黃佳斯，石磊，唐愛(ài)國(guó)，胡敏，唐玲麗，梁好，李影

(中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院a.檢驗(yàn)科，b.病理科，長(zhǎng)沙 410011)

·臨床實(shí)驗(yàn)研究·

膠體金免疫層析法檢測(cè)血清隱球菌抗原在肺隱球菌病診斷中的應(yīng)用價(jià)值

黃佳斯a，石磊b，唐愛(ài)國(guó)a，胡敏a，唐玲麗a，梁好a，李影a

(中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院a.檢驗(yàn)科，b.病理科，長(zhǎng)沙 410011)

目的 探討血清隱球菌抗原-膠體金免疫層析法(CrAg-LFA)在肺隱球菌病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 回顧性研究2016年1至11月中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院收治的肺隱球菌病及非肺隱球菌病患者共547例，采用CrAg-LFA篩查血清中隱球菌抗原，分析血清CrAg-LFA對(duì)肺隱球菌病診斷的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值。結(jié)果 10例肺隱球菌病組患者采用CrAg-LFA測(cè)定陽(yáng)性8例，敏感性為80.0%(8/10)；非肺隱球菌病組患者537例，CrAg-LFA測(cè)定陰性534例，特異性為99.4%(534/537)，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為72.7%和99.6%。結(jié)論 CrAg-LFA是一種簡(jiǎn)單快速的肺隱球菌病篩查試驗(yàn)，可用于肺隱球菌病的輔助診斷。

肺隱球菌??；隱球菌抗原；膠體金法

隨著免疫功能低下患者增多，肺隱球菌病(pulmonary cryptococcosis，PC)發(fā)生率呈增加趨勢(shì)[1]。隱球菌在肺組織內(nèi)呈局限性浸潤(rùn)感染，傳統(tǒng)的痰墨汁染色和培養(yǎng)陽(yáng)性率很低[2]。血清學(xué)隱球菌莢膜抗原檢測(cè)對(duì)隱球菌感染具有較好的輔助診斷價(jià)值。文獻(xiàn)報(bào)道，隱球菌抗原-膠體金免疫層析法(cryptococcal antigen lateral flow immunochromatographic assay，CrAg-LFA)測(cè)定腦脊液樣本對(duì)隱球菌性腦膜炎的診斷敏感性和特異性達(dá)到95%左右[3]，而血清樣本CrAg-LFA對(duì)PC的診斷效能?chē)?guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道。本研究應(yīng)用CrAg-LFA法結(jié)合臨床病理穿刺結(jié)果，探討血清CrAg-LFA在PC診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 回顧性研究中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院呼吸科2016年1月至11月確診PC組10例，男7例，女3例，年齡(47.1±11.6)歲，肺組織病理組織學(xué)染色均發(fā)現(xiàn)隱球菌橢圓形孢子樣結(jié)構(gòu)，孢子周邊可見(jiàn)厚莢膜；非PC組537例，其中男335例，女202例，年齡(42.5±13.1)歲，組織病理或臨床診斷排除PC，包括肺炎223例，慢性阻塞性肺病62例，肺癌43例，肺結(jié)核33例和支氣管炎35例，其余肺病99例，非肺部疾病42例。根據(jù)2010年《隱球菌感染診治專家共識(shí)》中PC診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]進(jìn)行診斷。

1.2 標(biāo)本采集 采集患者空腹靜脈血約4 mL于無(wú)菌干燥采血管中，3 000×g離心10 min取血清。

1.3 血清隱球菌抗原檢測(cè) 隱球菌抗原檢測(cè)(膠體金法)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Immuno-Mycologics公司。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行：將1滴樣本稀釋液加入到無(wú)菌試管中，加入40 μL血清樣本進(jìn)行混合，將隱球菌抗原檢測(cè)試紙條檢測(cè)端沒(méi)入混合樣本液中，10 min后讀取結(jié)果。結(jié)果判讀：檢測(cè)條帶和對(duì)照條帶均出現(xiàn)為陽(yáng)性；僅出現(xiàn)對(duì)照條帶為陰性；若對(duì)照條帶未出現(xiàn)，說(shuō)明檢測(cè)無(wú)效，應(yīng)重新檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。根據(jù)四格表資料計(jì)算血清CrAg-LFA診斷PC的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。

2 結(jié)果

10例PC組患者中8例血清CrAg-LFA法檢測(cè)呈陽(yáng)性(強(qiáng)陽(yáng)性)，2例為陰性；537例非PC組患者中3例血清CrAg-LFA法檢測(cè)弱陽(yáng)性，其余534例均為陰性。見(jiàn)表1。血清CrAg-LFA診斷PC的敏感性為80.0%，特異性為99.4%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為72.7%，陰性預(yù)測(cè)值為99.6%。

表1 血清CrAg-LFA對(duì)肺隱球菌病檢測(cè)結(jié)果

3 討論

目前血清學(xué)隱球菌莢膜抗原檢測(cè)方法主要包括乳膠凝集法(LA)、酶聯(lián)免疫法(EIA)和側(cè)向?qū)游龇?CrAg-LFA)[5]。研究表明，CrAg-LFA比LA法和EIA具有更高的準(zhǔn)確性，其在室溫下穩(wěn)定，10 min即可出結(jié)果，對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的要求不高，易于操作[6]。本研究10例PC患者中8例血清CrAg-LFA測(cè)定為強(qiáng)陽(yáng)性，2例為陰性。陰性結(jié)果可能與隱球菌在肺部局限性浸潤(rùn)生長(zhǎng)，隱球菌抗原較難釋放入血有關(guān)。因此，CrAg-LFA測(cè)定陰性，臨床高度懷疑PC時(shí)，仍需結(jié)合患者宿主因素及其他指標(biāo)綜合判斷。537例非PC組患者中3例血清CrAg-LFA測(cè)定均為弱陽(yáng)性，提示隱球菌抗原滴度較低或某些因素導(dǎo)致的交叉反應(yīng)。以上3例患者最終診斷為耶氏肺孢子蟲(chóng)病、社區(qū)獲得性肺炎伴類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和肺占位性病變，病理組織學(xué)均提示非隱球菌感染，提示耶氏肺孢子蟲(chóng)或類(lèi)風(fēng)濕因子可能在一定程度上與隱球菌抗原存在交叉反應(yīng)，但尚需大樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步論證。本研究結(jié)果顯示血清CrAg-LFA法診斷PC的敏感性和特異性分別為80.0%和99.6%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為72.7%和99.6%，提示該方法對(duì)PC有較好的輔助診斷價(jià)值，可應(yīng)用于PC的快速篩查。

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(本文編輯：周萬(wàn)青，劉群)

10.13602/j.cnki.jcls.2017.07.10

黃佳斯，1986年生，女，技師，碩士研究生，從事凝血機(jī)制研究。

李影，主管技師，碩士，E-mail：liying.xiangya@163.com。

R446.5

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2017-03-13)