孫桂霞，王寧，張紅霞，楊少琴

（河南大學(xué)淮河醫(yī)院 婦產(chǎn)科，河南 開封 475000）

SH2B1基因多態(tài)性與妊娠糖尿病的相關(guān)性研究

孫桂霞，王寧，張紅霞，楊少琴

（河南大學(xué)淮河醫(yī)院 婦產(chǎn)科，河南 開封 475000）

目的 探討SH2B1基因多態(tài)性與妊娠糖尿病患者胰島素抵抗的關(guān)系。方法選取164例妊娠期糖尿?。℅DM）患者和130例糖耐量正常孕婦。采用限制性片段多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)檢測SH2B1基因型，并且分析相關(guān)臨床資料。結(jié)果GDM組SH2B1（rs4788102）基因GA型與GG型比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義[＾OR=1.531，（95%CI：1.093，2.374）P=0.04]，A等位基因頻率與G等位基因頻率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義[＾OR=1.436，（95%CI：1.091，1.972）P=0.01]。GDM組GA+AA基因型與GG基因型比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義[＾OR=1.699，（95%CI：1.185，2.479）P=0.02]。GDM組中GA+AA基因型體重指數(shù)、三酰甘油、瘦素及穩(wěn)態(tài)模型評估胰島素抵抗指數(shù)與GG基因型比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。經(jīng)Logistic回歸分析顯示，GA+AA基因型為穩(wěn)態(tài)模型法測定胰島素抵抗指數(shù)升高的危險因素。結(jié)論SH2B1（rs4788102）基因多態(tài)性可能是GDM的一個易感位點，監(jiān)測孕婦該基因位點，可以用于GDM發(fā)生風(fēng)險的預(yù)測。

妊娠糖尿病；SH2B1基因多態(tài)性；胰島素抵抗

妊娠期糖尿?。╣estational diabetes mellitus，GDM）是指妊娠期孕婦首次發(fā)生不同程度的糖代謝異常，其嚴(yán)重危及母兒健康，并與多種不良妊娠結(jié)局有關(guān)，如妊娠高血壓和巨大兒、早產(chǎn)兒及新生兒低血糖等密切相關(guān)[1]。SH2銜接蛋白（SH2 adaptor protein，SH2B1）是一種信號分子，參與瘦素（Leptin）、胰島素等多種激素的受體信號傳導(dǎo)途徑，流行病學(xué)發(fā)現(xiàn)SH2B1單核苷酸多態(tài)性與肥胖、胰島素抵抗相關(guān)[2]。大量研究已經(jīng)證實，GDM患者與血脂代謝異常相關(guān)[3-4]。本研究旨在探討 SH2B1（rs4788102）基因多態(tài)性與GDM的關(guān)系，從而為臨床診斷GDM的發(fā)病風(fēng)險提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2014年4月-2015年9月在河南大學(xué)淮河醫(yī)院產(chǎn)科門診接受常規(guī)產(chǎn)前檢查的孕24～28周妊娠婦女，行 50g糖篩查（sugar screening test，GCT），1 h血糖（blood glucose，PG）≥7.8 mmol/L者行 100 g糖耐量試驗（oral glucose tolerance test，OGTT），檢測空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)PG）和 1、2及 3 h PG含量，參照樂杰主編[5]的《婦產(chǎn)科學(xué)》（第7版）和2010年美國糖尿病學(xué)會有關(guān)于GDM的診斷標(biāo)準(zhǔn)：①FPG≥5.3 mmol/L；②1 h PG≥10.0 mmol/L；③2 h PG≥8.6 mmol/L；④3 h PG≥7.8 mmol/L，當(dāng)滿足≥2項則診斷為GDM，不滿足要求則為非GDM[6]。根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)GDM患者164例（GDM組），年齡25～38歲，平均（27.69±4.02）歲；分娩孕周 39～42周，平均（39.87±1.69）周。非GDM組患者130例（Non-GDM組），年齡 25～38歲，平均（27.96±3.99）歲；分娩孕周39～43周，平均（39.39±2.07）周。所有受試對象均已經(jīng)排除其他妊娠合并癥以及心、腦、肝、腎及肺等慢性病史，簽訂知情同意書。所有研究對象均行常規(guī)產(chǎn)檢至分娩，由專人隨訪記錄相應(yīng)妊娠結(jié)局。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器與試劑 全自動生化分析儀（7600-120型，日本 Hitachi公司），電冰箱（KA62NV00型，德國Siemens公司），低溫臺式離心機（MINISPIN型，德國Eppendorf公司），核酸蛋白測定儀（170-2525EDU型，美國BIO-RAD公司），聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴增儀（9700 型，美國ABI公司），瓊脂糖水平電泳儀（DYCP-31BN型，北京六一儀器廠），凝膠成像系統(tǒng)（Tanon 3500型，上海天能科技有限公司）。

DNA提取試劑盒（美國Promega生物試劑公司），PCR Master Mix（加拿大 Fermentas公司），Bsh-FI內(nèi)切酶（北京NEB公司），DNA Marker（大連寶生生物工程有限公司），空腹胰島素試劑盒（深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司）。

1.2.2 一般臨床資料及生化指標(biāo)測定 由產(chǎn)科醫(yī)師詳細(xì)詢問并記錄受試對象的年齡、身高、體重、血壓及體重指數(shù)（body mass index，BMI）等。產(chǎn)檢時抽取周靜脈血，測定生化指標(biāo)，主要有：氧化酶法測定總膽固醇（total cholesterol，TC）及三酰甘油（Triglyceride，TG）；計算法測定高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）及FPG；化學(xué)發(fā)光法測定空腹胰島素（fasting insulin，F(xiàn)ins）；穩(wěn)態(tài)模型法測定穩(wěn)態(tài)胰島素評價指數(shù)（homeostasismodelassessment-insulin resistance，HOMA-IR）；酶聯(lián)免疫吸附試驗法測定Leptin。

1.2.3 DNA提取 取血標(biāo)本2 ml，采用基因組DNA快速提純試劑盒提取DNA，紫外分光光度計檢測DNA的濃度和純度，純度要求A260/A280≥1.8，置于-40℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 引物合成 按照相關(guān)文獻設(shè)計引物，由上海英駿生物科技工程有限公司合成。采用Light Scanner Primer Design 軟件設(shè)計 SH2B1（rs4788102）基因相應(yīng)位點引物，均采用小片段擴增引物。PCR正向引物：5'-CTGAGCATGCGTAACTACGCTCGTGCATACG GTC-3'，反向引物：5'-TCGTACTAAACGCAGCACCG ATCA-3'。

1.2.5 目的基因擴增 PCR擴增體系為25 μl，其中含有5 μl PCR Mix，2 u taq酶及正、反向引物各0.5 μl，1μl LC Green 和 1 μl DNA 模板，剩余加入雙蒸水。SH2B1（rs4788102）基因擴增反應(yīng)：95℃預(yù)變性 2 min，95℃變性 30 s，56℃退火 30 s，72℃延伸 45 s，94℃變性 30 s，30℃退火 30 s，共 40 個循環(huán)后73℃延伸5 min，限制性內(nèi)切酶為BshFI。取PCR產(chǎn)物10 μl，在含有2%瓊脂糖凝膠上電泳，溴化乙錠染色，紫外線透射儀觀察PCR擴增，鑒定其特異性。全部測序由美國ABI公司完成。為進一步準(zhǔn)確測定基因分型結(jié)果，隨機選取10%的樣本用直接測序法進行驗證。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用t檢驗，非正態(tài)分布資料以中位數(shù)（四分位距）表示，用非參數(shù)秩和檢驗；計數(shù)資料以率表示，用χ2檢驗。群體基因型采用Hardy-Weinberg平衡檢驗?；蚨鄳B(tài)性對GDM胰島素抵抗的影響用非條件的Logistic回歸分析，并經(jīng)多重檢驗P值的Bonferroni進行校正，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基因型及擴增結(jié)果

還有積薪師父！他的棋室也是星雨喜歡待的地方。星雨他們剛來萬花谷的時候，春雨綿綿，乍暖還寒，王積薪聽子虛道人烏有先生兩個老家伙回來講，說有四個孩子誤打誤撞，破了媼婦譜，忙親自跑到弘道部來，見到袁安、李離、上官星雨三人，又是作揖又是打拱，一定要東方宇軒作證，由他來拜三個少年做老師：“破解媼婦譜是我一生的志業(yè)，現(xiàn)在大功告成，你們?nèi)齻€就是我的恩人，小師父在上受我一拜！”

SH2B1（rs4788102）位點酶切中呈現(xiàn)1條亮的且長度為287 bp的條帶為AA型；出現(xiàn)109、128和287 bp 3條亮帶的為GA型，出現(xiàn)在109和128 bp 2條亮帶為GG型。隨機選取SH2B1（rs4788102）的PCR擴增產(chǎn)物行基因測序，結(jié)果顯示堿基的改變與酶切結(jié)果一致。見附圖。

2.2 兩組患者臨床資料及生化指標(biāo)的比較

附圖 SH2B1（rs4788102）不同基因型電泳圖

GDM 組 GCT 為（9.32±1.79）mmol/L、Non-GDM組為（6.24±1.48）mmol/L，經(jīng) t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=10.962，P=0.007）；GDM 組 FPG 為（5.65±0.49）mmol/L、Non-GDM 組為 （4.45±0.42）mmol/L，經(jīng) t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.893，P=0.033）；GDM 組 TC 為（5.98±0.83）mmol/L、Non-GDM 組為（4.73±0.69）mmol/L，經(jīng) t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.724，P=0.042）；GDM 組 TG 為（2.29±0.84）mmol/L、Non-GDM 組為（1.46±0.42）mmol/L，經(jīng) t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=12.032，P=0.000）；GDM 組 Fins為（14.36±1.30）mIU/L、Non-GDM 組為（10.09±0.73）mIU/L，經(jīng) t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.697，P=0.041）；GDM 組 HOMA-IR 為（3.89±0.43）、Non-GDM組為（2.77±0.23），經(jīng)t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=8.556，P=0.017）；GDM 組 2 型糖尿病 （type 2 diabetes mellitus，T2DM）家族史為 39.63%，Non-GDM組為17.69%，經(jīng)χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.113，P=0.026），GDM 組 GCT、FPG、TC、TG、Fins、HOMA-IR及T2DM家族史發(fā)生率均高于Non-GDM組。GDM 組 Leptin 為（17.65±6.37）ng/ml、Non-GDM組為（23.89±7.04）ng/ml，經(jīng) t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=10.175，P=0.007）；GDM組 HDL-C 為（0.62±0.25）mmol/L、GDM 組為（0.95±0.34）mmol/L，經(jīng) t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=8.914，P=0.013）。見表1。

2.3 兩組患者SH2B1（rs4788102）基因頻率與等位基因頻率分布

GDM組SH2B1（rs4788102）基因 GA型與 GG型比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義2.374），P=0.04]，A等位基因頻率與G等位基因頻率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義1.091，1.972），P=0.01]。GDM 組 GA+AA 基因型與GG基因型比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義CI：1.185，2.479）P=0.02]。見表 2、3。

2.4 GDM組不同基因型臨床指標(biāo)的比較

GDM 組中 GA+AA 基因型 BMI、FPG、TG、Leptin及HOMA-IR與GG基因型比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表 4。

2.5 SH2B1基因型對GDM的影響

表1 兩組患者臨床資料及生化指標(biāo)的比較

表2 SH2B1基因頻率與等位基因頻率分布 例（%）

表3 不同基因型之間差異比較

基因型頻率的相對風(fēng)險分析顯示，AA基因型患GDM的風(fēng)險是GG基因型的1.56倍（95%CI：0.853，2.846）]，A 等位基因攜帶者患 GDM的風(fēng)險較非C等位基因攜帶者升高1.41倍1.413，（95%CI：1.055，1.903）]，經(jīng) Logistic 回歸分析，校正BMI、TG、HOMA-IR等其他混雜因素影響后，AA基因型患GDM的風(fēng)險仍是GG基因型的1.31倍基因型的1.29倍

2.6SH2B1基因型對HOMA-IR的影響

將GG基因型與GA+AA基因型比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義的因素進行多變量的Logistic回歸分析，以 HOMA-IR 為因變量，以 BMI、TG、Leptin、GA+AA基因型為自變量。結(jié)果顯示，BMI[＾OR=1.409（95%CI：1.113，3.107），P=0.021]、TG[ ＾OR=1.428（95%CI：1.097，2.368），P=0.029]、Leptin[[ ＾OR=1.435（95%CI：1.126，3.124），P=0.027]、GA+AA 基因型[ ＾OR=1.762（95%CI：1.366，5.439），P=0.017] 為 HOMA-IR 升高的危險因素。

表4 GDM組不同基因型之間臨床指標(biāo)比較 （±s）

表4 GDM組不同基因型之間臨床指標(biāo)比較 （±s）

基因型3 h PG/（mmol/L）GG 25.31±1.67 9.69±1.83 5.73±0.48 10.93±1.40 9.39±1.71 5.41±1.96 GA+AA 28.69±1.99 9.32±1.79 5.55±0.51 10.53±1.79 9.24±1.65 5.57±2.01 t/χ2值 9.292 0.876 0.394 0.461 0.272 0.334P值 0.013 0.364 0.043 0.571 0.803 0.794 BMI/（kg/m2）GCT/（mmol/L）FPG/（mmol/L）1 h PG/（mmol/L）2 h PG/（mmol/L）基因型HOMA-IR GG 5.99±1.03 1.59±0.73 0.63±0.27 3.66±0.94 12.77±1.82 25.74±7.49 3.19±0.34 GA+AA 5.86±0.98 2.11±0.99 0.66±0.28 3.79±0.92 15.03±1.54 21.49±6.86 3.97±0.48 t/χ2值 0.405 11.054 0.293 0.684 0.733 8.222 5.054P值 0.521 0.004 0.852 0.363 0.664 0.017 0.036 TC/（mmol/L）TG/（mmol/L）HDL-C/（mmol/L）LDL-C/（mmol/L）Fins/（mIU/L）Leptin/（ng/ml）

3 討論

SH2B1蛋白于1995年被發(fā)現(xiàn)，該基因位于人染色體16p11.2，轉(zhuǎn)錄子的3’-端經(jīng)剪切后可以產(chǎn)生4種不同的亞型，分別為α、β、γ、δ，編碼蛋白分別有756、670、682 及 724 個氨基酸殘基，SH2B1 蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周組織中能廣泛表達(dá)[7]。有研究指出，SH2B1作為銜接蛋白可以與Janus激酶2、胰島素受體（insulin receptor，IR）、IR 底物（IRS-1、IRS-2），參與多種激素和細(xì)胞因子的信號傳導(dǎo)，如瘦素、胰島素等[8]。通過本研究發(fā)現(xiàn)，GDM組與Non-GDM組患者Leptin比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明GDM患者可能存在能量代謝異常。

既往的研究表明，GDM患者出現(xiàn)妊娠高血壓、早產(chǎn)和巨大兒、新生兒窒息及新生兒低血糖的發(fā)生率升高，同時易造成GDM患者及其子女后期T2DM、肥胖等[9]。大量研究已經(jīng)證實，GDM患者存在嚴(yán)重血脂代謝異常，其對母嬰預(yù)后造成近遠(yuǎn)期不良影響，而血脂代謝紊亂主要是脂蛋白的異常改變，也是本研究選取血脂代謝指標(biāo)，包括TC、TG、LDL-C及HDL-C作為研究指標(biāo)的主要原因[10]。通過本研究發(fā)現(xiàn)，GDM組TC、TG均高于Non-GDM組，而HDL-C低于Non-GDM組，表明GDM患者存在血脂代謝異常，這也印證以往的研究報道。目前，GDM患者大多指標(biāo)均已得到控制，但由于脂蛋白的異常表達(dá)，仍然可以引起子代臍血中血脂指標(biāo)出現(xiàn)異常變化，引起GDM患者血脂代謝異常需要引起重視。

SH2B1能夠緩解IR酪氨酸以及IRS的去磷酸化，參與生長激素誘導(dǎo)的Janus激酶2活化，體內(nèi)研究表明SH2B1對胰島素、Leptin、血糖、血脂及肥胖等具有重要作用[11]。AL-HAKEEM等[12]對沙特地區(qū)GDM患者SH2B1（rs4788102）多態(tài)性的研究證實，SH2B1（rs4788102）基因型中 GA+AA 型患者 BMI、TG、HOMA-IR均高于GG型，其研究表明SH2B1（rs4788102）基因與GDM顯著相關(guān)。通過對知網(wǎng)以及萬方等數(shù)據(jù)庫搜索，目前在國內(nèi)對于SH2B1（rs4788102）基因多態(tài)性與GDM易感性的研究報道非常少。本研究探討了SH2B1（rs4788102）基因多態(tài)性與GDM易感性以及HOMA-IR的關(guān)系，經(jīng)Logistic回歸分析，校正BMI、TG、HOMA-IR等其他混雜因素影響后，AA基因型患者GDM的風(fēng)險仍是GG基因型的1.31倍，GA+AA是GG基因型的1.29倍。經(jīng)Logistic回歸分析顯示，GA+AA基因型為HOMAIR升高的危險因素，在我國SH2B1（rs4788102）基因中A等位基因孕婦更有可能發(fā)生GDM。但是需要指出的是，由于本研究的樣本量不大，而且存在地域限制，其不能代表整體水平，后續(xù)需要行大樣本量、多中心研究，從而更好確定SH2B1（rs4788102）在GDM中的診斷價值。

綜上所述，筆者推測SH2B1（rs4788102）基因多態(tài)性可能是GDM的1個易感位點，監(jiān)測孕婦該基因位點，可以預(yù)測GDM發(fā)生風(fēng)險，從而對其多種影響因素進行早期干預(yù)，有利于早期GDM的早期防范。

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（李科 編輯）

Association ofSH2B1gene polymorphism with gestational diabetes mellitus

Gui-xia Sun,Ning Wang,Hong-xia Zhang,Shao-qin Yang
(Department of Obstetrics and Gynecology,Huaihe Hospital of Henan University,Kaifeng,Henan 475000,China)

ObjectiveTo investigate the relationship betweenSH2B1gene polymorphism and insulin resistance in patients with gestational diabetes mellitus(GDM).MethodsTotally 164 GDM patients and 130 normal pregnant women with impaired glucose tolerance were selected.TheSH2B1genotype was detected by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism and then the clinical data were analyzed.ResultsThere was significant difference between the GA and GG genotypes ofSH2B1(rs4788102)in the GDM group[＾OR=1.531,(95%CI:1.093,2.374),P=0.04].There was significant difference in the A allele frequency and the G allele frequency in the GDM group[＾OR=1.436,(95%CI:1.091,1.972),P=0.01].In the GDM group,the GA and AA genotypes were significantly different from the GG genotype[＾OR=1.699,(95%CI:1.185,2.479),P=0.02].BMI,TG,leptin,and HOMA-IR were significantly different between the GDM patients with AA or GA genotype and those with GG genotype (P＜0.05).Logistic regression analysis showed that GA and AA genotypes were the risk factors for HOMA-IR elevation.ConclusionsSH2B1(rs4788102)gene polymorphism may be a susceptible locus of GDM,which could be used to predict the risk of GDM in pregnant women.

gestational diabetes mellitus;SH2B1gene polymorphism;insulin resistance

R714.252

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.12.011

1005-8982（2017）12-0055-05

2016-11-09