孫雪東，嚴一核，褚韋韋，張亦婷，應利君

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·論著·

血必凈通過Rho激酶信號通路對膿毒癥急性腎損傷后腎小管細胞的影響研究

孫雪東*，嚴一核，褚韋韋，張亦婷，應利君

目的 探討早期應用血必凈通過Rho激酶信號通路對膿毒癥急性腎損傷后腎小管細胞凋亡的保護作用。方法 2014年8月—2015年6月，54只雄性SD大鼠采用隨機數(shù)字表法分為假手術組、膿毒癥組、血必凈組，每組18只。膿毒癥組和血必凈組以盲腸結扎穿孔(CLP)法制造膿毒癥模型，膿毒癥組大鼠CLP后0.5 h尾靜脈注射0.9%氯化鈉溶液4 ml/kg；血必凈組大鼠CLP后0.5 h尾靜脈注射血必凈注射液4 ml/kg。造模后6、24 h每組分別選取9只大鼠采用激光多普勒血流儀測定血流灌注(BPU)情況，采用全自動生化儀檢測血肌酐、尿素氮、肌酐清除率(CrCl)，病理組織學檢測評定腎小管損傷評分，采用原位末端標記(TUNEL)法計算凋亡指數(shù)(AI)，Western blotting法檢測Rho相關卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK-1)、肌球蛋白磷酸酶靶亞基1(MYPT-1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的表達水平。結果 3組大鼠造模后6 h BPU及造模后24 h BPU、血肌酐、尿素氮、CrCl比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中造模后6 h，膿毒癥組大鼠BPU較假手術組升高，血必凈組大鼠BPU較假手術組升高、較膿毒癥組降低(P<0.05)；造模后24 h，膿毒癥組大鼠BPU較假手術組降低，膿毒癥組大鼠血肌酐、尿素氮、CrCl較假手術組升高，血必凈組大鼠尿素氮、CrCl較假手術組升高，血必凈組大鼠BPU較膿毒癥組升高，血必凈組大鼠血肌酐、尿素氮、CrCl較膿毒癥組降低(P<0.05)。造模后6 h，3組腎小管損傷評分、AI比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；造模后24 h，3組腎小管損傷評分、AI比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中膿毒癥組腎小管損傷評分、AI較假手術組升高，血必凈組腎小管損傷評分、AI較假手術組升高，血必凈組腎小管損傷評分、AI較膿毒癥組降低(P<0.05)。造模后6、24 h，3組ROCK-1、MYPT-1和Caspase-3表達水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中造模后6 h，膿毒癥組和血必凈組ROCK-1、MYPT-1和Caspase-3表達水平較假手術組升高(P<0.05)；造模后24 h，膿毒癥組ROCK-1、MYPT-1和Caspase-3表達水平較假手術組升高，血必凈組ROCK-1、MYPT-1表達水平較假手術組升高，血必凈組ROCK-1、MYPT-1和Caspase-3表達水平較膿毒癥組降低(P<0.05)。結論 早期應用血必凈可以通過Rho激酶信號通路減少腎小管細胞在膿毒癥進程中的凋亡，改善病理學改變，減輕膿毒癥導致的急性腎損傷。

急性腎損傷；膿毒癥；Rho相關激酶類；細胞凋亡

孫雪東，嚴一核，褚韋韋，等.血必凈通過Rho激酶信號通路對膿毒癥急性腎損傷后腎小管細胞的影響研究[J].中國全科醫(yī)學，2017，20(23)：2868-2874.[www.chinagp.net]

SUN X D,YAN Y H,CHU W W,et al.Effects of Xuebijing on tubular apoptosis via Rho-kinase signaling pathway in sepsis-induced acute kidney injure rats[J].Chinese General Practice，2017，20(23)：2868-2874.

本研究背景：

膿毒癥是重癥患者中發(fā)生急性腎損傷(AKI)最常見的原因,一旦發(fā)生多器官功能衰竭，其病死率極大增加。既往觀點認為腎組織缺血及腎前性灌注不足在膿毒癥AKI(SI-AKI)中起主導作用，治療方面也多只注重擴容及增強心輸出量以增加腎灌注。但最新早期膿毒癥研究發(fā)現(xiàn)腎組織灌注并沒有減少，即使在膿毒性休克的過程中，腎皮質及髓質的血流量仍能維持。而細胞凋亡通路的激活被認為是導致早期SI-AKI的重要原因，Rho激酶被認為是細胞內信號傳遞的分子啟動因子。本研究在膿毒癥模型早期予以中藥血必凈進行干預，觀察SI-AKI的病理學改變、腎小管細胞凋亡的變化以及在Rho激酶信號通路上相關蛋白的表達，結果對臨床具有一定的指導意義。

盡管重癥醫(yī)學飛速發(fā)展，膿毒癥和膿毒性休克仍然是ICU的主要死因，嚴重膿毒癥常引起多臟器功能不全，其病死率高達25%～80%[1]。由于細胞通路產(chǎn)生大量炎性因子的瀑布樣作用，因此傳統(tǒng)的治療方法常療效甚微。近來，細胞凋亡通路的激活被認為是導致早期急性膿毒性腎損傷的重要原因，Rho被認為是細胞內信號傳遞的分子啟動因子[2]。Rho的許多功能分子已經(jīng)被識別，Rho激酶的下游蛋白ROCK能夠磷酸化多種底物，包括磷酸化肌球蛋白輕鏈(MLC),介導肌動蛋白纖維的形成和各種細胞的表面黏附，Rho激酶信號通路參與細胞的凋亡[3-4]。血必凈注射液利用中藥多成分、多途徑和多靶點的優(yōu)勢，采取“菌、毒、炎”并治的方法廣泛應用于臨床的多臟器功能不全的保護，但對腎臟的保護機制仍未完全闡明[3]。本研究從細胞凋亡的角度出發(fā)，研究血必凈在Rho激酶信號通路上對膿毒癥急性腎損傷(SI-AKI)的保護作用，并探討其可能的機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 2014年8月—2015年6月，選取SPF級16～18周齡SD雄性大鼠54只，體質量(200±20)g，由浙江大學醫(yī)學院實驗動物中心提供和飼養(yǎng)，合格證號:SYXK(浙)2010-0126。實驗造模前在室溫20 ℃、相對濕度45%～70%的環(huán)境下，維持12 h/d光照，晝夜循環(huán)，自由進食、水；基礎飼料適應性喂養(yǎng)1周。本實驗通過醫(yī)院倫理委員會論證。

1.2 動物模型的制作和分組 參照文獻[5]以盲腸結扎穿孔(CLP)法制造膿毒癥模型。CLP后0.5 h大鼠精神軟弱，活動減少，毛色雜亂無光澤，呼吸稍促，喜飲水，解稀便作為動物模型成功的判定標準。采用隨機數(shù)字表法將大鼠分為假手術組、膿毒癥組、血必凈組，每組18只。假手術組麻醉后開腹翻動腸道，隨即關腹，術后0.5 h尾靜脈注射0.9%氯化鈉溶液4 ml/kg；膿毒癥組大鼠CLP后0.5 h尾靜脈注射0.9%氯化鈉溶液4 ml/kg；血必凈組大鼠CLP后0.5 h尾靜脈注射血必凈注射液(天津紅日藥業(yè)股份有限公司，10 ml/支，批準文號：國藥準字Z2004003)4 ml/kg。所有大鼠在術后常規(guī)予以尾靜脈注射30 ml/kg 0.9%氯化鈉溶液進行液體復蘇。

1.3 標本的留取和指標檢測

1.3.1 生化指標的檢測 造模后6、24 h每組分別隨機選取9只大鼠采用戊巴比妥(50 mg/kg)進行腹腔注射麻醉，破腹暴露腎臟，采用激光多普勒血流儀(ML191，ADI-澳大利亞)測定腎臟血流，記錄血流灌注(blood perfusion unit，BPU)情況，并采集腹主動脈血，留取腎臟標本。采用全自動生化儀(日立7600，日本)檢測血肌酐(μmol/L)、尿素氮(mmol/L)，肌酐清除率(CrCl)=U·V/P，U代表尿肌酐(μmol/L)，V代表每分鐘尿量(ml/min)，P代表血肌酐(μmol/L)；CrCl予以體質量矯正，用ml·min-1·100 g-1表示。

1.3.2 病理組織學檢測 腎臟組織采用10%甲醛溶液固定、脫水、石蠟包埋、切片和蘇木素-伊紅(HE)染色。在光鏡利用盲法的原則觀察病理結果，評定腎小管損傷評分，作半定量分析。腎損傷定義為：腎小管退化、空泡變性，管型形成，小管壞死和炎癥浸潤。評分標準：0分，正常組織；1分，單細胞、點灶性壞死；2分，腎小管受損面積<25%；3分，腎小管受損面積25%～50%；4分，腎小管受損面積>50%。

1.3.3 原位末端標記(TUNEL)法測定腎臟凋亡細胞 采用原位細胞死亡檢測試劑盒(Roche，德國)并按試劑盒說明書進行操作，檢測凋亡的DNA碎片：對石蠟切片脫蠟、脫水，用蛋白酶K孵育，微波修復抗原，滴加TUNEL反應液，滴加辣根過氧化物酶標抗熒光素抗體工作液，用DAB顯色劑呈色；最后脫水、透明、封固。在光鏡下觀察凋亡細胞，被蘇木素染色的細胞核呈棕黃色，即為TUNEL陽性細胞。每視野內TUNEL陽性細胞占總細胞核數(shù)的百分比即為凋亡指數(shù)(apoptotic index，AI)。采用Image-Pro Plus-6.0軟件對圖像的AI進行盲法分析。

1.3.4 Western blotting法檢測Rho相關卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK-1)、肌球蛋白磷酸酶靶亞基1(MYPT-1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)表達 取新鮮腎臟髓質40 mg在400 μl的RIPA裂解液〔50 mmol/L三(羥甲基)氨基甲烷(Tris-HCl) pH 7.4,150 mmol/L氯化鈉(NaCl),1 mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)，1%乙基苯基聚乙二醇(NP-40)〕中進行勻漿，然后在4 ℃下進行12 000 r/min離心15 min(離心半徑6 cm)×2，除去未破裂的細胞、細胞核和線粒體。細胞上清液轉移到新的試管，測定總蛋白濃度。所有細胞上清液調整到相同的蛋白濃度，并在十二烷基硫酸鈉(SDS)緩沖液65 ℃中加溫15 min，-20 ℃保存?zhèn)溆?。最后進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳，轉膜，用一抗ROCK-1(1∶1 000,Abcam,UK)、磷酸化MYPT-1(p-MYPT-1)(1∶1 000,Abcam,UK)、總MYPT-1(total-MYPT-1)(1∶500,Abcam,UK)、Caspase-3(1∶800,Cell Signal,USA)、β-actin(1∶2 000,Santa Cruz,USA)孵育過夜，最后用二抗孵育2 h，ECL化學發(fā)光試劑顯色，JY-Clear ECL型化學發(fā)光凝膠成像分析系統(tǒng)進行成像。ROCK-1、Caspase-3的表達用各自蛋白的表達與內參β-actin比值表示，MYPT-1的表達用p-MYPT-1/total-MYPT-1比值表示。

2 結果

2.1 3組大鼠造模后6、24 h BPU和血生化指標比較 3組大鼠造模后6 h BPU及造模后24 h BPU、血肌酐、尿素氮、CrCl比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中造模后6 h，膿毒癥組大鼠BPU較假手術組升高，血必凈組大鼠BPU較假手術組升高、較膿毒癥組降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；造模后24 h，膿毒癥組大鼠BPU較假手術組降低，膿毒癥組大鼠血肌酐、尿素氮、CrCl較假手術組升高，血必凈組大鼠尿素氮、CrCl較假手術組升高，血必凈組大鼠BPU較膿毒癥組升高，血必凈組大鼠血肌酐、尿素氮、CrCl較膿毒癥組降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表1)。

2.2 腎臟組織病理改變和腎小管損傷評分 造模后6 h各組腎臟病理組織改變不明顯。造模后24 h假手術組腎臟組織病理正常，膿毒癥組在腎髓質可以看到明顯的腎小管退化、空泡變、壞死和透明管型并伴有單核細胞浸潤；血必凈組較膿毒癥組腎小管壞死數(shù)量和單核細胞浸潤情況明顯改善(見圖1，本文彩圖見本刊官網(wǎng)www.chinagp.net電子期刊相應文章)。造模后6 h，3組腎小管損傷評分比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；造模后24 h，3組腎小管損傷評分比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中膿毒癥組腎小管損傷評分較假手術組升高，血必凈組腎小管損傷評分較假手術組升高、較膿毒癥組降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表2)。

2.3 TUNEL法檢測腎臟凋亡細胞 TUNEL法免疫染色顯示棕黃色為凋亡細胞，提示膿毒癥導致腎小管細胞的凋亡。造模后6 h各組腎小管凋亡細胞不明顯。造模后24 h假手術組腎小管凋亡細胞不明顯，膿毒癥組見大量TUNEL陽性細胞，血必凈組中凋亡細胞數(shù)量有所減少(見圖2)。造模后6 h，3組AI比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；造模后24 h，3組AI比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中膿毒癥組AI較假手術組升高，血必凈組AI較假手術組升高、較膿毒癥組降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表2)。

2.4 3組大鼠造模后6、24 h ROCK-1、MYPT-1和Caspase-3表達水平比較 造模后6、24 h，3組ROCK-1、MYPT-1和Caspase-3表達水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中造模后6 h，膿毒癥組和血必凈組ROCK-1、MYPT-1和Caspase-3表達水平較假手術組升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；造模后24 h，膿毒癥組ROCK-1、MYPT-1和Caspase-3表達水平較假手術組升高，血必凈組ROCK-1、MYPT-1表達水平較假手術組和膿毒癥組升高，血必凈組Caspase-3表達水平較膿毒癥組降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表3、圖3)。

Table 2 Comparison of renal tubular injury score and AI among 3 groups 6,24 h after modeling

組別只數(shù)腎小管損傷評分(分)AI(%)6h24h6h24h假手術組90.40±0.040.39±0.035.40±1.015.60±1.07膿毒癥組90.48±0.042.80±0.83a4.09±1.0228.00±5.78a血必凈組90.44±0.021.60±0.54ab5.60±0.9818.20±6.87abF值0.31018.7410.352103.410P值0.8100.0010.101<0.001

注：AI=凋亡指數(shù)；與假手術組比較，aP<0.05；與膿毒癥組比較,bP<0.05

表1 3組大鼠造模后6、24 h BPU和血生化指標比較

注：BPU=血流灌注，CrCl=肌酐清除率；與假手術組比較，aP<0.05；與膿毒癥組比較,bP<0.05

表3 3組大鼠造模后6、24 h ROCK-1、MYPT-1和Caspase-3表達水平比較

注：ROCK-1=Rho相關卷曲螺旋形成蛋白激酶1，MYPT-1=肌球蛋白磷酸酶靶亞基1，Caspase-3=含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3；與假手術組比較，aP<0.05；與膿毒癥組比較,bP<0.05

圖1 造模后6、24 h各組大鼠腎臟病理學改變(HE染色，×400)

圖2 造模后6、24 h各組大鼠TUNEL法檢測腎臟凋亡細胞改變(TUNEL染色，×400)

3 討論

膿毒癥是感染后導致的全身炎癥反應綜合征，病情進一步發(fā)展成嚴重膿毒癥可導致多器官功能障礙，包括SI-AKI，SI-AKI使患者病死率成倍增加甚至高達75%[2]。盡管抗生素不斷升級、治療手段不斷改善，包括腎臟替代治療(CRRT)的開展，不但極大增加醫(yī)療成本，而且沒有明顯減少膿毒癥的病死率，細胞凋亡通路的激活被認為是導致SI-AKI的重要原因[6]。本研究從中藥血必凈入手，從Rho激酶信號通路探討血必凈對SI-AKI腎小管細胞凋亡的保護作用。

注：ROCK-1=Rho相關卷曲螺旋形成蛋白激酶1，p-MYPT-1=磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亞基1，total-MYPT-1=總肌球蛋白磷酸酶靶亞基1，Caspase-3=含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3

圖3 Western blotting法檢測3組大鼠造模后6、24 h ROCK-1、MYPT-1、Caspase-3表達

Figure 3 The expression of ROCK-1,MYPT-1 and Caspase-3 by Western blotting in 3 groups 6,24 h after modeling

本研究中膿毒癥造模成功后，膿毒癥組的血流早期流速增快，隨著時間推移膿毒癥進一步發(fā)展，血流速度減慢、瘀滯，這符合膿毒癥臨床的發(fā)展，膿毒癥早期血流動力學的改變是高排低阻，進一步出現(xiàn)血流動力學障礙[7]；而在血必凈組早期也是血流增加，隨著血必凈療效的逐步顯現(xiàn)，腎臟血流并沒有出現(xiàn)進一步的下降。目前文獻也報道：早期導致SI-AKI進展不是血流減少，因此傳統(tǒng)的治療方法常療效甚微[2-3]。

ROCK-1和ROCK-2是絲氨酸/蘇氨酸相關的異構體，被認為是Rho蛋白的效應蛋白，能調控肌動蛋白骨架，是細胞內信號傳遞的啟動因子，在細胞凋亡的終末階段也發(fā)揮重要作用[8-9]。ROCK廣泛存在于哺乳動物內，包括ROCK-1和ROCK-2；ROCK-1主要存在于肝、腎、睪丸等非神經(jīng)組織，而ROCK-2主要存在于中樞神經(jīng)和骨骼肌中。ROCK通過直接磷酸化MLC上Ser19或抑制肌球蛋白輕鏈磷酸化酶(myosin light chain phosphase,MLCP)來磷酸化MLC從而實現(xiàn)細胞調節(jié)功能[10-11]。MLCP是Rho激酶作用的底物之一，含有3個亞基，其中MYPT-1是目前研究ROCK功能最有效的手段之一，通過抑制MYPT-1在Thr696和Thr853的磷酸化，使得MLC磷酸化增加。MLC磷酸化后被誘導與肌動蛋白相互結合，激活肌動蛋白ATP酶，促使細胞骨架肌纖維和肌動球蛋白應力纖維的收縮，導致細胞骨架的改變，膜通透性改變；同時由于細胞因子的活化和炎性因子趨化的協(xié)同作用，最終導致不可逆性改變的細胞腫脹、壞死和凋亡[12]。同時，Caspase-3是細胞凋亡過程中最主要的終末剪切酶，在細胞凋亡階段體內Caspase-3可以剪切ROCK-1的C端區(qū)域，使ROCK-1發(fā)生構象性改變，導致ROCK-1處于持續(xù)性活化狀態(tài)，而ROCK-2不會發(fā)生這樣現(xiàn)象[13]。國內學者在甘油致急性腎損傷的動物研究中觀察到Caspase-3水平上升與Rho激酶底物增加密切相關[14]，本研究結果與其相似。本研究結果顯示，膿毒癥發(fā)生后MYPT-1磷酸化增加、Caspase-3表達不斷增強，導致ROCK-1的持續(xù)激活狀態(tài)，從而產(chǎn)生一系列的病理性損害；血必凈可以減少MYPT-1的磷酸化，阻止ROCK-1在膿毒癥中的過度表達，同時血必凈可以使Caspase-3表達降低。從生化和組織學上來看：在膿毒癥早期應用血必凈能明顯改善腎功能的惡化，減輕腎臟組織學的形態(tài)學改變，從TUNEL免疫染色來看能夠明顯減少腎小管細胞的凋亡。這些證據(jù)表明血必凈能夠通過Rho激酶信號通路抗腎小管細胞的凋亡。

血必凈是在“菌、毒、炎”并治的理論指導下研制而成的水性溶液，能抑制多種細胞炎性因子；主要成分有川芎、赤芍、丹參、紅花等，具有行氣活血、清熱涼血、解毒止痛的功效，能擴張外周微血管，改善組織灌注與微循環(huán)，能抑制過度的炎性遞質釋放。單味中藥常療效甚微，而成藥內各味中藥之間可以產(chǎn)生協(xié)調效應，并對多個靶器官起作用[15-17]。因此本研究認為Rho激酶信號通路與SI-AKI密切相關，早期應用血必凈可以改善SI-AKI的病理學改變，減少腎小管細胞在膿毒癥進程中的凋亡。由于中藥的多成分性和多靶點性，有效化學成分的研究和提純仍然有待進一步的研究。

作者貢獻：孫雪東進行文章的構思與設計、結果的分析與解釋、撰寫論文；嚴一核進行研究的實施與可行性分析；褚韋韋進行數(shù)據(jù)收集和整理；張亦婷進行統(tǒng)計學處理；應利君進行論文的修訂、負責文章的質量控制及審校；孫雪東、應利君對文章整體負責,監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：陳素芳)

Effects of Xuebijing on Tubular Apoptosis via Rho-kinase Signaling Pathway in Sepsis-induced Acute Kidney Injure Rats

SUNXue-dong*,YANYi-he,CHUWei-wei,ZHANGYi-ting,YINGLi-jun

CriticalCareMedicine，ShaoxingPeople′sHospital,ShaoxingHospitalofZhejiangUniversity,Shaoxing312000,China

*Correspondingauthor:SUNXue-dong，Associatechiefphysician；E-mail:drsxd@tom.com

Objective To investigate the protective effect of early application of Xuebijing on apoptosis of renal tubular cells after septic acute kidney injure(SI-AKI) by Rho-kinase signaling pathway.Methods From August 2014 to June 2015,54 male SD rats were divided into three groups by random number table:sham operation group,sepsis group,Xuebijing group,18 rats in each group.The sepsis model of the sepsis group and the Xuebijing group was established by cecal ligation and puncture (CLP) method.The rats in the sepsis group were injected with 0.9% sodium chloride solution at a dose of 4 ml/kg via tail vein 0.5 h after CLP.The rats in the Xuebijing group were injected with Xuebijing injection at a dose of 4 ml/kg via tail vein 0.5 h after CLP.Nine rats in each group were selected 6,24 h after modeling.Blood perfusion unit(BPU) was determined using laser Doppler flowmetry.Serum creatinine,urea nitrogen,creatinine clearance (CrCl) were measured by automatic biochemical analyzer.Histopathological examination was used to assess renal tubular injury score.The apoptotic indices (AI) were calculated by TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL).The expression levels of Rho associated coiled coil forming protein kinase 1 (ROCK-1),myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT-1),Cysteine containing aspartic acid proteolytic enzyme 3 (Caspase-3) were detected by Western blotting.Results The BPU 6 h after modeling and the BPU,serum creatinine,urea nitrogen,CrCl 24 h after modeling of rats among 3 groups were compared,the differences were statistically significant (P<0.05).Among them,6 h after modeling,BPU in sepsis group was higher than that in sham operation group,and BPU in Xuebijing group was higher than that in sham operation group and lower than that in sepsis group (P<0.05).24 h after modeling,BPU in sepsis group was lower than that in sham operation group,serum creatinine,urea nitrogen and CrCl in sepsis group were higher than those in sham operation group,urea nitrogen and CrCl in Xuebijing group were higher than those in sham operation group,BPU in Xuebijing group was higher than that in sepsis group and the serum creatinine,urea nitrogen and CrCl in Xuebijing group were lower than those in sepsis group(P<0.05).6 h after modeling,renal tubular injury score and AI among 3 groups were compared,the differences were not statistically significant (P>0.05).Renal tubular injury score and AI among 3 groups were compared,the differences were statistically significant (P<0.05).24 h after modeling,renal tubular injury score and AI in sepsis group were higher than those in sham operation group,renal tubular injury score and AI in Xuebijing group were higher than those in sham operation group,and renal tubular injury score and AI in Xuebijing group were lower than those in sepsis group(P<0.05).6,24 h after modeling,the expression levels of ROCK-1,MYPT-1 and Caspase-3 among 3 groups were compared,the differences were statistically significant (P<0.05).6 h after modeling,the expression levels of ROCK-1,MYPT-1 and Caspase-3 in sepsis group and Xuebijing group were higher than those in sham operation group (P<0.05).24 h after modeling,the expression levels of ROCK-1,MYPT-1 and Caspase-3 in sepsis group were higher than those in the sham operation group,the expression levels of ROCK-1 and MYPT-1 in Xuebijing group were higher than those in the sham operation group,the expression levels of ROCK-1,MYPT-1 and Caspase-3 in Xuebijing group were lower than those in sepsis group (P<0.05).Conclusion Early application of Xuebijing can reduce the apoptosis of renal tubular cells in sepsis by Rho-kinase signaling pathway,improve pathological changes,reduce acute kidney injury caused by sepsis.

Acute kidney injury；Sepsis；Rho-associated kinases；Apoptosis

浙江省紹興市科技計劃項目(2014B70066)

R 692

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.05.y09

2016-12-20；

2017-05-11)

312000浙江省紹興市人民醫(yī)院 浙江大學紹興醫(yī)院重癥醫(yī)學科

*通信作者：孫雪東，副主任醫(yī)師；E-mail:drsxd@tom.com