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(河南省商業(yè)科學(xué)研究所有限責(zé)任公司 , 河南 鄭州 450002)

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SPE-UPLC同時(shí)測(cè)定飲料中8種合成色素

杜瑞，張亞勛，馮俊旗

(河南省商業(yè)科學(xué)研究所有限責(zé)任公司 , 河南 鄭州 450002)

采用弱陰離子交換固相萃取—超高效液相色譜法快速測(cè)定飲料中檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、靛藍(lán)、亮藍(lán)、赤蘚紅等8種合成色素含量。結(jié)果表明：8種色素在12 min內(nèi)良好分離；質(zhì)量濃度在1～50 μg/mL的范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2>0.999；方法回收率82%～101%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=7)均小于3%；該方法高效、快速、準(zhǔn)確，可滿足批量化檢測(cè)的需求。

固相萃取 ； 超高效液相色譜 ； 飲料 ； 合成色素

0 前言

在食品生產(chǎn)過程中添加食用色素可以有效改善食品的色澤，增加消費(fèi)者的食欲，提高食品價(jià)值[1]。食用色素分為天然色素和人工合成色素。天然色素是直接從動(dòng)植物組織中提取的色素，但穩(wěn)定性差，易受溫度、光照、氧化等影響[2]。而人工合成色素則是以苯、甲苯、萘等化工原料經(jīng)過一系列有機(jī)反應(yīng)而成，性能穩(wěn)定、色彩鮮艷、成本低廉。但多為含有偶氮鍵苯環(huán)或氧雜蒽結(jié)構(gòu)化合物，含有一定毒性[3]。我國(guó)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)合成色素的使用量有嚴(yán)格的規(guī)定，并且建立了相應(yīng)國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法[4-6]。目前，目前檢測(cè)色素最常用方法為高效液相色譜法[7-9]。

在色素前處理過程中，國(guó)標(biāo)采用聚酰胺粉吸附法和液液萃取法前處理，聚酰胺粉吸附法和液液萃取法(赤蘚紅)前處理繁瑣，耗時(shí)耗力，且回收率低。聚酰胺粉吸附的赤蘚紅極易被甲醇—甲酸溶液洗脫，因此赤蘚紅則需用液液分配法來處理。采用固相萃取進(jìn)行前處理，能夠很大程度減少前處理的工作量，同時(shí)也能夠通過凈化過程，最大程度減少樣品基質(zhì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果干擾，且回收滿足檢測(cè)需求，因此越來越多檢測(cè)工作者采用固相萃取進(jìn)行樣品前處理[10-12]。

本文采用弱陰離子交換固相萃取柱進(jìn)行樣品凈化，超高效液相色譜法(UPLC)進(jìn)行定性定量分析，可同時(shí)測(cè)定食品中8種人工合成色素，縮短了分析和前處理時(shí)間，減少了溶劑使用量，節(jié)省分析成本。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑

1290Ⅱ超高效液相色譜(配有二極管陣列檢測(cè)器，安捷倫科技公司)；ProElut PWA-2 SPE柱(150 mg/6 mL，迪馬科技公司，中國(guó))；檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)、赤蘚紅、靛藍(lán)等(標(biāo)準(zhǔn)品，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer)；甲醇(色譜級(jí)，賽默飛世爾科技公司，美國(guó))；甲酸、乙酸銨(色譜純，阿拉丁試劑，中國(guó))；實(shí)驗(yàn)用水均為超純水；飲料(某品牌，標(biāo)簽不含色素)。

1.2方法標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)、赤蘚紅、靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品各25 mg，用純水定容至25. 00 mL，配成1 mg /mL 的單標(biāo)儲(chǔ)備溶液?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液: 分別移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用純水定容至10 mL，得到1、5、10、25、50 μg /mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液溶液。

1.3儀器條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(3.0×100 mm，5 μm)；柱溫35 ℃；流動(dòng)相A為甲醇，B為0.02 mol/L的乙酸銨溶液(pH值為6.8)；流速為0.3 mL/min，測(cè)定波長(zhǎng)為254 nm，進(jìn)樣體積為3 μL。梯度洗脫條件見表1。

表1 梯度洗脫條件

1.4前處理

取1.0 g樣品，加入10 mL水、5 mL甲醇和3 mL甲酸混勻，待凈化。分別先用5 mL甲醇、5 mL 10%甲酸水活化PWA-2 SPE柱；然后加入待凈化液，棄去流出液；再加入5 mL甲醇，棄去流出液；用5 mL 15%氨水甲醇溶液洗脫；將洗脫液在50 ℃下氮吹干，用水定容至1 mL，過0.22 μm 水系濾膜，待測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1液相色譜圖

通過對(duì)液相條件優(yōu)化，選擇最佳的色譜條件，8種色素標(biāo)準(zhǔn)品色譜、加標(biāo)25 mg/kg色譜圖、基質(zhì)空白色譜圖如圖1所示。

A.標(biāo)準(zhǔn)品25 μg/mL B.加標(biāo)25 mg/kg C.基質(zhì)空白

2.2相關(guān)系數(shù)及檢出限

8種色素質(zhì)量濃度1～50 μg/mL范圍內(nèi)回歸方程及其精密度見表2。

表2 8種色素保留時(shí)間、回歸方程和方法檢出限及其精密度

由表2可知，在1～50 μg /mL范圍內(nèi)，8種色素的峰面積與質(zhì)量濃度呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2均>0.999，保留時(shí)間RSD均<0.28，峰面積RSD均<1，8種色素的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限(3S/N)及保留時(shí)間RSD和峰面積RSD見表2。同時(shí)從圖1(曲線A)和表2可以看出，采用超高效液相色譜大大減少了分析時(shí)間，由常規(guī)色譜的30 min減少到12 min，且基線分離，分離度>1.5，滿足檢測(cè)需要。

2.3方法回收率及精密度

在不含分析物本底的樣品中分別添加10 mg/kg和25 mg/kg 2個(gè)不同水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，上述每個(gè)添加水平做7次平行測(cè)定，計(jì)算含量和精密度見表3。本底色譜圖和25 mg/kg添加水平色譜圖見圖1(曲線B/C)。

表3 精密度與回收率(n=7)

結(jié)果表明，方法平均回收率為82%～101%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.4%～2.51%，由此可見該方法有較高的準(zhǔn)確性和可靠性。本實(shí)驗(yàn)采用ProElut PWA-2 SPE柱，采用弱陰離子交換機(jī)理出去雜質(zhì)，對(duì)非極性和弱酸性化合物有專屬性保留，同時(shí)對(duì)著色劑沒有不可逆的吸附，回收率高，赤蘚紅回收率在82%～89%。

3 小結(jié)

本方法選擇陰離子交換固相萃取—超高效液相色譜法對(duì)飲料中檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、靛藍(lán)、新紅、亮藍(lán)、赤蘚紅8 種人工合成色素進(jìn)行檢測(cè)。靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度良好；該方法較國(guó)標(biāo)方法簡(jiǎn)化了前處理過程，縮短分析時(shí)間，分離效果好，為食品添加劑食用色素的快速檢測(cè)提供依據(jù)。

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2017-04-17

杜 瑞(1987-)，男，助理工程師，從事食品安全檢測(cè)技術(shù)研究工作，電話：13939075382，E-mail:643007143@qq.com。