莫艷嬌

摘 要：目的：建立高效液相色譜法測(cè)定川貝清肺糖漿中甘草酸的含量。方法：采用C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm），以乙腈、0.05%磷酸為流動(dòng)相，流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm，以外標(biāo)法測(cè)定含量.結(jié)果：甘草酸在0.0738μg～1.845μg的范圍內(nèi)峰面積與測(cè)定濃度呈良好的線性關(guān)系，r=1.0000（n=7），平均回收率為99.2%，RSD為1.5%（n=9）.結(jié)論：高效液相色譜法專屬性好，簡(jiǎn)便、快速，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好.

關(guān)鍵詞：HPLC法 川貝清肺糖漿 甘草酸 含量測(cè)定

川貝清肺糖漿由枇杷葉、苦杏仁、川貝母、麥冬、地黃、甘草、桔梗、薄荷等組成的復(fù)方制劑，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中僅檢查性狀和相對(duì)密度，無含量測(cè)定等項(xiàng)目，這對(duì)藥品內(nèi)在質(zhì)量的全面控制是一個(gè)欠缺，為保證藥品質(zhì)量，根據(jù)現(xiàn)行藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及參考有關(guān)報(bào)道，在大量試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)川貝清肺糖漿中甘草（甘草酸）含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究。

一、樣品及試藥

1.1儀器

高效液相色譜儀：Waters2695/2996

1.2材料

甘草酸（中檢所，批號(hào)為100018-200408，供含量測(cè)定用）；川貝清肺糖漿（廣西大力神制藥股份有限公司提供，批號(hào)為160601）；乙腈（色譜純，廣州西隴化工）；水為重蒸餾水；磷酸（色譜純，重慶光復(fù)）。

二、方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱選用島津科技有限公司GL公司的C18（ODS3）色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）；乙腈為流動(dòng)相A，0.05%磷酸為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速為1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。在此波長(zhǎng)下主成分峰的出峰位置無雜峰干擾；進(jìn)樣量10μl。在該色譜條件下，甘草酸峰峰形好，前、后均無雜峰影響。見附圖1。

考慮到樣品溶劑對(duì)色譜的干擾，根據(jù)《中國(guó)藥典》附錄中樣品溶劑宜盡量采用流動(dòng)相作溶劑的要求，采用本法的流動(dòng)相作為溶劑時(shí)，在甘草酸峰的前后有雜質(zhì)峰，影響分離度。經(jīng)試驗(yàn)用水作溶劑，在該色譜條件下無干擾。見附圖2。

2.2專屬性試驗(yàn)（空白試驗(yàn)）

按處方制成不含甘草酸的樣品，按擬定方法測(cè)定，結(jié)果表明在甘草酸出峰處無吸收峰出現(xiàn)。見附圖3。

2.3線性關(guān)系與范圍考察

稱取甘草酸對(duì)照品9.232mg，置100ml量瓶中加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置5ml量瓶中加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得含甘草酸對(duì)照品0.0369mg/ml（36.9ug/ml）的溶液。分別進(jìn)樣2、5、10、15、20、30、50ul，記錄峰面積。以甘草酸的峰面積Y對(duì)進(jìn)樣量X（ug）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：

Y=875010X-3459 r=1.0000（n=7）

結(jié)果見表1。

結(jié)果表明，進(jìn)樣量在0.0738ug～1.845ug

（7.38ug/ml～184.5 ug/ml）的范圍內(nèi)峰面積與測(cè)定濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.4重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品（批號(hào)：160601）6份，按含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在擬定的色譜條件下，進(jìn)樣，測(cè)定甘草酸的含量，結(jié)果顯示本方法重復(fù)性良好，結(jié)果見表2。

2.5精密度試驗(yàn)

在上述的重復(fù)性試驗(yàn)中，連續(xù)進(jìn)樣6次，

A B

C

A.對(duì)照品溶液 B.樣品溶液 C.陰性對(duì)照溶液

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液（0.04065mg/ml），于0，2，4，8，12h分別進(jìn)樣，依法測(cè)定甘草酸峰面積值，結(jié)果顯示，溶液至少在12小時(shí)內(nèi)是穩(wěn)定的。結(jié)果見表4。

2.7加樣回收試驗(yàn)

精密量取已知含量的同一批供試品（批號(hào)：160601，含量為0.25mg/ml）3份各20ml，置100 ml量瓶中，各精密加入一定量的甘草酸對(duì)照品（見表5），加水至刻度，搖勻，得3個(gè)不同濃度的樣品溶液。各取3份做平行試驗(yàn)，計(jì)算加樣回收率。測(cè)定結(jié)果令人滿意。結(jié)果見表6。

三、討論

3.1流動(dòng)相的選擇

流動(dòng)相的選擇上，有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道均有不同，如以甲醇-0.2mol /L乙酸胺溶液（用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至4.2）（58： 42）、甲醇-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸（67：3：1）、乙腈-0.5%磷酸溶液（含1mmol/L醋酸銨溶液）（33：67）、10mmol/L醋酸銨溶液（pH=6.86）-乙腈（79.5∶20.5），等。以上流動(dòng)相，經(jīng)試驗(yàn)甘草酸峰形均不理想。采用《中國(guó)藥典》2015版一部甘草含量測(cè)定項(xiàng)下的流動(dòng)相，梯度洗脫的方法，經(jīng)試驗(yàn)得到較好的分離效果，甘草酸峰形也很好。

3.2溶劑選擇

甘草酸的溶劑選擇上，各報(bào)道中各有不同，因甘草酸易溶于水、乙醇，分別采用乙醇、水、甲醇及流動(dòng)相溶解，其中流動(dòng)相和乙醇、甲醇的溶解度較好但所得分離效果較差，有雜質(zhì)峰對(duì)甘草酸峰產(chǎn)生影響，各項(xiàng)條件均不能滿足《中國(guó)藥典》的要求；而用水作溶劑得到的色譜峰峰形好，各項(xiàng)條件均滿足《中國(guó)藥典》的要求，故本文選水作為溶劑。

3.3檢測(cè)波長(zhǎng)選擇

甘草酸的吸收波長(zhǎng)，有250nm、252 nm、255 nm等，但大部分定250nm為吸收波長(zhǎng)，經(jīng)對(duì)對(duì)照品在200nm～400 nm進(jìn)行掃描，最大吸收在250nm處，故定250nm為檢測(cè)波長(zhǎng)能得到較好的檢測(cè)結(jié)果。

四、結(jié)論

川貝清肺糖漿為《衛(wèi)生部頒標(biāo)準(zhǔn)》品種， 標(biāo)準(zhǔn)中質(zhì)量監(jiān)控項(xiàng)目簡(jiǎn)單，不利于藥品的質(zhì)量監(jiān)控。為了保證藥品的質(zhì)量，在參考有關(guān)報(bào)道和大量試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)川貝清肺糖漿中的甘草進(jìn)行含量測(cè)定。本文采用HPLC法測(cè)定甘草（甘草酸）的含量，方法靈敏、專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確.

參考文獻(xiàn)

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