腫瘤浸潤的淋巴細胞預后方面CEACAM6和FOXP3產(chǎn)生的影響。

二、研究資料和方法

1.研究的資料

搜集2015年12月至2016年12月在中南大學湘雅醫(yī)院治療的胰腺癌患者45例，所有患者術(shù)前均未接受放化療或免疫治療。有25例患者是男性，有20例患者是女性；患者的年齡跨度在44～78歲之間，年齡均值是（69±2.91）歲。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（Union for International Cancer Control，UICC） 的分期實施TNM 分期，25例患者是Ⅰ期與Ⅱ期，20例患者是Ⅲ期與Ⅳ期。按照組織病理的分級，有17例是高分化，有28例是中低分化。

試劑：兔抗人CD8 mAb、小鼠抗人CD3的單克隆抗體（monoclonal antibody，mAb）以及兔抗人CD4的多克隆抗體，都選自Santa Cruz公司，小鼠抗人的FOXP3mAb、小鼠抗人的CD45ROmAb以及兔抗人CEACAM6mAb都來自Abcam公司，而Chem Mate EnvisionTM兔/小鼠標所用免疫組織的化學試劑盒采購于Dako公司。

2.方法

將胰腺癌的石蠟包埋組織切片，大小為4微米，經(jīng)脫蠟與水化，然后用高壓鍋加熱，修復抗原。通過30mL/L的雙氧水對內(nèi)源性的過氧化物酶進行滅活，添加50升兔抗人CD8mAb（1∶100）、滅小鼠抗人CD3 mAb（1∶100）以及兔抗人CD4多克隆抗體（1∶100），同時加入小鼠抗人FOXP3 mAb （1∶50）、CD45RO mAb（1∶10）與兔抗人CEACAM6mAb（1∶400），在37攝氏度條件下孵育1個小時，在室溫條件下孵育30分鐘。應用DAB來顯色，用蘇木精襯染，將人扁桃體的組織作為陽性對照，而省略一抗當做空白的對照。

3.觀察的指標

應用半定量的方法對FOXP3、CD3、CEACAM6、CD4、CD45RO與CD8浸潤、表達進行判斷，按照染色的強度分成3（棕色）、2（棕黃色）、1（淺黃色）與0（無色）。按照陽性細胞百分比分成：4（≥75%）、3（50%～74%）、2（25%～49%）、1（5%～24%）與0（0%～5%）。分數(shù)相加總分劃分為：（+++）為5～7分、（++）為3～4分、（+）為2分、0～1分為（-），（-）與（+）代表陰性的表達，（++）代表弱陽性的表達，（+++）代表強陽性的表達。

4.應用統(tǒng)計軟件統(tǒng)計所得數(shù)據(jù)

本次實驗得出數(shù)據(jù)都需要實施分析與整理，然后使用統(tǒng)計軟件SPSS19.0進行統(tǒng)計學分析，對實驗研究中出現(xiàn)的所有相關(guān)數(shù)據(jù)均進行整理和分析，通過標準差（x±s）來表示計量資料，通過卡方（x2）表示計數(shù)資料，應用獨立的樣本t對組間的構(gòu)成比進行檢驗，如果實驗所得數(shù)據(jù)經(jīng)對比以后存在統(tǒng)計意義，用P<0.05表示。

三、結(jié)果

1.免疫組織的化學染色結(jié)果和臨床病理相關(guān)性

在Ⅲ期與Ⅳ期胰腺癌之中，F(xiàn)OXP3與CEACAM6的高表達比較高，與Ⅰ、Ⅱ期相比差異比較顯著，P<0.05；在中低分化中胰腺癌之中，F(xiàn)OXP3與CEACAM6的高表達比較高，與高分化中FOXP3與CEACAM6的高表達相比，有顯著差異，P<0.05（見表1）。

2.FOXP、CEACAM6和T細胞相關(guān)性

FOXP3的表達和CD45RO、CD3以及CD8陽性T細胞低浸相關(guān)，但是和CD4+T的細胞浸潤沒有顯著相關(guān)性；CEACAM6高表達和CD45RO+T細胞、CD8+T細胞低浸潤相關(guān)，和CD4+T細胞、CD3+T細胞浸潤沒有明顯的關(guān)系（見表2）。

四、討論

腫瘤浸潤的淋巴細胞浸潤目的可以反映宿主對癌細胞免疫應答的強弱，CD45RO、CD3以及CD8與陽性T細胞浸潤、胰腺癌發(fā)展、總體預后有著密切相關(guān)性。本次研究顯示，F(xiàn)OXP3的表達和CD45RO、CD3以及CD8陽性T 細胞低浸相關(guān)，但是和CD4+T的細胞浸潤沒有顯著相關(guān)性；CEACAM6高表達和CD45RO+T細胞、CD8+T細胞低浸潤相關(guān)，和CD4+T細胞、CD3+T細胞浸潤沒有明顯的關(guān)系。轉(zhuǎn)錄因子的FOXP3 基因與編碼產(chǎn)物Scurfin 會參與到Treg中樞性生成過程中，同時會對Treg免疫調(diào)節(jié)的功能發(fā)揮產(chǎn)生影響。通常FOXP3表達和惡性腫瘤不良預后相關(guān)，F(xiàn)OXP3一般是在抑制白細胞介素基礎(chǔ)上，對T細胞活化增殖進行抑制。本次研究還顯示，在Ⅲ期與Ⅳ期胰腺癌之中FOXP3與CEACAM6的高表達比較高，與Ⅰ、Ⅱ期相比差異比較顯著，P<0.05。研究結(jié)果顯示，在Ⅲ期與Ⅳ期FOXP3表達相對較高。

五、結(jié)語

綜上所述，腫瘤浸潤的淋巴細胞浸潤密度和胰腺癌預后、臨床分期以及組織分化息息相關(guān)，CEACAM6與FOXP3和胰腺癌惡性程度有著相關(guān)性，兩者都可以對腫瘤浸潤的淋巴細胞進行抑制。

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