李燕華， 范秉林， 韋俊杰， 李曉峰， 封 渾， 韋 旋

急性腦梗死患者血清IL-35、MMP-9與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系

李燕華， 范秉林， 韋俊杰， 李曉峰， 封 渾， 韋 旋

目的 探討急性腦梗死患者血清白細(xì)胞介素-35(IL-35)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系。方法 選擇急性腦梗死患者89例，應(yīng)用彩色多普勒超聲檢查頸動(dòng)脈斑塊，根據(jù)頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性分為易損斑塊組和穩(wěn)定斑塊組。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)患者血清IL-35、MMP-9水平，并分析IL-35、MMP-9與斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系。結(jié)果 頸動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊組的患者41例，穩(wěn)定斑塊組的患者48例。易損斑塊組血清IL-35水平(17.89±7.21 ng/ml)明顯高于穩(wěn)定斑塊組(9.08±3.45 ng/ml)(P<0.05)。MMP-9水平易損斑塊組(430.36±72.78 ng/ml)亦顯著高于穩(wěn)定斑塊組(305.16±45.63 ng/ml)(P<0.01)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 腦梗死患者血清IL-35、MMP-9水平可能與頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性有關(guān)。

腦梗死； 白細(xì)胞介素-35； 基質(zhì)金屬蛋白酶9； 頸動(dòng)脈硬化斑塊

頸動(dòng)脈粥樣硬化是腦梗死的重要病因之一。國(guó)內(nèi)外大量研究顯示[1]，炎性反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化及腦血管病的發(fā)病過(guò)程中起著重要作用，促炎和抗炎之間的不平衡與動(dòng)脈硬化的發(fā)生發(fā)展及斑塊的破裂、血栓形成密切相關(guān)。血清白細(xì)胞介素-35(IL-35)是2007年發(fā)現(xiàn)的一種新型抗炎因子，與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制功能密切相關(guān)[2～4]。研究發(fā)現(xiàn)，IL-35在頸動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊中大量表達(dá)[5]。為此，本研究以急性腦梗死患者為研究對(duì)象，探討血清IL-35、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2016年2月～2016年7月在廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院并發(fā)病3 d的急性腦梗死患者89例[男性50例，女性39例，平均年齡(67±5)歲]，所有病例均符合我國(guó)2010年《中國(guó)急性缺血性卒中診治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，并且經(jīng)頭部CT、MRI證實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)腔隙性腦梗死、無(wú)癥狀性腦梗死及原因不明性腦梗死患者、出血性腦梗死、動(dòng)脈炎及其他原因引起的腦梗死、腦栓塞及合并有各種凝血功能異常性疾病，曾行溶栓治療的腦梗死患者；(2)急性心肌梗死者或心絞痛患者、房顫患者、瓣膜性心臟病、擴(kuò)張型心臟病或伴有嚴(yán)重心臟疾病患者；(3)合并急慢性感染、血栓性疾病、嚴(yán)重的肝腎功能不全者、惡性腫瘤患者、風(fēng)濕性疾病患者、自身免疫性疾病者；高熱以及使用激素、鴉片類藥物或免疫抑制劑者。

1.2 標(biāo)本采集 清晨空腹抽取靜脈血，標(biāo)本置入肝素鈉抗凝管內(nèi)，以3000 r/min行高速離心10 min后，取上清液置-80 ℃冰箱保存待測(cè)。

1.3 頸動(dòng)脈硬化斑塊的檢測(cè)和分組 頸動(dòng)脈超聲檢查采用LOGIQ E9彩色多普勒超聲診斷儀進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)。頸動(dòng)脈內(nèi)膜中膜厚度是指縱斷面上測(cè)得的頸動(dòng)脈后壁內(nèi)膜和中膜的厚度，將內(nèi)膜局部隆起增厚，向管腔內(nèi)突出部分定義為動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。參照文獻(xiàn)[7]，根據(jù)頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性分為兩組：易損斑塊組和穩(wěn)定斑塊組；易損斑塊組是指頸動(dòng)脈斑塊呈低回聲的患者，而穩(wěn)定斑塊組是指頸動(dòng)脈斑塊呈高回聲的患者。為了減少測(cè)量的誤差，所有頸動(dòng)脈斑塊的檢測(cè)均由同一個(gè)醫(yī)生操作。

1.4 血清IL-35水平的檢測(cè) ELISA 試劑盒購(gòu)自武漢華美。采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血漿IL-35水平，操作過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.5 血清MMP-9水平測(cè)定 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法，按照武漢華美公司人MMP-9 ELISA試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1 頸動(dòng)脈超聲測(cè)量結(jié)果 89例腦梗死患者中，易損斑塊組患者41例，穩(wěn)定斑塊組患者48例。兩組患者性別、年齡、高血壓等基本資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性，兩組間資料比較(見表1)。

2.2 兩組患者血清IL-35、MMP-9水平的比較 易損斑塊組患者血清IL-35 水平(17.89±7.21)ng/ml明顯高于穩(wěn)定斑塊組(9.08±3.45)ng/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。易損斑塊組血清MMP-9水平(430.36±72.78)ng/ml，亦顯著高于穩(wěn)定斑塊組(305.16±45.63)ng/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(見表2)。

表1 急性腦梗死患者基本資料對(duì)比

表2 兩組患者血清IL-35和MMP-9水平的比較

3 討 論

腦血管病主要的發(fā)病基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化。目前公認(rèn)[1]，動(dòng)脈粥樣硬化的早發(fā)和好發(fā)部位多為頸動(dòng)脈，是動(dòng)脈硬化中最常見而重要的類型。越來(lái)越多的研究表明[8]，炎癥貫穿于動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的全過(guò)程，大量的炎性因子在動(dòng)脈粥樣硬化的形成、發(fā)展及斑塊的不穩(wěn)定性中起到至關(guān)重要的作用。一般認(rèn)為在腦梗死發(fā)病后3 d，缺血區(qū)域炎性細(xì)胞浸潤(rùn)達(dá)到高峰，所以本研究以急性腦梗死3 d的患者作為研究對(duì)象，同時(shí)需排除目前已知會(huì)影響IL-35和MMP-9的因素。此外，考慮到IL-35可能與動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)，并同時(shí)檢測(cè)與動(dòng)脈硬化密切相關(guān)的促炎因子MMP-9的表達(dá)，初步探討它們可能在動(dòng)脈粥樣斑塊中的作用機(jī)制。

腦梗死的發(fā)生與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性密切相關(guān)。易損斑塊又稱為不穩(wěn)定斑塊，在B超下呈低回聲或等回聲，它是指具有破裂傾向，易于發(fā)生血栓形成且進(jìn)展迅速的危險(xiǎn)性斑塊，其內(nèi)部含有大量脂質(zhì)，易潰爛、出血和脫落。近年來(lái)，斑塊的組成和細(xì)胞外基質(zhì)的降解成為研究的熱點(diǎn)。而細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)度降解是動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊形成的一個(gè)重要因素。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)在早期動(dòng)脈粥樣硬化形成過(guò)程中起到了重要的作用，是降解細(xì)胞外基質(zhì)的主要蛋白水解酶之一，其中與動(dòng)脈硬化關(guān)系密切的是MMP-9，其幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)中的各種蛋白成分[9]。已有研究表明[10]，腦梗死患者血清MMP-9水平與頸動(dòng)脈斑塊的穩(wěn)定性有關(guān)，參與了腦梗死后再灌注損傷、腦水腫損傷過(guò)程。本研究顯示，急性腦梗死患者易損斑塊組血清MMP-9水平比穩(wěn)定斑塊組顯著升高，這與既往研究結(jié)果相一致[7]。表明MMP-9與不穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊更有相關(guān)性，在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中具有重要作用，提示腦梗死患者易損斑塊的發(fā)生伴有MMP-9的過(guò)度表達(dá)，并可能與血栓形成存在因果聯(lián)系。

IL-35是2007年發(fā)現(xiàn)的IL-12家族的一個(gè)新成員，由Niedbaia和Collison兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室證實(shí)EBI3 與IL-12 p35 異二聚體，是一種新型的抗炎因子，與調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制功能密切相關(guān)，目前認(rèn)為其可有效緩解膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎和炎癥性腸病[2～4]。已有研究表明，IL-35在人類主要由調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞分泌，活化的效應(yīng)性T 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等也可分泌少量的IL-35[11]。 IL-35 的抗炎作用在關(guān)節(jié)炎[2]、結(jié)腸炎[12]和哮喘[13]等多種實(shí)驗(yàn)性炎癥疾病中也得到證實(shí)。IL-35在動(dòng)物小鼠表達(dá)于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞而非效應(yīng)性T細(xì)胞，是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的特征性功能因子[3]。并且提示了EBI3和由EBI3參與組成的細(xì)胞因子可能在一些炎癥相關(guān)的疾病中具有潛在的靶點(diǎn)。目前已發(fā)現(xiàn)，IL-35的EB13亞基在頸動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊中大量表達(dá)[5]，研究發(fā)現(xiàn)IL-35不僅與冠心病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，且與冠心病患者的預(yù)后密切相關(guān)[14]。最新的研究顯示IL-35在吉蘭-巴雷患者血清的表達(dá)下降，表明IL-35與吉蘭-巴雷的炎性發(fā)病機(jī)制有關(guān)[15]。但I(xiàn)L-35作為新發(fā)現(xiàn)的抗炎因子，其與動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死的發(fā)病是否相關(guān)，目前尚未見報(bào)道。本研究通過(guò)對(duì)急性腦梗死患者血清IL-35水平和頸動(dòng)脈斑塊的檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腦梗死患者易損斑塊組血清IL-35水平比穩(wěn)定斑塊組明顯升高，而且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示IL-35 可能與動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程和斑塊的穩(wěn)定性有關(guān)，對(duì)頸動(dòng)脈斑塊的穩(wěn)定性可能具有保護(hù)作用。盡管如此，從結(jié)果中我們明顯看出腦梗死后MMP-9仍相對(duì)被過(guò)度激活，其增高表達(dá)的程度顯著高于IL-35，表明了不穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成存在促炎因子和抗炎因子之間的平衡失調(diào)。結(jié)合我們的研究結(jié)果，推測(cè)在急性腦梗死發(fā)生過(guò)程中，動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊的脫落可能同時(shí)存在促炎因子和抗炎因子兩個(gè)活化過(guò)程，促炎因子活性占優(yōu)勢(shì)，由此觸發(fā)一系列炎癥反應(yīng)，最終誘發(fā)缺血性炎性損傷。

綜上，本研究結(jié)果提示急性腦梗死患者血清IL-35和MMP-9水平可能與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性密切相關(guān)，血清IL-35和MMP-9可能共同參與了動(dòng)脈粥樣硬化的形成過(guò)程，血清IL-35和MMP-9表達(dá)升高對(duì)頸動(dòng)脈斑塊的穩(wěn)定性可能有一定的提示作用，IL-35可能是預(yù)示頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性的一種新的標(biāo)志物。但I(xiàn)L-35作為新型的抗炎因子與MMP-9之間有何聯(lián)系，它們是否作用于同一基因位點(diǎn)，機(jī)制如何，這有待進(jìn)一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床數(shù)據(jù)證實(shí)。

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Relationship between the levels of serum IL-35，MMP-9 and the stability of carotid arteriosclerotic plaque in acute cerebral infarction

LIYanhua，F(xiàn)ANBinglin，WEIJunjie，etal.

(DepartmentofNeurology，thePeople’sHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion，Nanning530021，China)

Objective To investigate the relationship between the levels of serum IL-35，MMP-9 and the stability of carotid arteriosclerotic plaque in acute cerebral infarction. Methods Carotid arteriosclerotic plaque was measured by color Doppler ultrasonography in 89 patients with acute cerebral infarction. They were divided into vulnerable plaque group and stable plaque group according to the carotid arteriosclerotic plaque stability. The serum levels of IL-35 and MMP-9 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Results There were 41 cases in vulnerable plaque group and 49 cases in stable plaque group. The serum level of IL-35 in vulnerable plaque group(17.89±7.21 ng/ml)was significantly higher than that in stable plaque group(9.08±3.45 ng/ml)(P<0.05)，and the serum level of MMP-9 in vulnerable plaque group(430.36±72.78 ng/ml)was significantly higher than that in stable plaque group(305.16±45.63 ng/ml)(P<0.01). Conclusion The serum level of IL-35、MMP-9 may be correlated with the stability of carotid arteriosclerotic plaque in acute cerebral infarction.

Cerebral infarction； IL-35； MMP-9； Carotid arteriosclerotic plaque

1003-2754(2017)07-0597-03

2017-03-26；

2017-06-20

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81560210)；廣西衛(wèi)計(jì)委資助項(xiàng)目(No. Z2015304)

(廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，廣西 南寧 530021) 通訊作者：李燕華，E-mail：lyhuaqq@163.com

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