劉一軍 徐斌 涂俊 余剛

安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院運(yùn)動(dòng)創(chuàng)傷與關(guān)節(jié)鏡科（合肥230022）

自體外周血富白細(xì)胞-血小板纖維蛋白對(duì)兔關(guān)節(jié)外骨道內(nèi)移植肌腱腱骨早期愈合的影響

劉一軍 徐斌 涂俊 余剛

安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院運(yùn)動(dòng)創(chuàng)傷與關(guān)節(jié)鏡科（合肥230022）

目的：探討兔關(guān)節(jié)外骨道內(nèi)使用自體外周血富白細(xì)胞-血小板纖維蛋白（L-PRF）對(duì)移植肌腱早期腱骨愈合的影響。方法：30只健康新西蘭大白兔平均分為實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組。將兔的半腱肌腱取出制成游離肌腱，植入同側(cè)關(guān)節(jié)外脛骨近端的橫向骨道內(nèi)制成腱骨愈合模型。實(shí)驗(yàn)組加入自體血來源的L-PRF，對(duì)照組不加入L-PRF。分別于術(shù)后4、8、12周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取材，切片染色，行腱骨界面的組織形態(tài)學(xué)觀察、Buark評(píng)級(jí)，并在高倍鏡下行成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)并分析。結(jié)果：各個(gè)時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞數(shù)目均多于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)中，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組腱骨連接更加緊密，腱骨間隙更小，膠原纖維排列更有序規(guī)則；標(biāo)志腱骨早期愈合的Sharpey樣纖維在4周時(shí)的實(shí)驗(yàn)組即可觀察到，而對(duì)照組8周時(shí)才可觀察到，并且隨著時(shí)間延長，兩組Sharpey樣纖維均持續(xù)增多；兩組標(biāo)本的腱骨界面組織形態(tài)學(xué)Buark評(píng)級(jí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：自體血來源的LPRF可促進(jìn)關(guān)節(jié)外骨道內(nèi)移植半腱肌腱腱骨的早期愈合。

富白細(xì)胞-血小板纖維蛋白；關(guān)節(jié)外；腱骨愈合

韌帶或肌腱損傷屬于運(yùn)動(dòng)創(chuàng)傷中的多發(fā)病、常見病。目前，韌帶重建和修復(fù)是治療關(guān)節(jié)韌帶損傷的主要手段。而韌帶重建或修復(fù)術(shù)包括在關(guān)節(jié)內(nèi)和關(guān)節(jié)外，且這些重建或修復(fù)成功的關(guān)鍵在于腱骨的良好愈合。以往實(shí)驗(yàn)大多是關(guān)于關(guān)節(jié)內(nèi)的腱骨愈合研究（如前交叉韌帶重建），其中有研究[1]表明富血小板血漿（platelet rich plasma，PRP）對(duì)關(guān)節(jié)內(nèi)腱骨愈合有明顯促進(jìn)作用。但是在關(guān)節(jié)外與PRP具有同源性的富白細(xì)胞-血小板纖維蛋白（leukocyte-and platelet-rich fi?brin，L-PRF）對(duì)移植肌腱的腱骨愈合影響的報(bào)道相對(duì)較少。本研究用兔自體外周血制備L-PRF膜，將其與自體半腱肌腱移植肌腱一同植入關(guān)節(jié)外脛骨近端骨隧道，觀察L-PRF對(duì)關(guān)節(jié)外腱骨愈合是否有促進(jìn)作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

體重約2.5 kg的健康成年雄性新西蘭大白兔30只，委托安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購買、飼養(yǎng)，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（蘇）2016-0005，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（皖）2014-007。所有兔子在實(shí)驗(yàn)前后均為單籠飼養(yǎng)。

1.1.2 主要材料及試劑

普通離心機(jī)；紅頭的干燥玻璃采血管；HE染色試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）；Masson三色染色試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 L L--P P R R F F的制備

根據(jù)之前研究的技術(shù)方法[2]制備L-PRF，制備過程嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則。從兔耳緣抽取約5 m l靜脈血于紅頭干燥無菌玻璃采血管中（不加抗凝劑），立即放入離心機(jī)中配平，然后以3000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min。離心結(jié)束后取出玻璃管，可見管內(nèi)明顯的三層結(jié)構(gòu)：上層為貧血小板血漿（platelet-poor plasma，PPP），中間為富白細(xì)胞和血小板的纖維蛋白凝塊，下層為紅細(xì)胞層。用移液管移除PPP，再用鑷子取出L-PRF于無菌金屬板上。然后用手術(shù)刀切除附著在L-PRF底端的紅細(xì)胞層，完整保留L-PRF凝塊。最后輕柔按壓LPRF凝塊，擠出殘留其中的貧血小板血漿，制成L-PRF膜留待實(shí)驗(yàn)中使用。

1.2.2 動(dòng)物分組及模型[[33]]的建立

30只新西蘭大白兔分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組15只。10%的水合氯醛腹腔注射麻醉（3 ml︰1 kg）后，以兔子的后肢為實(shí)驗(yàn)肢，術(shù)區(qū)備皮消毒鋪巾。取髕旁內(nèi)側(cè)入路，作長約30 mm的縱行切口，于脛骨結(jié)節(jié)內(nèi)后，大腿內(nèi)側(cè)逐層分離出半腱肌腱，在近端的肌腱和肌腹交界處以上盡量靠近近端切斷，然后在肌腱遠(yuǎn)端止點(diǎn)處切斷肌腱并取出，剔除肌肉部分。將肌腱對(duì)折，并將上述制備的L-PRF膜放在兩端肌腱之間，對(duì)折后的肌腱長度約15 mm。對(duì)折后的肌腱兩游離端用無菌縫線編織縫合，折疊處用無菌絲線穿過后備用。在同側(cè)關(guān)節(jié)外內(nèi)側(cè)副韌帶下止點(diǎn)下方約5 mm處，由內(nèi)向外用2.0克氏針?biāo)姐@取一骨道，測深尺測得骨道長度12 ±1 mm。將上述編織好的肌腱的折疊端處的絲線穿過無菌縫針，用縫針由內(nèi)向外穿過骨道，并將肌腱拉入骨道內(nèi)，在骨道內(nèi)口留出長約2 mm的肌腱以供固定。在內(nèi)側(cè)骨道口用編織線再次穿過肌腱縫合收緊固定在周圍的軟組織上，外側(cè)同樣縫合收緊固定在周圍的軟組織上。實(shí)驗(yàn)組在折疊的兩段肌腱之間加入L-PRF膜，對(duì)照組不加L-PRF膜。碘伏生理鹽水反復(fù)沖洗皮下組織，逐層間斷縫合切口，術(shù)后單籠飼養(yǎng)，自主活動(dòng)，前3天常規(guī)肌肉注射抗生素預(yù)防感染。

1.2.3 動(dòng)物標(biāo)本處理、組織學(xué)觀察及B B u u a a r r k k評(píng)級(jí)

分別于術(shù)后第4、8、12周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每組處死5只兔子，截取包含有移植肌腱的骨組織，剔除周圍軟組織，置于10%的中性福爾馬林中固定24小時(shí)后，再置于EDTA-2Na緩沖液中脫鈣6～8周，每2～3天換一次脫鈣液。脫鈣結(jié)束后，標(biāo)本經(jīng)脫水、透明、石蠟包埋，制成5 μm厚切片。然后行HE、Masson染色。HE染色進(jìn)行腱骨界面間的組織形態(tài)學(xué)觀察，并對(duì)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)，每個(gè)切片取5個(gè)高倍鏡視野；Masson染色觀察腱骨間的膠原纖維增生及排列，并行腱骨間組織形態(tài)學(xué)的Buark[4]半定量評(píng)級(jí)。此評(píng)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)以腱骨界面愈合的組織形態(tài)學(xué)為評(píng)級(jí)依據(jù)，作Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四級(jí)半定量評(píng)價(jià)。用目鏡測微尺測量各標(biāo)本切片腱骨界面單位長度中Sharpey樣纖維占有的比例來進(jìn)行分級(jí)。具體Buark標(biāo)準(zhǔn)為：Ⅰ級(jí)：缺乏組織結(jié)構(gòu)的疏松纖維血管組織界面；Ⅱ級(jí)：已機(jī)化的纖維血管組織伴有膠原纖維產(chǎn)生，占有的界面長度＜30%；Ⅲ級(jí)：成熟的纖維組織、細(xì)胞和血管減少，占有的界面長度為30%～60%；Ⅳ級(jí)：纖維血管組織機(jī)化成致密結(jié)締組織，垂直骨道方向的Sharpey樣纖維占有的界面長度＞60%。在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)，每組標(biāo)本制15張切片，觀察評(píng)估每張切片的分級(jí)，并統(tǒng)計(jì)相應(yīng)級(jí)別的切片數(shù)量。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，定量資料的組間數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用兩組單向有序分類資料的非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。設(shè)定α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 H H E E染色組織學(xué)觀察結(jié)果

術(shù)后4周對(duì)照組腱骨界面間隙較大，可見大量的炎癥細(xì)胞及少量的成纖維細(xì)胞并且排列紊亂，腱骨間連接較為疏松。實(shí)驗(yàn)組腱骨界面可見較少的炎癥細(xì)胞及較多的成纖維細(xì)胞，并有少量的未成熟軟骨細(xì)胞及Sharpey樣纖維形成。術(shù)后8周對(duì)照組腱骨界面成纖維細(xì)胞的數(shù)量增多但仍排列較為紊亂，并出現(xiàn)了未成熟的軟骨細(xì)胞及Sharpey樣纖維，腱骨間連接較4周時(shí)緊密。實(shí)驗(yàn)組Sharpey樣纖維較4周時(shí)增多增粗，未成熟的軟骨細(xì)胞增多并出現(xiàn)少量的成熟軟骨細(xì)胞，腱骨連接更加緊密。術(shù)后12周時(shí)對(duì)照組Sharpey樣纖維排列仍較紊亂，出現(xiàn)了少量的鈣化軟骨，腱骨間連接較為緊密。實(shí)驗(yàn)組腱骨界面形成大量的排列有序規(guī)則的Sharpey樣纖維，并且成熟的軟骨數(shù)目增多，纖維軟骨與鈣化軟骨間形成類似潮線樣結(jié)構(gòu)，腱骨間的纖維連接更加有序緊密。見圖1。

圖1 標(biāo)本切片HE染色光鏡觀察（×100）

2.2 H H E E染色成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果

如表1所示，3個(gè)時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著多于對(duì)照組（P＜0.05）。

表1 術(shù)后兩組標(biāo)本HE染色腱骨界面成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)比較（±s）

表1 術(shù)后兩組標(biāo)本HE染色腱骨界面成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)比較（±s）

各個(gè)時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比：*P＜0.05。

組別對(duì)照組（n=15）實(shí)驗(yàn)組（n=15）時(shí)間12周12.47±1.55 18.13±1.51*4周12.67±1.99 18.27±2.87*8周14.80±1.74 25.40±1.40*

2.3 Ma a s s s s o o n n三色染色結(jié)果

術(shù)后4周，對(duì)照組腱骨間隙與實(shí)驗(yàn)組相比較大，腱骨連接較松弛，部分腱骨間仍見有間隙，腱骨間有少量的成纖維細(xì)胞及膠原纖維；實(shí)驗(yàn)組腱骨間間隙較小，可見有較多的成纖維細(xì)胞增生及膠原纖維，并有少量與骨隧道壁垂直連接的Sharpey樣纖維。術(shù)后8周，對(duì)照組腱骨間成纖維細(xì)胞明顯增生，膠原纖維的數(shù)量亦較4周時(shí)增多，出現(xiàn)與骨道壁垂直連接的少量Sharpey樣纖維；實(shí)驗(yàn)組腱骨間膠原纖維大量增生，排列亦較為規(guī)則，與骨道壁垂直連接的Sharpey樣纖維增多。術(shù)后12周，對(duì)照組骨隧道與移植肌腱間纖維細(xì)胞未見明顯增多，膠原纖維量增多較明顯，但是排列欠規(guī)整；實(shí)驗(yàn)組骨隧道與移植肌腱間膠原纖維排列規(guī)則致密，與骨道壁連接緊密，并含有大量的Sharpey樣纖維。見圖2。

圖2 標(biāo)本切片M asson染色光鏡觀察（×100）

2.4 兩組標(biāo)本的組織形態(tài)學(xué)B B u u a a r r k k評(píng)級(jí)

兩組標(biāo)本切片的組織形態(tài)學(xué)Buark評(píng)級(jí)結(jié)果見表2和表3。兩組的腱骨界面組織形態(tài)學(xué)Buark評(píng)級(jí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)組的Buark評(píng)級(jí)高于對(duì)照組。

表2 兩組標(biāo)本切片的組織形態(tài)學(xué)Buark評(píng)級(jí)結(jié)果

表3 兩組標(biāo)本12周內(nèi)組織形態(tài)學(xué)Buark評(píng)級(jí)比較

3 討論

使用移植肌腱重建韌帶手術(shù)成功的關(guān)鍵在于腱骨之間的牢固愈合。正常的腱骨之間的結(jié)構(gòu)分為兩種：一種是通過肌腱末端的纖維軟骨與骨皮質(zhì)連接的直接止點(diǎn)結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)由典型的4層組織構(gòu)成：肌腱或韌帶[由平行的膠原纖維和少許細(xì)長的纖維母細(xì)胞（腱細(xì)胞）組成]、未鈣化的纖維軟骨、鈣化的軟骨、骨組織，交叉韌帶的止點(diǎn)則屬于此種；另一種則是肌腱的纖維末端直接與皮質(zhì)骨連接。這些止點(diǎn)中肌腱末端的附著是通過膠原纖維的互相交叉穿行附著在骨骼上，這種膠原纖維被稱為Sharpey纖維[5]。理想的腱骨愈合為形成正常的止點(diǎn)結(jié)構(gòu)，但是人為的移植肌腱的腱骨愈合往往需要較長的愈合時(shí)間，而以Sharpey樣纖維錨固在骨道壁上是腱骨愈合的早期標(biāo)志。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組4周的標(biāo)本切片中可觀察到Sharpey樣纖維，12周時(shí)觀察到大量Sharpey樣纖維；而對(duì)照組在8周時(shí)才能在標(biāo)本的切片中觀察到少量Sharpey樣纖維，12周時(shí)該纖維未見明顯增多，并且排列不規(guī)則。故結(jié)果表明自體血來源的L-PRF能夠促進(jìn)移植肌腱在關(guān)節(jié)外骨道內(nèi)早期的腱骨愈合。

既往有許多血小板濃縮液對(duì)腱骨愈合影響的研究，如Wu等[6]的兔子肩袖損傷研究中，使用PRP組與對(duì)照組相比，其腱骨愈合界面膠原纖維排列更加規(guī)則，連續(xù)性更強(qiáng)；在相同的時(shí)間點(diǎn)PRP組的生物力學(xué)負(fù)荷更大，并且在6周時(shí)骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2的表達(dá)多于對(duì)照組。Seijas等[7]在給98位患者進(jìn)行自體髕腱移植物重建前交叉韌帶術(shù)后，隨機(jī)選擇是否注射PRP，用核磁共振（MRI）進(jìn)行術(shù)后評(píng)估。結(jié)果顯示在4周和6周時(shí)PRP組與對(duì)照組相比髕腱移植物結(jié)構(gòu)重塑更佳。但是血小板濃縮液不只是PRP，文獻(xiàn)中[8]基于白細(xì)胞和纖維蛋白的成分不同將血小板濃縮液分為4個(gè)家族：純的富血小板血漿（pure platelet-rich plasma，P-PRP）、富白細(xì)胞和血小板血漿（leukocyte-and platelet-rich plasma，L-PRP）、純的富血小板纖維蛋白（pure platelet-rich fi?brin，P-PRF）、富白細(xì)胞血小板纖維蛋白（leukocyteand platelet-rich fibrin，L-PRF）。P-PRP是指富含生長因子的血漿，L-PRP通常以膠體或液體的形式存在，包被有低密度的膠原蛋白網(wǎng)并含有白細(xì)胞。P-PRF又被稱為富血小板纖維蛋白基質(zhì)（platelet-rich fibrin ma?trix，PRFM），L-PRF包含有高密度的纖維蛋白網(wǎng)并僅以膠體形式存在。這些血小板濃縮液都主要含有表皮生長因子（EGF）、胰島素樣生長因子（IGF-Ⅰ）、轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和堿性成纖維細(xì)胞生長因子。這些因子在細(xì)胞的增殖分化、趨向性和血管再生中起著重要作用。PRP的獲取一般要多次離心獲得，并且要加入外源性的抗凝劑及激活劑，操作較復(fù)雜，易產(chǎn)生污染；另一方面沒有標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一的方法來獲得PRP，因此可能產(chǎn)生不同含量的血小板和生長因子進(jìn)而影響結(jié)果。而本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的LPRF是第二代的血小板濃縮液，一次離心即可獲得，無需加入抗凝劑，在離心過程中L-PRF即被激活，無需添加外源性激活劑[9，10]。并且有研究表明[10]L-PRF中的生長因子持續(xù)緩慢地釋放且持續(xù)時(shí)間較長。另外，PRF在整形外科的實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)用較多，研究[11，12]顯示PRF能促進(jìn)骨缺損區(qū)骨再生。也有研究[13]表明L-PRF可以促進(jìn)肩袖損傷修補(bǔ)術(shù)后早期的血管再生反應(yīng)。而腱骨的早期愈合是腱骨界面的新生骨長入肌腱與Sharpey樣纖維相互錨固的過程[14]。因此本實(shí)驗(yàn)假設(shè)L-PRF可以促進(jìn)移植肌腱與關(guān)節(jié)外骨道壁的愈合。上述組織學(xué)的結(jié)果也表明其可以促進(jìn)關(guān)節(jié)外腱骨的早期愈合，這可能與L-PRF中含有多種生長因子及白細(xì)胞有關(guān)，但其具體機(jī)制有待深入研究。

陸軍等[15]曾使用大鼠關(guān)節(jié)外骨道建立腱骨愈合模型，本實(shí)驗(yàn)采用類似的方法。該模型的手術(shù)操作相對(duì)簡單，對(duì)患肢的影響較小，且可雙側(cè)肢體同時(shí)造模。但是，本實(shí)驗(yàn)也有許多不足之處，如樣本量較少，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)只有5只兔子；本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果僅用了組織學(xué)的切片觀察，而未進(jìn)行生物力學(xué)的定量分析及分子生物學(xué)上的蛋白表達(dá)研究；另外，實(shí)驗(yàn)觀察的時(shí)間較短，其長期的愈合情況有待進(jìn)一步觀察研究。

總之，腱骨愈合研究的核心問題在于實(shí)施一定的干預(yù)方法促進(jìn)其更快、更加牢固的愈合。本實(shí)驗(yàn)采用自體外周血來源的L-PRF，具有提取簡單、價(jià)廉、創(chuàng)傷小、無排斥反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)，且能夠促進(jìn)關(guān)節(jié)外腱骨的早期愈合。隨著研究的深入，其一定會(huì)有廣闊的臨床應(yīng)用前景。

[1]Ersen A，Demirhan M，Atalar AC，et al.Platelet-rich plas?ma for enhancing surgical rotator cuff repair：evaluation and comparison of two application methods in a rat mod?el[J].Arch Orthop Trauma Surg，2014，134（3）：405-411.

[2]Dohan Ehrenfest DM，Del Corso M，Diss A，et al.Threedimensional architecture and cell composition of a Chouk?roun's platelet-rich fibrin clot and membrane[J].J Peri?odontol，2010，81（4）：546-555.

[3]Sun L，Zhou X，Wu B，et al.Inhibitory effect of synovial fluid on tendon-to-bone healing：an experimental study in rabbits[J].Arthroscopy，2012，28（9）：1297-1305.

[4]Demirag B，Sarisozen B，Ozer O，et al.Enhancement of tendon-bone healing of anterior cruciate ligament grafts by blockage of matrix metalloproteinases[J].J Bone Joint Surg Am，2005，87（11）：2401-2410.

[5]Doschak MR，Zernicke RF.Structure，function and adapta?tion of bone-tendon and bone-ligament complexes[J].J Musculoskelet Neuronal Interact，2005，5（1）：35-40.

[6]Wu Y，Dong Y，Chen S，et al.Effect of platelet-rich plas?ma and bioactive glass powder for the improvement of ro?tator cuff tendon-to-bone healing in a rabbit model[J]. Int JMol Sci，2014，15（12）：21980-21991.

[7]Seijas R，Ares O，Catala J，et al.Magnetic resonance im?aging evaluation of patellar tendon graft remodelling af?ter anterior cruciate ligament reconstruction with or with?out platelet-rich plasma[J].J Orthop Surg（Hong Kong），2013，21（1）：10-14.

[8]Dohan Ehrenfest DM，Rasmusson L，Albrektsson T.Classi?fication of platelet concentrates：from pure platelet-rich plasma（P-PRP）to leucocyte-and platelet-rich fibrin（LPRF）[J].Trends Biotechnol，2009，27（3）：158-167.

[9]Choukroun J，Diss A，Simonpieri A，et al.Platelet-rich fi?brin（PRF）：a second-generation platelet concentrate.Part IV：clinical effects on tissue healing[J].Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod，2006，101（3）：e56-60.

[10]Kazemi D，F(xiàn)akhrjou A.Leukocyte and Platelet Rich Plas?ma（L-PRP）Versus Leukocyte and Platelet Rich Fibrin（LPRF）For Articular Cartilage Repair of the Knee：A Com?parative Evaluation in an Animal Model[J].Iran Red Crescent Med J，2015，17（10）：e19594.

[11]Durmuslar MC，Balli U，Ongoz Dede F，et al.Evaluation of the effects of platelet-rich fibrin on bone regeneration in diabetic rabbits[J].J Craniomaxillofac Surg，2016，44（2）：126-133.

[12]Li Q，Reed DA，Min L，et al.Lyophilized platelet-rich fi?brin（PRF）promotes craniofacial bone regeneration through Runx2[J].Int JMol Sci，2014，15（5）：8509-8525.

[13]Zumstein MA，Rumian A，Lesbats V，et al.Increased vas?cularization during early healing after biologic augmenta?tion in repair of chronic rotator cuff tears using autolo?gous leukocyte-and platelet-rich fibrin（L-PRF）：a pro?spective randomized controlled pilot trial[J].J Shoulder Elbow Surg，2014，23（1）：3-12.

[14]Cohen DB，Kawamura S，Ehteshami JR，et al.Indometha?cin and celecoxib impair rotator cuff tendon-to-bone healing[J].Am J Sports Med，2006，34（3）：362-369.

[15]陸軍，Jr RV.大鼠關(guān)節(jié)外骨隧道游離肌腱移植模型的建立[J].中華骨科雜志，2014，34（8）：864-871.

Effectsof Leukocyte-and Platelet-rich Fibrin on Tendon-bone Healing of Rabbits’Extra-articular Bone Tunnel in the Early Period

Liu Yijun，Xu Bin，Tu Jun，Yu Gang
DepartmentofSports Injury Arthroscopic Surgery，The FirstAffiliated HospitalofAnhuiMedicalUniversity，Hefei 230022，China

Xu Bin，Email：youchen100@126.com

ObjectiveTo evaluate the early effect of leukocyte-and platelet-rich fibrin（L-PRF）on tendon-bone healing in rabbits’extra-articular bone tunnel.M ethodsThirty healthy New Zealand rab?bits were random ly divided into an experimental group and a control group，each of 15.The semitendi?nosus tendon harvested from the hind leg of each rabbit was prepared as free autografts.Each auto?graft was implanted into the bone tunnel created at ipsilateral proximal tibial metaphysis.The experi?mental group was added with autologous peripheral blood-derived L-PRF，while the control group did not add anything.Speciments from each group were harvested at 4，8 and 12 weeks after operation. The morphological changes were observed and evaluated at each time point.The fibroblasts on the ten?don-bone interface were counted and analyzed under the high magnification microscope.ResultsThe number of fibroblasts between the tendon and bone in the experimental group was significantly higher than that of the control group at each time point（P＜0.05）.And the connection between tendon and bone was closer and the collagen fibers were more regular in the experimental group than the control group at each time point.Sharpey’s-like fibers which marked the early healing of the tendon to bone，were observed at 4th week in the experimental group，while they were observed at 8th week in the con?trol group.As the healing time extended，Sharpey’s like fibers continue to increase in both groups and significant differences were observed in the histological morphology（Buark grades）between the two groups（P＜0.05）.Conclusion Autologous peripheral blood-derived L-PRF can promote early healing of autologous tendon to bone in the extra-articular bone tunnel of model rabbit.

leukocyte-and platelet-rich fibrin，extra-articular，tendon bone healing

2016.09.03

安徽省自然科學(xué)基金（編號(hào)：1208085MH157）

徐斌，Email：youchen100@126.com