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摘要：目的建立大火草花中槲皮素的提取方法，對大火草花中槲皮素進行薄層和高效液相方法鑒別。方法采用薄層色譜法對大火草花中槲皮素進行分離鑒別，并用高效液相色譜法加以確定。結果大火草花中含槲皮素成分，可用薄層色譜鑒別槲皮素。結論薄層色譜法簡便、準確，高效液相色譜法可為槲皮素含量的測定奠定基礎。

關鍵詞：大火草花；槲皮素；薄層色譜法；高效液相色譜法

中圖分類號：R284文獻標志碼：B文章編號：1007-2349（2017）07-0074-02

大火草記載于《云南省中藥材標準》2005版第六冊彝族藥（Ⅲ）。為菊科植物鉤苞大丁草Gerbera delavayi France的干燥全草。又名鉤苞大丁草、小一支箭、火草、白地紫苑等，是一種民間常用中藥。具有清熱利濕，消積殺蟲等作用。臨床主要用于治療痢疾，胃痛，消化不良，蛔蟲癥等。槲皮素，又名櫟精，槲皮黃素，可作為藥品，具有較好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。此外還有降低血壓、增強毛細血管抵抗力、減少毛細血管脆性、降血脂、擴張冠狀動脈，增加冠脈血流量等作用。用于治療慢性支氣管炎。對冠心病及高血壓患者也有輔助治療作用。此外，邢博士關于《利用槲皮素阻斷雄激素對激素依賴型的人類前列腺癌細胞的發(fā)現》一文認為，槲皮素可以阻斷雄激素對激素依賴型的人類前列腺癌細胞的作用。本文采用薄層色譜法和高效液相色譜法，對大火草花中有效成分槲皮素進行了研究，對其質量控制有一定的意義。

1儀器和材料

大火草（玉溪市澄江縣帽天山自采）；槲皮素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100081-201408 含量以991%計）；電子天平（賽多利斯BP211D-OCE，賽多利斯BSA224S-CW）；高效液相色譜儀（安捷倫1260）；超聲清洗儀（Branson 5800）；硅膠G薄層色譜板（MERCK HX117107）；可見-紫外分光光度計（安捷倫Cary 60）；薄層色譜板成像儀（Biostep Cabuvis）；數顯控溫水浴鍋（XMT-DA）；電熱加熱板（EH20A-plus）；水處理器（Micra operator manual）；自動顯色噴射器（SPU-1）；玻璃儀器均為天津玻璃儀器廠生產；分析純試劑均為四川西隴化工有限公司生產，色譜純甲醇為德國默克股份有限公司生產。

2方法與結果

21薄層鑒別

211供試品溶液的制備取供試品粉末01 g，加70%乙醇30 mL超聲30 min，取濾液蒸干，加水10 mL使溶解，用石油醚（30～60℃）萃取，棄去石油醚液，水溶液加3 mL稀鹽酸回流1小時，用冷水立即冷凝，用乙酸乙酯萃取3次，每次10 mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，加1 mL乙酸乙酯溶解，作為供試品溶液。

212對照品溶液的制備取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含1 mg槲皮素的溶液，作為對照品溶液。

213色譜方法照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部 通則 0502）試驗，分別吸取上訴兩種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（10：8：1）為展開劑展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，在日光和紫外（365 nm）下檢視。

214結果供試品色譜在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點和熒光斑點。TLC色譜圖見圖1。

22HPLC測定

221HPLC鑒別吸收波長的確定取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含5 ug槲皮素的溶液，作為供試品溶液，以甲醇為空白溶液，取供試品溶液，在200～800 nm波長范圍內進行掃描，結果在375 nm和255 nm處有最大吸收。375 nm波長處峰形狀圓滑對稱，故選擇375 nm為HPLC鑒別吸收波長。見圖2、圖3：

222色譜條件色譜柱為ZORBAX Extend-C18（46 mm×250 mm，5 um）；流動相為甲醇-02%磷酸（45：55）；流速10 mL/min。檢測波長375 nm，柱溫30℃。進樣量10 uL。理論塔板數按槲皮素計算，應不低于 6000。在此色譜條件下，槲皮素對照品和大火草火藥材的HPLC圖譜見圖4、圖5。

223對照品溶液的制備取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含50 ug槲皮素的溶液，作為對照品溶液。

224供試品溶液的制備取本品粉末01 g，精密稱定，精密加甲醇-25%鹽酸（4：1）25 mL，稱重，回流提取1 h，冷卻，補足重量，過濾，精密吸取續(xù)濾液5 mL～25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（045 um）濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

225結果供試品色譜在與槲皮素對照品色譜相同的保留時間上有相同峰。見圖4、圖5。

3討論

31薄層鑒別提取方法比較本實驗嘗試了多種提取方法：①以甲醇為溶劑回流提取60 min，濾過，濾液濃縮。②以乙醇為溶劑超聲處理60 min，濾過，濾液濃縮。③以70%乙醇超聲30 min，取濾液蒸干，加水使溶解，用石油醚（30～60℃）萃取，棄去石油醚液，水溶液加l稀鹽酸回流1 h，用冷水立即冷凝，用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘渣加乙酸乙酯溶解。比較上訴三種方法，以方法③所得色譜圖斑點比較清晰圓整，且色素斑點較少。

32薄層鑒別展開劑的比較實驗用不同展開劑展開，對結果進行比較：①以石油醚（60℃～90℃）：丙酮（5：1）為展開劑，紫外365 nm下觀察。②正己烷：乙酸乙酯：甲酸（7：5：08）為展開劑，紫外365 nm下觀察。③甲苯：乙酸乙酯：甲酸（10：8：1）為展開劑，紫外365 nm下觀察，噴以三氯化鋁試液，在日光和紫外（365 nm）下觀察。④氯仿：甲酸乙酯：甲酸（5：4：1）鹽酸蒸汽飽和為展開劑，置紫外365 nm下觀察。⑤乙酸乙酯：甲酸：水（8：1：1）為展開劑，噴以三氯化鋁試液，在日光和紫外（365 nm）下觀察。⑥以氯仿：甲醇（10：08）為展開劑，紫外365nm下觀察。比較上述六種展開劑的展開結果，以方法③的分離效果和Rf值比較好。

33薄層鑒別點樣量的篩選本實驗分別對供試品溶液2、5、10、15 uL的點樣量進行篩選，結果如圖6，表明以10 uL的點樣量斑點在日光和紫外365 nm下表現均較好。

34樣品不同部位槲皮素薄層鑒別本實驗對樣品不同部位的槲皮素進行了薄層鑒別比較，結果表明花中槲皮素的含量最高，故選用樣品的花進行試驗研究。

35大火草易于生長，在松樹林下山坡草叢中都能生存。本方法操作簡單，結果清晰明確?？蔀榇蠡鸩莸拈_發(fā)及槲皮素的來源提供一個依據，為今后大火草的質量控制提供參考。

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