王 錕，韓圣謙，張 珺，張瓔鸞，趙 瑋

（國(guó)家葡萄酒及白酒、露酒質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，煙臺(tái)市質(zhì)量認(rèn)證咨詢(xún)中心，山東煙臺(tái)264003）

樹(shù)莓酒與葡萄酒中21種多酚類(lèi)物質(zhì)含量比較研究

王 錕，韓圣謙，張 珺，張瓔鸞，趙 瑋

（國(guó)家葡萄酒及白酒、露酒質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，煙臺(tái)市質(zhì)量認(rèn)證咨詢(xún)中心，山東煙臺(tái)264003）

利用液相色譜分析技術(shù)，檢測(cè)了樹(shù)莓酒和葡萄酒中多酚類(lèi)物質(zhì)含量，并對(duì)樹(shù)莓酒和葡萄酒內(nèi)在成分差異性進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果表明，多酚類(lèi)物質(zhì)中的蘆丁、兒茶酸、對(duì)羥基苯甲酸、綠原酸、鞣花酸等含量存在明顯差異。

多酚類(lèi)物質(zhì)； 樹(shù)莓酒； 葡萄酒； 高效液相色譜儀

樹(shù)莓也稱(chēng)山莓，中醫(yī)稱(chēng)覆盆子，薔薇科懸鉤子屬的木本植物。果實(shí)是一種聚合果，味道酸甜，有紅色、金色和黑色，植株的枝干上長(zhǎng)有倒鉤刺。樹(shù)莓酒是由天然紅樹(shù)莓為主料，輔以桑葚、枸杞、黑加侖、黑莓等，采用傳統(tǒng)釀造工藝與現(xiàn)代生物技術(shù)精釀而成的酒精飲品。樹(shù)莓酒一直是西方國(guó)家的高檔果酒，而在國(guó)內(nèi)則剛剛起步，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)需求量大，市場(chǎng)前景廣闊[1]。國(guó)內(nèi)生產(chǎn)加工企業(yè)并不多，對(duì)于樹(shù)莓多酚類(lèi)物質(zhì)的相關(guān)研究相對(duì)較少，但能查找的葡萄酒中多酚類(lèi)物質(zhì)的文獻(xiàn)很多[2-11]。酚類(lèi)物質(zhì)是果酒尤為重要的成分，它不僅構(gòu)成果酒豐富多彩的顏色，而且參與形成濃郁的陳釀香氣、沉淀蛋白質(zhì)、提高結(jié)構(gòu)感、抗氧化、抗自由基、抗菌、防止還原味和光味[12]，同時(shí)還決定著果酒的收斂性、苦味等感官特性[13]。因此，研究樹(shù)莓酒中的多酚類(lèi)物質(zhì)對(duì)改善樹(shù)莓酒風(fēng)味、提高其質(zhì)量以及促進(jìn)人體健康都具有重要意義。

本實(shí)驗(yàn)選取了2015年產(chǎn)的具有代表性的12%vol樹(shù)莓酒10個(gè)批次樣品，與2015年產(chǎn)的葡萄酒10個(gè)批次進(jìn)行多酚類(lèi)物質(zhì)分析比較。實(shí)驗(yàn)從多酚類(lèi)物質(zhì)檢測(cè)入手，通過(guò)數(shù)據(jù)比對(duì)分析，最終找出樹(shù)莓酒與葡萄酒不同。為樹(shù)莓酒與葡萄酒真?zhèn)伪鎰e提供參考依據(jù)，為其多酚類(lèi)物質(zhì)含量以及感官差異提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

樹(shù)莓酒：來(lái)源于山東黑尚莓生物技術(shù)發(fā)展股份有限公司2015年產(chǎn)12%vol樹(shù)莓酒系列：黑尚莓·格養(yǎng)一脈、復(fù)方樹(shù)莓酒·歐洲紅、女人花復(fù)方樹(shù)莓酒、復(fù)方樹(shù)莓酒·和雅、復(fù)方樹(shù)莓酒·和風(fēng)、復(fù)方樹(shù)莓酒·和頌、樹(shù)莓尚品·樹(shù)莓酒、復(fù)方樹(shù)莓酒·哈瑞太茲、復(fù)方樹(shù)莓酒·和合。

葡萄酒：來(lái)源于煙臺(tái)當(dāng)?shù)仄咸丫粕a(chǎn)企業(yè)張?jiān)?、長(zhǎng)城、威龍2015年產(chǎn)葡萄酒，品種為赤霞珠、蛇龍珠、品麗珠、霞多麗、美樂(lè)、黑比諾、西拉、雷司令、貴人香、長(zhǎng)相思。

1.2 主要儀器和試劑

1.2.1 主要儀器

高效液相色譜儀（美國(guó)waters公司，配2998紫外檢測(cè)器）。

1.2.2 主要試劑

甲醇（色譜純，德國(guó)默克公司）；乙腈（色譜純，德國(guó)默克公司）；乙醇（分析純）；甲酸（分析純）；多酚類(lèi)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品：蘆丁、楊梅酮、槲皮素、山奈素、異鼠李素、沒(méi)食子酸、兒茶酸、對(duì)羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸、龍膽酸、綠原酸、咖啡酸、對(duì)位香豆酸、阿魏酸、芥子酸、鞣花酸、香草醛、丁香醛、錦葵素-3-O-葡萄糖苷、白藜蘆醇、白藜蘆醇苷（購(gòu)自美國(guó)Sigma或FLUCA公司）。

1.3 酚酸色譜條件

1.3.1 色譜柱

ODS-C18柱，4.6 mm×250 mm,5 μm，或其他具有同等分析效果的色譜柱；流動(dòng)相：A：1%甲酸的甲醇，B：1%甲酸的乙腈，C：1%甲酸的水；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm，320 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫程序

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

用萬(wàn)分之一天平準(zhǔn)確稱(chēng)取0.0100 g沒(méi)食子酸、兒茶酸、對(duì)羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸于100 mL容量瓶中，用乙醇溶解并定容至刻度；另準(zhǔn)確稱(chēng)取0.0100 g龍膽酸、綠原酸、咖啡酸、香草醛、丁香醛、阿魏酸、芥子酸、對(duì)位香豆酸于100 mL容量瓶中，用乙醇溶解并定容至刻度。

1.3.3 測(cè)定過(guò)程

待系統(tǒng)穩(wěn)定后依次進(jìn)樣。將酚酸標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣，樹(shù)莓酒、葡萄酒樣品直接過(guò)0.45 μm濾膜。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間定性樣品中酚酸的色譜峰，酚酸標(biāo)準(zhǔn)品分別在270 nm和320 nm下定量。根據(jù)樣品的峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算酚酸的含量。

1.4 黃酮醇色譜條件

1.4.1 色譜柱

ODS-C18柱，4.6 mm×250 mm,5 μm，或其他具有同等分析效果的色譜柱；流動(dòng)相：A：1%甲酸的甲醇，B：1%甲酸的乙腈，C：1%甲酸的水；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：287 nm，360 nm，520 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL。梯度洗脫程序見(jiàn)表2。

表2 梯度洗脫程序

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

用萬(wàn)分之一天平準(zhǔn)確稱(chēng)取0.0100 g蘆丁、楊梅酮、槲皮素、山奈素、異鼠李素、鞣花酸于100 mL容量瓶中，用乙醇溶解并定容至刻度；另準(zhǔn)確稱(chēng)取0.0100 g白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、錦葵素-3-O-葡萄糖苷于100 mL容量瓶中，用乙醇溶解并定容至刻度。

1.4.3 測(cè)定過(guò)程

待系統(tǒng)穩(wěn)定后依次進(jìn)樣。將黃酮醇標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣，樹(shù)莓酒、葡萄酒樣品直接過(guò)0.45 μm濾膜。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間定性樣品中黃酮醇的色譜峰，黃酮醇標(biāo)準(zhǔn)品分別在287 nm、360 nm和520 nm下定量。根據(jù)樣品的峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算黃酮醇的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 從研究的數(shù)據(jù)看，酚類(lèi)物質(zhì)中山奈素、沒(méi)食子酸、咖啡酸、對(duì)位香豆酸、阿魏酸、芥子酸、香草醛、丁香醛、錦葵素-3-O-葡萄糖苷9種物質(zhì)在樹(shù)莓酒和葡萄酒中含量沒(méi)有明顯差別。樹(shù)莓酒和葡萄酒中山奈素范圍0～1.0 mg/L，沒(méi)食子酸30.0～90.0 mg/L，咖啡酸10.0～25.0 mg/L，對(duì)位香豆酸3.0～9.0 mg/L，阿魏酸0～2.0 mg/L，芥子酸、香草醛、丁香醛均未檢出（香草醛僅在個(gè)別葡萄酒中檢出），錦葵素-3-O-葡萄糖苷0～560.0 mg/L。

2.2 其中有5種酚類(lèi)物質(zhì)樹(shù)莓酒比葡萄酒含量高，為蘆丁、原兒茶酸、對(duì)羥基苯甲酸、綠原酸、鞣花酸。蘆?。浩咸丫莆礄z出，樹(shù)莓酒3.0～8.5 mg/L；原兒茶酸：葡萄酒1.0～7.0 mg/L，樹(shù)莓酒7.5～11.74 mg/L；對(duì)羥基苯甲酸：葡萄酒0～1.0 mg/L，樹(shù)莓酒3.4～6.8 mg/L；綠原酸：葡萄酒 1.0～8.0 mg/L，樹(shù)莓酒14.4～21.2 mg/L；鞣花酸：葡萄酒1.0～3.0 mg/L，樹(shù)莓酒9.5～15.8 mg/L。

2.3 另外有7種酚類(lèi)物質(zhì)樹(shù)莓比葡萄酒含量低，為楊梅酮、槲皮素、異鼠李素、香草酸、丁香酸、龍膽酸、總白藜蘆醇。這7種酚類(lèi)物質(zhì)在樹(shù)莓酒中的含量微量，范圍在0～0.2 mg/L。在所檢10批次葡萄酒都有一定含量，其中楊梅酮0.5～4.0 mg/L，槲皮素1.0～8.0 mg/L，異鼠李素 0.2～1.0 mg/L，香草酸1.0～6.0 mg/L，丁香酸2.0～6.0 mg/L，龍膽酸0.2～2.0 mg/L，總白藜蘆醇0.2～5.0 mg/L。

3 結(jié)論

樹(shù)莓酒有著與葡萄酒不同的感官評(píng)價(jià)，其自身的多酚類(lèi)物質(zhì)與葡萄酒確實(shí)有顯著差異。采用本實(shí)驗(yàn)方法對(duì)20批次樹(shù)莓酒和葡萄酒進(jìn)行分析，在所檢測(cè)項(xiàng)目中有12種多酚類(lèi)物質(zhì)差異最大，具體有蘆丁、原兒茶酸、對(duì)羥基苯甲酸、綠原酸、鞣花酸、楊梅酮、槲皮素、異鼠李素、香草酸、丁香酸、龍膽酸、總白藜蘆醇，其他9種多酚類(lèi)物質(zhì)山奈素、沒(méi)食子酸、咖啡酸、對(duì)位香豆酸、阿魏酸、芥子酸、香草醛、丁香醛、錦葵素-3-O-葡萄糖苷在樹(shù)莓酒和葡萄酒中的含量沒(méi)有明顯差別。

[1] 劉清華,董鳳祥.樹(shù)莓發(fā)展現(xiàn)狀與前景[J].林業(yè)實(shí)用技術(shù),2007(12)：12-14.

[2] 宓捷波,畢玉國(guó),趙孔祥,等.葡萄酒中10種多酚類(lèi)物質(zhì)的高效液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道高分辨質(zhì)譜測(cè)定方法研究[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2015,34(11)：1227-1232.

[3] 史紅梅,丁燕,孫玉霞,等.葡萄酒中多酚類(lèi)物質(zhì)抗氧化活性測(cè)定方法的研究[J].釀酒科技,2011(7)：95-97.

[4] 侯小歌.不同工藝方法對(duì)赤霞珠干紅葡萄酒多酚物質(zhì)的影響研究[D].西安：西北農(nóng)林科技大學(xué),2006：1-72.

[5] 李雙石,李曉燕,苑函,等.葡萄酒渣提取多酚化合物研究進(jìn)展[J].釀酒科技,2012(12)：17-22.

[6] 劉蕓,仇農(nóng)學(xué),楊璽玉.葡萄皮渣提取物總酚含量及體外抗氧化活性、抑菌活性[J].食品科學(xué),2011,32(1)：5-9.

[7] 牛春艷,姜曉坤.葡萄皮渣中多酚物質(zhì)提取工藝的研究[J].遼寧化工,2011,40(9)：917-919.

[8] 令博,王捷,吳洪斌,等.葡萄皮渣多酚超聲波輔助提取工藝響應(yīng)面法優(yōu)化及抗氧化活性研究[J].食品科學(xué),2011,32(18)：24-29.

[9] 彭麗霞,黃彥芳,劉翠平,等.釀酒葡萄皮渣的綜合利用[J].釀酒科技,2010(10)：93-96.

[10] 楊勇,楊俊祥,宮霞,等.葡萄及葡萄屬植物中的天然活性物質(zhì)研究與利用現(xiàn)狀[J].釀酒科技,2011(6)：75-79.

[11] 孫玉霞.葡萄藤莖中多酚物質(zhì)提取及其抗氧化能力的研究[D].濟(jì)南：山東大學(xué),2011.

[12] 房玉林,張昂,孟江飛,等.不同釀造工藝對(duì)樹(shù)莓酒中單體酚的影響[J].林業(yè)科學(xué),2011,47(3)：156-160.

[13]MARIA M,RAFAEL S,CARMEN G C.Simultaneous determination of nonanthocyanin phenolic compounds in red wines by HPLC-DAD/ESI-MS[J].Am j eno vitical,2005,56(2)：139-147.

Comparison of the Content of 21 Kinds of Polyphenols in Raspberry Wine/Grape Wine

WANG Kun,HAN Shengqian,ZHANG Jun,ZHANG Yingluan and ZHAO Wei
（National Quality Supervision＆Testing Center for Wine,Liqueur and Liquor,Yantai Quality Certification Consulting Center,Yantai,Shandong 264003,China）

Polyphenols content in raspberry wine and in grape wine was detected by HPLC.Their difference was compared.The results showed that,there was a significant difference in the content of rutin,catechin,p-hydroxy benzoic acid,chlorogenic acid,ellagic acid,etc.

polyphenols;raspberry wine;grape wine;HPLC

TS262.6；TS262.7；TS261.7

A

1001-9286（2017）07-0062-03

10.13746/j.njkj2017084

2017-04-10

王錕（1982-），本科，從事食品、化工產(chǎn)品的分析檢驗(yàn)工作，研究方向：葡萄酒多酚類(lèi)物質(zhì)檢測(cè)，發(fā)表論文多篇。

韓圣謙（1983-），本科，從事葡萄酒分析檢驗(yàn)工作，研究方向：葡萄酒農(nóng)殘以及安全質(zhì)量檢測(cè)。

優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間：2017-06-02；地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20170602.1357.003.html。