宋傳偉

甲狀腺結(jié)節(jié)應(yīng)用細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)與BRAF基因突變的診斷價(jià)值研究

宋傳偉

（山東菏澤市立醫(yī)院乳甲外科，山東 菏澤 274000）

目的 探討B(tài)RAF基因突變與細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)運(yùn)用在甲狀腺結(jié)節(jié)診斷中的臨床效果。方法 選擇甲狀腺結(jié)節(jié)患者101例為研究對(duì)象，術(shù)前均行BRAF基因突變與細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，將術(shù)后病理診斷結(jié)果作為基本依據(jù)，對(duì)其診斷價(jià)值進(jìn)行判斷。結(jié)果 細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢測(cè)診斷甲狀腺結(jié)節(jié)的陰性預(yù)測(cè)值為85.15%（86/101）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為88.12%（89/101）、誤診率為6.93%（7/101）、漏診率為25.74%（26/101）、符合率為84.16%（85/101）；聯(lián)合BRAF基因突變?cè)\斷的陰性預(yù)測(cè)值為97.03%（98/101）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為98.02%（99/101）、誤診率為0.99%（1/101）、漏診率為8.91%（9/101）、符合率為94.06%（95/101）；同時(shí)，BRAF基因突變和FANC單一診斷與兩者聯(lián)合診斷的符合率、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值等比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 臨床上給予甲狀腺結(jié)節(jié)患者細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)與BRAF基因突變聯(lián)合診斷可以提高準(zhǔn)確率。

BRAF基因突變；細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)；甲狀腺結(jié)節(jié)；陰性預(yù)測(cè)值；診斷價(jià)值

甲狀腺結(jié)節(jié)是比較常見(jiàn)的一種疾病，通常可以分為兩種類型，分別是良性結(jié)節(jié)和惡性結(jié)節(jié)，其中惡性結(jié)節(jié)的發(fā)病率較高，約為5%～15%左右，嚴(yán)重危害患者健康[1]。當(dāng)前在診斷甲狀腺結(jié)節(jié)時(shí)，細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)（FANC）是比較常用的一種檢查方法，但是因?yàn)槿恿可?，無(wú)法將病灶組織的全貌充分反映出來(lái)，尤其是判斷轉(zhuǎn)移病灶，其局限性較大，具有較高的漏診率。因此，本文研究了甲狀腺結(jié)節(jié)運(yùn)用BRAF基因突變與細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)診斷的臨床價(jià)值，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇本院2014年8月～2015年9月期間收治的101例甲狀腺結(jié)節(jié)患者為研究對(duì)象，結(jié)節(jié)直徑0.5～ 4.8 cm，平均（2.6±1.1）cm，年齡10～75歲，平均（42.4± 19.5）歲，其中男41例，女60例。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢測(cè) 指導(dǎo)患者保持仰臥位，墊高頸部，頭朝后仰，使穿刺部位充分暴露，找好穿刺點(diǎn)，并進(jìn)行標(biāo)記。常規(guī)消毒穿刺部位后，鋪無(wú)菌方巾，運(yùn)用利多卡因?qū)颊哌M(jìn)行局部麻醉，按照常規(guī)方法，在超聲引導(dǎo)下運(yùn)用負(fù)壓穿刺器對(duì)患者進(jìn)行穿刺取樣。需要注意的是，應(yīng)該將患者的實(shí)際病情作為基本依據(jù)，對(duì)聚焦部位、增益以及深度進(jìn)行調(diào)整，并且取樣時(shí)，將囊壁、囊實(shí)性結(jié)節(jié)以及微小鈣化作為重點(diǎn)部位，反復(fù)進(jìn)行5次提插抽吸。完成取樣后，及時(shí)送至病理科進(jìn)行涂片鏡檢，并且將甲狀腺病理細(xì)胞學(xué)Bethesda報(bào)告系統(tǒng)作為基本依據(jù)，對(duì)其進(jìn)行分類。

1.2.2 BRAF基因突變檢測(cè) 在超聲引導(dǎo)下進(jìn)行負(fù)壓穿刺取樣，運(yùn)用上海星科生物科技有限公司提供的BRAF基因V600E突變檢測(cè)試劑盒對(duì)BRAF基因突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。在UCSC Genome Bioinformatics中對(duì)BRAF基因序列進(jìn)行檢索，對(duì)引物進(jìn)行設(shè)計(jì)，下游：5’-GGC CAA AAA TTT AAT CAG TGG A-3’，上游：5’-TCA TAA TGC TTG CTC TGA TAG GA-3’，按照常規(guī)方法進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，使cDNA生成。操作的過(guò)程中，將試劑盒說(shuō)明書(shū)作為基本依據(jù)，進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)，對(duì)混合液進(jìn)行解凍，并且以5∶0.25∶20的比例均勻混合待測(cè)DNA樣品和Taq酶，然后運(yùn)用PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增條件：（72℃、20 s，58℃，35 s；93℃、25 s）31個(gè)循環(huán)；95℃、5 min；（72℃、20 s，62℃，20 s，95℃、25 s）15個(gè)循環(huán)。于58℃時(shí)對(duì)HEX和FAM信號(hào)進(jìn)行收集，其中陽(yáng)性為Ct＜28，陰性為Ct≥28。

1.3 觀察指標(biāo) d/（c+d）×100%=陰性預(yù)測(cè)值；a/（a+b）× 100%=陽(yáng)性預(yù)測(cè)值；b/（b+d）×100%=誤診率；c/（a+c）×100%=漏診率；（a+d）/總例數(shù)×100%=準(zhǔn)確度，其中a為真陽(yáng)性，b為假陽(yáng)性，c為假陰性，d為真陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS17.5統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計(jì)數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BRAF基因突變檢查與聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值比較 與FANC和BRAF基因突變單一檢查相比，聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值以及符合率均較高，且漏診和誤診率低，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 BRAF基因突變、FNAC檢查與聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值對(duì)比[%（n）]

2.2 手術(shù)病理結(jié)果與BRAF基因突變和FNAC檢查結(jié)果 經(jīng)術(shù)后病理診斷，本組的101例患者中，60例為良性病灶，其中8例為腺瘤、13例為慢性甲狀腺炎、39例為結(jié)節(jié)性甲狀腺腫；41例為惡性病變，其中14例為甲狀腺髓樣癌、27例為甲狀腺乳頭狀癌；FNAC檢查，34例為惡性、6例為可疑惡性、4例為可疑濾泡性腫瘤及濾泡性腫瘤、6例為細(xì)胞非典型病變、46例為良性病變、5例無(wú)法診斷；FANC聯(lián)合BRAF基因突變?cè)\斷的特異度和靈敏度分別為98.02%、90.10%。見(jiàn)表2。

表2 BRAF基因突變、FANC檢查與手術(shù)病理結(jié)果

3 討論

當(dāng)前臨床上在對(duì)甲狀腺良、惡性結(jié)節(jié)進(jìn)行鑒別診斷時(shí)，通常將功能變化、囊實(shí)性、病變范圍以及結(jié)節(jié)大小等作為基本依據(jù)，并且大部分依靠實(shí)驗(yàn)室化驗(yàn)、影像學(xué)掃描以及觸診綜合完成[2]。BRAF作為具有生物學(xué)活性的一組DNA序列，其中V600E點(diǎn)突變是比較常見(jiàn)的一種遺傳病變，與侵襲性疾病的相關(guān)性較高，并且有報(bào)道顯示，V600E點(diǎn)突變是誘發(fā)甲狀腺疾病癌變的重要因素之一，與患者預(yù)后有著密不可分的聯(lián)系[3]。相比較細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變而言，分子病理學(xué)的改變時(shí)間較早，檢測(cè)分子病理標(biāo)記物，在一定程度上能夠?qū)?xì)胞形態(tài)學(xué)取樣不佳和不典型導(dǎo)致的診斷偏差，從而提高診斷準(zhǔn)確率[4]。有研究發(fā)現(xiàn)，乳頭狀癌的發(fā)生和發(fā)展與BRAF突變密切相關(guān)，并且在乳頭狀癌患者中，BRAF突變的檢出率較高，約為29%～84%左右，而良性病變則不表達(dá)[5]。此外，BRAF突變與乳頭狀癌對(duì)周圍組織的高侵襲性相關(guān)，是預(yù)測(cè)中央淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率的一個(gè)重要因子，還能降低腫瘤細(xì)胞對(duì)放射性碘的攝取力，使治療失敗，是判斷預(yù)后的一個(gè)影響因素[6]。

在本次研究中，發(fā)現(xiàn)BRAF基因聯(lián)合細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)診斷的符合率明顯高于單一細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)，并且其漏診率和誤診率均較低。由此可見(jiàn)，在甲狀腺結(jié)節(jié)的臨床診斷中，聯(lián)合運(yùn)用細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)與BRAF基因突變?cè)\斷，能夠使準(zhǔn)確率提高，具有一定的推廣價(jià)值。

[1] 張博茗,林元強(qiáng),隋國(guó)慶.細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)聯(lián)合BRAF-(V600E)基因突變檢測(cè)在甲狀腺結(jié)節(jié)診斷中的價(jià)值[J].腫瘤影像學(xué), 2015,4（20）:259-263.

[2] 徐偉銘,楊佩濃,袁秋琦.細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)與BRAF基因突變對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)的診斷價(jià)值[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué),2016,5（12）:665-666.

[3] 陳思睿,曹仁賢.BRAF基因與甲狀腺癌分子診療的研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2013,2（22）:161-163.

[4] H Gharib,E Papini,R Valcavi,et al.American Association of Clinical Endocrinologists and Associazione Medici Endocrinologi medical guidelines for clinical practice for the diagnosis and management of thyroid nodules[J].Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism,2014,78(3):800-802.

[5] 羅雁,安寧,宋麗娟,等.FNAB聯(lián)合BRAF基因突變檢測(cè)在術(shù)前甲狀腺結(jié)節(jié)診斷中的應(yīng)用[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2016, 11（19）:1248-1251.

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.22.053