商鼎

摘 要 目的：建立阿奇霉素片的體外溶出度檢測(cè)方法并進(jìn)行原研藥與仿制藥的相似性評(píng)價(jià)。方法：對(duì)該片劑的溶出度測(cè)定的基本條件（轉(zhuǎn)速、取樣時(shí)間、裝置、溶出介質(zhì)）進(jìn)行篩選，確定溶出參數(shù)，用高效液相色譜法測(cè)定含量。繪制原研藥在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線。采用f2因子法評(píng)價(jià)仿制藥與原研藥的相似性。結(jié)果：根據(jù)溶出曲線的區(qū)分效果將本次溶出介質(zhì)定為pH 1.2、pH 4.5、pH 6.8和水，阿奇霉素片在四種溶出介質(zhì)中穩(wěn)定性良好，RSD小于2%。自制樣品與原研藥溶出行為相似。結(jié)論：該方法可作為處方篩選的依據(jù)。

關(guān)鍵詞 阿奇霉素片 溶出度 溶出曲線 f2因子

中圖分類號(hào)：R927.11 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2017）13-0063-04

Study on the dissolution of azithromycin tablets

SHANG Ding*

（Shanghai New Asia Pharmaceutical Co.， LTD.， Shanghai 201203， China）

ABSTRACT Objective： To establish a method for the dissolution determination of content of azithromycin tablets in vitro and to evaluate the similarity between reference listed drug （RLD） and home-made drug. Methods： The best conditions（rotational speed， sampling time， apparatus and releasing media） for dissolution determination were selected by experiment and the content was measured by HPLC. The dissolution curves in media with different pH value were drawn and the similarity between RLD and home-made drug was evaluated by f2 factor. Results： The dissolution media at pH 1.2， pH 4.5， pH 6.8 value and water were selected based on the distinction effect of the dissolution profile. Azithromycin tablets showed good stability in four dissolution media with RSD less than 2%. The dissolution behavior was similar between RLD and home-made drug. Conclusion： This method can be used as the basis for formulation screening.

KEY WORDS azithromycin； dissolution rate； dissolution curve； f2 factor

阿奇霉素（azithromycin）是第一個(gè)十五元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，也是第一個(gè)氮雜內(nèi)酯類抗生素[1]。它是由南斯拉夫Sour Pliva公司開發(fā)研制的，1988年首先上市，后轉(zhuǎn)讓給美國(guó)輝瑞（Pfizer）公司[2]。其作用機(jī)理和紅霉素相似，通過(guò)抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成而起作用[3]。阿奇霉素與紅霉素相比最大的特點(diǎn)是對(duì)酸穩(wěn)定，且其在酸中的化學(xué)穩(wěn)定性與其在胃酸中相一致[4]。已有藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，阿奇霉素片生物利用率可達(dá)37%，其臨床給藥次數(shù)少，療程短，被認(rèn)為是一個(gè)很有效的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，臨床應(yīng)用廣泛，尤其適合于混合感染的治療[5-7]。文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)不同廠家的阿奇霉素片和原研制劑相比生物利用度具有很大差異[8-11]，故對(duì)原研制劑和仿制制劑的療效進(jìn)行全面的研究是迫切需要的。

阿奇霉素片為普通口服固體制劑，其溶解性和滲透性均較差，屬于BCS4類產(chǎn)品，因此需要對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行再評(píng)價(jià)。由于口服阿奇霉素片后在人體的胃腸道吸收，故本研究模擬人體胃腸道的環(huán)境繼續(xù)了pH 1.2～6.8的范圍的溶出條件摸索。目前我國(guó)正在開展口服固體制劑質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)工作，比較原研品和自制品的溶出曲線是否相似可降低兩者出現(xiàn)臨床療效差異的風(fēng)險(xiǎn)。故建立具有區(qū)分力的溶出度檢測(cè)方法是十分重要的工作。本研究中阿奇霉素片溶出方法的建立對(duì)指導(dǎo)藥物制劑的開發(fā)、嚴(yán)格控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量、保證藥物安全性和有效性以及實(shí)現(xiàn)仿制藥和原研藥的可替換具有十分重要的意義。

1 材料和方法

1.1 儀器和試藥

708-DS藥物溶出儀（安捷倫科技公司）；1260高效液相色譜儀（安捷倫科技公司）。阿奇霉素原料：批號(hào)160801。阿奇霉素自制片：批號(hào)160801、160802、160803。阿奇霉素參比制劑：美國(guó)輝瑞公司Zithromax，批號(hào)H79644。

1.2 方法

1.2.1 溶出度測(cè)定的液相色譜條件

參考?xì)W洲藥典阿奇霉素原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量測(cè)定方法[12]。

色譜柱以十八烷基聚乙烯醇為填充劑（Asahipak ODP-50E，4.6×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為6.7 g/L磷酸氫二鉀溶液（用10 mol/L氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH至11.0）-乙腈（40∶60）；波長(zhǎng)280 nm；流速1.0 ml/min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣體積10 μl；溶劑為（6.7 g/L磷酸氫二鉀溶液，用磷酸調(diào)pH至8.0）-乙腈（40∶60）。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。供試品及對(duì)照品溶液濃度為0.53 mg/ml。

1.2.2 溶解度測(cè)定

取過(guò)量阿奇霉素原料藥，置8支具塞試管中，分別精密加入醋酸、磷酸、硼酸、氫氧化鈉配置的不同pH緩沖溶液（pH 1.8、pH 2、pH 3、pH 4、pH 5、pH 6、pH 7、pH 8）5 ml，置37 ℃水浴振蕩過(guò)夜，使之形成過(guò)飽和溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液經(jīng)HPLC法測(cè)得溶解度。

1.2.3 不同介質(zhì)中穩(wěn)定性比較

按照普通口服固體制劑溶出曲線測(cè)定與比較指導(dǎo)原則，用不同鹽配置不同的溶出介質(zhì)，取適量原料藥，按照0.53 mg/ml的濃度分別配置在100 ml量瓶中，于室溫放置0、20、40、60、80、100、120、140、240、360、480 min時(shí)取樣進(jìn)行HPLC檢測(cè)。

1.2.4 溶出參數(shù)確定

對(duì)溶出方法中的取樣時(shí)間、裝置、溶出介質(zhì)的類型和比例、轉(zhuǎn)速等進(jìn)行改變調(diào)整，并進(jìn)行HPLC檢測(cè)。

1.2.5 自制品與原樣品溶出行為對(duì)比

取原研品和3批自制樣品各12片，使用pH 1.2鹽酸溶液、pH 4.5磷酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液和含有0.15%的十二烷基硫酸鈉的水溶液900 ml為溶出介質(zhì)，槳法，50 r/min。前三種溶出介質(zhì)在溶出開始后5、10、15、20、30 min時(shí)取樣，后面的水溶液介質(zhì)在溶出開始后5、10、15、20、30、45、60、90、120 min時(shí)取樣，過(guò)濾后取續(xù)濾液進(jìn)行HPLC檢測(cè)。得到累積溶出度后，繪制累積溶出度曲線，并通過(guò)f2因子法與原研品進(jìn)行對(duì)比。

2 結(jié)果

2.1 不同pH介質(zhì)中溶解度測(cè)定

溶解度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1。數(shù)據(jù)顯示阿奇霉素是pH依賴型藥物，隨著pH的增大，溶解度逐漸減小。采用此法，排除了不同酸根和離子強(qiáng)度的影響，現(xiàn)配現(xiàn)測(cè)，能比較真實(shí)地反應(yīng)阿奇霉素在不同pH條件下的溶解度。

2.2 在不同鹽配制的不同pH介質(zhì)中的穩(wěn)定性

發(fā)現(xiàn)在pH 3.0磷酸鹽緩沖液中，140 min內(nèi)，峰面積RSD小于2%；在其他介質(zhì)中，140 min內(nèi)，峰面積RSD均大于2%，故在pH 3.0磷酸鹽緩沖液中，要比在其他介質(zhì)中穩(wěn)定。阿奇霉素在相同pH不同酸根溶液中，穩(wěn)定性也不一樣，在醋酸溶液中最不穩(wěn)定，在磷酸溶液中相對(duì)穩(wěn)定。穩(wěn)定性順序：醋酸-醋酸鈉緩沖液<醋酸-磷酸-硼酸-氫氧化鈉緩沖液<檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液<磷酸二氫鉀-磷酸溶液。測(cè)定了Zithromax在pH 5.0醋酸鹽緩沖液900 ml- 槳法-50 r/min和pH 5.0磷酸鹽緩沖液 900 ml- 槳法-50 r/min時(shí)，發(fā)現(xiàn)他們均在20～30 min內(nèi)全部溶出，無(wú)明顯差異，故確定磷酸鹽緩沖液為首選溶出介質(zhì)。

2.3 溶出度試驗(yàn)參數(shù)的確定

2.3.1 溶出介質(zhì)體積和取樣時(shí)間點(diǎn)

在pH 6.0、pH 6.5、pH 6.8、pH 7.5的磷酸鹽緩沖液500 ml-槳法-50 r/min、120 min時(shí)不能完全溶出。在pH 6.0磷酸鹽緩沖液500 ml-槳法-65 r/min和75 r/min、120 min時(shí)仍不能完全溶出，而轉(zhuǎn)速加快至100 r/min時(shí)溶出又太快不具有區(qū)分力。

對(duì)于普通片劑一般采用大杯法，介質(zhì)體積為900～ 1 000 ml，不建議采用小杯法[13]，故溶出介質(zhì)體積設(shè)定為900 ml。取樣時(shí)間點(diǎn)設(shè)置為5、10、15、20、30、45、60、90、120 min。

2.3.2 裝置的選擇

鑒于籃法與槳法通用性強(qiáng)、耐用性好且廣泛普及，故試驗(yàn)了他們對(duì)阿齊霉素片溶出度測(cè)定的影響。

Zithromax在pH 6.0磷酸鹽緩沖液900 ml-槳法-50 r/min和60 r/min、120 min時(shí)仍未完全溶出；而在75 r/min、15 min時(shí)全部溶出；觀察溶出杯內(nèi)現(xiàn)象，發(fā)現(xiàn)片劑崩解后，顆粒沉降在杯底有成堆現(xiàn)象，可能會(huì)影響最終溶出度考察，考慮換用籃法。

籃法測(cè)試中，片劑崩解后，不溶物從籃內(nèi)流出，沉降到杯底，未見(jiàn)成堆現(xiàn)象；原研品在pH 6.0磷酸鹽緩沖液900 ml-籃法-75 r/min、15 min時(shí)全部溶出；而在50 r/min時(shí)，約需90 min時(shí)全部溶出，但在5～10 min時(shí)，RSD偏大；在60 r/min時(shí)，45～60min全部溶出，但在5～10 min時(shí)，RSD仍偏大。

通過(guò)對(duì)溶出現(xiàn)象的觀察，發(fā)現(xiàn)片劑薄膜衣會(huì)粘到轉(zhuǎn)籃上，進(jìn)而影響片劑崩解和溶出，不能比較真實(shí)地反映片劑在體內(nèi)的崩解溶出情況，故仍考慮采用槳法。

2.3.3 溶出條件的確定

在水900 ml-槳法-75 r/min時(shí)，不溶物呈絮狀漂浮在杯底，無(wú)堆積現(xiàn)象，90 min時(shí)溶出約22%。添加吐溫80后，空白樣品中出現(xiàn)雜峰，運(yùn)行時(shí)間由8 min調(diào)整到50 min，運(yùn)行時(shí)間太長(zhǎng)，考慮換用十二烷基硫酸鈉（SDS）。

Zithromax在水介質(zhì)+0.05%、0.1% SDS 900 ml-槳法-75 r/min條件下，120 min時(shí)仍不能完全溶出；在水介質(zhì)+0.2% SDS 900 ml-槳法-75 r/min條件下，45 min時(shí)完全溶出。

Zithromax在水介質(zhì)+0.15% SDS 900 ml-槳法-75 r/min條件下，60 min時(shí)完全溶出；在水介質(zhì)+0.25% SDS 900 ml-槳法-75 r/min條件下，20 min時(shí)完全溶出。

Zithromax在水介質(zhì)+0.15% SDS 900 ml-槳法-50 r/min條件下，同樣約60 min全部溶出（表1）；因此選擇水介質(zhì)+0.15% SDS 900 ml-槳法-50 r/min作為最終溶出條件。

基于以上研究，最終確定4條溶出曲線條件為pH 1.2鹽酸溶液、pH 4.5磷酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液、水介質(zhì)+0.15% SDS 900 ml-槳法-50 r/min。

2.4 原研和自制品的溶出曲線

2.4.1 自制品在pH 1.2、pH 4.5、pH 6.8、水+0.15% SDS中的溶出曲線

自制樣品在pH 1.2鹽酸溶液，pH 4.5、pH 6.8磷酸鹽緩沖液900 ml-槳法-50 r/min時(shí)，均在15 min內(nèi)全部溶出，溶出行為同Zithromax相似（圖2）。

2.4.2 原研和自制品的f2因子

自制樣品在水介質(zhì)+0.15% SDS 900 ml-槳法-50 r/min條件下，與Zithromax進(jìn)行溶出行為相似性比較，選取10、20、45、90 min四個(gè)點(diǎn)，得到三批自制品f2因子數(shù)值分別為為67、72、69，均滿足f2因子大于50的要求，RSD符合指導(dǎo)原則要求，自制樣品與參比制劑溶出行為相似。

3 討論

本研究是國(guó)內(nèi)首次對(duì)阿奇霉素片的原研制劑和自制制劑進(jìn)行了四種體外溶出介質(zhì)對(duì)比研究。通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)速、溶出介質(zhì)種類和濃度、溶出裝置等條件的篩選，對(duì)原研品進(jìn)行溶出條件摸索，最終確定了具有區(qū)分力的溶出曲線測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方法和條件，從而建立了阿奇霉素片的體外溶出度測(cè)定方法，該方法測(cè)定的原研品和自制品溶出數(shù)據(jù)RSD符合相關(guān)指導(dǎo)原則要求，能夠真實(shí)體現(xiàn)阿奇霉素片的溶出度考查結(jié)果。中國(guó)藥典中阿奇霉素片的溶出度檢查法[14]為單點(diǎn)測(cè)定，本研究則依據(jù)阿奇霉素原研制劑建立了多種溶出介質(zhì)多點(diǎn)對(duì)比的方法。然后對(duì)自制樣品和參比制劑進(jìn)行溶出行為相似性研究，計(jì)算f2因子，得到的結(jié)論是自制樣品和原研品的溶出行為相似。該方法的建立為以后阿奇霉素片原研藥與仿制藥的相似性評(píng)價(jià)，剖析處方，制備出與原研藥具有相同的給藥途徑、活性成分、劑型和治療作用的替代藥品打下了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

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