譚俊鋒

[摘要] 目的 分析EAST-6特異性T淋巴細(xì)胞在結(jié)核性胸膜炎診斷中的臨床價值。 方法 選取2014年8月～2016年7月我院收治的28例胸腔積液患者為研究對象，按照患者的皮膚結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將其分為結(jié)核性胸膜炎組（16例）和腫瘤性胸膜炎組（12例），采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)測定法（Elispot）對兩組患者胸腔積液及外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)早期分泌抗原靶蛋白6（EAST-6）進(jìn)行檢測，并分析EAST-6對診斷結(jié)核性胸膜炎的應(yīng)用價值。 結(jié)果 通過檢測發(fā)現(xiàn)，結(jié)核性胸膜炎組患者的胸腔積液及外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6的陽性檢出率分別為87.5%及81.25%，均明顯高于腫瘤性胸膜炎組的8.33%及8.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；胸腔積液中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6臨床診斷的特異度和敏感度分別為84.61%和93.33%，外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6的臨床診斷的特異度和敏感度分別為78.57%和92.86%，EAST-6診斷結(jié)核性胸膜炎的特異度和敏感度較高。 結(jié)論 EAST-6特異性T淋巴細(xì)胞在結(jié)核性胸膜炎診斷中具有較高的特異性，為臨床診斷結(jié)核性胸膜炎提供參考依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] EAST-6；結(jié)核性胸膜炎；診斷；臨床價值

[中圖分類號] R521.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）07-207-04

Study on EAST-6 specific T lymphocytes in the diagnosis of tuberculous pleurisy

TAN Junfeng

Department of Respiratory，F(xiàn)oshan Gaoming District People's Hospital， Foshan 528500，China

[Abstract] Objective To analyze the clinical value of EAST-6 specific T lymphocytes in the diagnosis of tuberculous pleurisy. Methods 28 patients with pleural effusion who were admitted to or hospital from August 2014 to July 2016 were selected as the research object.They were allocated to the tuberculous pleurisy group with 16 cases and the cancerous pleurisy group with 12 cases according to results of tuberculin skin tests.Enzyme linked immunospot assay （ELISPOT） were used to detect early secreting antigenic target-6（EAST-6） in T lymphocytes of pleural effusion and peripheral blood and to analyze the applicative value of EAST-6 in the diagnosis of tuberculous pleurisy. Results By testing，it is found that the positive rates of EAST-6 in T lymphocytes of pleural effusion and peripheral blood of patients with tuberculous pleurisy were respectively 87.5% and 81.25%，both significantly higher than those of the cancerous pleurisy group 8.33% and 8.33% （P<0.05）.The specificity and sensitivity of clinical diagnosis of EAST-6 in T lymphocytes of pleural effusion were respectively 84.61% and 93.33% while those of the peripheral blood were respectively 78.57% and 92.86%.In addition，specificity and sensitivity of EAST-6 in diagnosis of tuberculous pleurisy were higher. Conclusion EAST-6 specific T lymphocytes in the diagnosis of tuberculous pleurisy HAS high specificity and it can provide the reference for the clinical diagnosis of tuberculous pleurisy.

[Key words] Early secreting antigenic target-6；Tuberculous pleurisy；Diagnosis；Clinical value

結(jié)核性胸膜炎是由結(jié)核桿菌引起的胸膜炎癥，已成為臨床較為常見的結(jié)核病[1]，但由于目前缺乏對該病診斷的特異性指標(biāo)，因此結(jié)核性胸膜炎的早期診斷和鑒別仍成為臨床研究的重點(diǎn)課題[2]。有研究報(bào)道，EAST-6為結(jié)核分枝桿菌感染早期分泌的蛋白，具有高度的特異性[3]，本院通過采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)測定法對結(jié)核性胸膜炎患者胸水及外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6進(jìn)行檢測，取得較好的效果，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院于2014年8月～2016年7月期間收治的胸腔積液患者28例；對所有患者行超聲引導(dǎo)下胸膜活檢聯(lián)合胸水結(jié)核分歧桿菌培養(yǎng)[4]，并按照檢測結(jié)果將患者分為結(jié)核性胸膜炎組和腫瘤性胸膜炎組，病例數(shù)分別為16例和12例。結(jié)核性胸膜炎組男10例、女6例；年齡38～72歲，平均（44.6±5.3）歲；腫瘤性胸膜炎組男7例、女4例；年齡38～72歲，平均（44.7±5.1）歲；淋巴瘤伴胸膜轉(zhuǎn)移患者2例，肺癌伴胸行膜轉(zhuǎn)移患者5例，卵巢癌伴胸膜轉(zhuǎn)移1例，乳腺癌伴胸膜轉(zhuǎn)移3例，胃癌伴胸膜炎轉(zhuǎn)移1例。兩組患者年齡、性別比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。具有可比性。

1.2 研究方法

于清晨采集所有患者胸腔積液100mL，其中40mL用于常規(guī)生化指標(biāo)檢驗(yàn)，另60mL經(jīng)每分鐘1800轉(zhuǎn)離心處理10min后，取底層沉渣進(jìn)行涂片，經(jīng)常規(guī)處理后，將涂片置于-38℃的冰箱中密封備用。另外于清晨采集所有患者外周靜脈血10mL，其中3mL用于生化指標(biāo)檢測，另7mL經(jīng)離心處理，分離外周血T淋巴細(xì)胞，并取2mL血清作為檢測樣本。對所有患者的胸腔積液及外周血進(jìn)行常規(guī)生化指標(biāo)檢測，采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)測定法（Elispot）對兩組患者胸腔積液及外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)早期分泌抗原靶蛋白6（EAST-6）進(jìn)行檢測，并分析EAST-6對診斷結(jié)核性胸膜炎的應(yīng)用價值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS18.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組胸腔積液T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6的陽性檢測比較

結(jié)核組和腫瘤組患者胸腔積液中T淋巴細(xì)胞內(nèi)早期分泌抗原靶蛋白6（EAST-6）檢測出的陽性例數(shù)分別為14例和1例，陽性檢測率分別為87.5%、8.33%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 外周血T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6的陽性檢測比較

結(jié)核組患者的外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6的陽性例數(shù)為13例，檢出的陽性率為81.25%，而腫瘤組患者的外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6的陽性例數(shù)為1例，檢出的陽性率為8.33%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3 EAST-6的臨床診斷價值比較

胸腔積液中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6臨床診斷的特異度和敏感度分別為84.61%、93.33%，陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為87.50%、91.67%，陽性似然比和陰性似然比分別為6.06、0.08，約登指數(shù)為0.77。而外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6的臨床診斷特異度為78.57%，敏感度為92.86%，陽性預(yù)測值為81.25%，陰性預(yù)測值為91.67%，陽性似然比和陰性似然比分別為4.33和0.09，約登指數(shù)為0.77，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表3，結(jié)果提示胸腔積液與外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6在診斷結(jié)核性胸膜炎中的特異度和敏感度均較高。

2.4 兩組患者生化檢驗(yàn)結(jié)果比較

對結(jié)核組和腫瘤組患者生化指標(biāo)進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)兩組患者在LDH及CEA等指標(biāo)方面的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表4。

3 討論

近年來，結(jié)核性胸膜炎已成為胸腔積液中較為常見的病因[5]，它是由結(jié)核菌及其代謝產(chǎn)物進(jìn)入正處于高度過敏狀態(tài)的機(jī)體胸膜腔中所引起的胸膜炎癥[6-7]。當(dāng)機(jī)體處于高度變態(tài)反應(yīng)狀態(tài)，結(jié)核菌及其代謝產(chǎn)物侵入胸膜，則引起滲出性胸膜炎[8]。結(jié)核性胸膜炎病變早期表現(xiàn)為胸膜充血，血管通透

性改變，中性粒細(xì)胞浸潤，隨著病情進(jìn)展，以淋巴細(xì)胞浸潤為主，胸膜表面有纖維素性滲出，繼而出現(xiàn)漿液滲出[9]。結(jié)核性胸膜炎感染的途徑有三個：肺內(nèi)結(jié)核病變通過胸膜直接蔓延；結(jié)核分枝桿菌經(jīng)肺門、縱隔淋巴結(jié)、淋巴管到達(dá)胸膜；通過血行播散到胸膜[10]。目前，臨床對于結(jié)核性胸膜炎的早期診斷主要通過胸膜活檢、胸腔積液檢驗(yàn)、胸部CT檢查等檢查方法[11]，而胸膜活檢病理驗(yàn)證和胸腔積液檢驗(yàn)出結(jié)核分枝桿菌作為臨床診斷結(jié)核性胸膜炎的金標(biāo)準(zhǔn)因存在創(chuàng)傷性大、檢測陽性率低等缺點(diǎn)為結(jié)核性胸膜炎的早期診斷及治療帶來困難[12]。結(jié)核分枝桿菌是引起結(jié)核病的病原菌，當(dāng)機(jī)體被該病菌感染后，機(jī)體會出現(xiàn)該病菌的抗原，而宿主免疫功能狀態(tài)不會對結(jié)核菌抗原的臨床檢驗(yàn)造成干擾，因此，可將結(jié)核菌抗原作為結(jié)核分枝桿菌存在的依據(jù)[13]。

EAST-6即早期分泌抗原靶蛋白6，是結(jié)核分枝桿菌在感染早期分泌出的一種抗原，常存在于感染細(xì)胞的吞噬小體內(nèi)，或者以游離的形式存在于培養(yǎng)基中[14]。有研究報(bào)道，早期分泌抗原靶蛋白6在感染的T淋巴細(xì)胞內(nèi)生長時的表達(dá)較其在普通培養(yǎng)基生長時表達(dá)的水平明顯較高[15]，正因如此，檢測T淋巴細(xì)胞內(nèi)早期分泌抗原靶蛋白6較檢測細(xì)胞外早期分泌抗原靶蛋白6的特異度會更高。本院通過對28例胸腔積液患者胸水中及外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)早期分泌抗原靶蛋白6進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，EAST-6特異性T淋巴細(xì)胞在結(jié)核性胸膜炎診斷中具有較高的特異度和敏感度。

研究發(fā)現(xiàn)，與腫瘤組患者比較，結(jié)核組患者胸腔積液中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6檢測的陽性病例數(shù)14例及陽性率87.0%均明顯較高；同時研究還發(fā)現(xiàn)結(jié)核組患者外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6檢測的陽性例數(shù)為13例，陽性率為81.25%，明顯高于腫瘤組水平。結(jié)果提示，EAST-6在結(jié)核性胸膜炎中的表達(dá)較高。但在試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，在胸腔積液和外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6檢測陰性結(jié)果分別有2例和3例，可能是由于抗原陽性細(xì)胞數(shù)較少而導(dǎo)致的。

研究表明，胸腔積液與外周血中T淋巴細(xì)胞內(nèi)EAST-6在診斷結(jié)核性胸膜炎中的特異度和敏感度均較高，特異度分別為84.61%和78.57%，敏感度分別為93.33%和92.86%。研究結(jié)果提示，EAST-6在結(jié)核性胸膜炎診斷中具有較高的臨床價值。

綜上所述，EAST-6特異性T淋巴細(xì)胞在結(jié)核性胸膜炎診斷中具有較高的特異性，對于臨床鑒別和診斷結(jié)核性胸膜炎提供參考依據(jù)。因此，EAST-6作為一項(xiàng)診斷結(jié)核性胸膜炎的新型技術(shù)具有較好的臨床應(yīng)用價值[16]。由于本次研究的樣本量較少，研究結(jié)果可能與其他學(xué)者報(bào)道的不一致。在今后的工作中，本院會加大樣本量的搜集，進(jìn)行深入探討。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 白雪娟，梁艷，劉銀萍，等.ELISPOT檢測胸水γ干擾素效應(yīng)T細(xì)胞對結(jié)核性胸膜炎的診斷價值研究[J].中國病原生物學(xué)雜志，2015，12（4）：299-302.

[2] 肖作漢，孟岡，王立志，等.結(jié)核性胸膜炎患者并發(fā)結(jié)核性腦膜炎的早期診斷體會[J].臨床內(nèi)科雜志，2014，31（12）：836-838.

[3] 李麗，喬丹，李琴，等.結(jié)核胸液中EAST-6多肽特異性多功能CD4～+T細(xì)胞數(shù)量及功能分析[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2011，27（1）：26-28.

[4] 李玉平，烏蘭，李永杰，等.結(jié)核性胸膜炎的超聲引導(dǎo)胸膜活檢及結(jié)核分枝桿菌診斷[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2011，21（10）：2012-2013.

[5] 葛巍，李娜，沈霞，等.早期分泌靶抗原6在結(jié)核性腦膜炎早期診斷中的價值[J].中國醫(yī)師進(jìn)修雜志，2011，34（25）：14-17.

[6] 馬江濤，吳文苑，張立軍，等.EAST-6、IL-8和INF-γ在結(jié)核性腦膜炎早期診斷中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2014，6（14）：2027-2028.

[7] 楊新婷，梁清濤，楊揚(yáng)，等.不同抗原全血ELISA檢測技術(shù)對活動性肺結(jié)核的輔助診斷價值研究[J].中國防癆雜志，2013，35（11）：10-13.

[8] 杜風(fēng)嬌，戈啟萍，韋攀健，等.酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)檢測γ干擾素對結(jié)核性胸膜炎的輔助診斷價值[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，34（7）：617-622.

[9] 石瑞如，張曼林，韓云港，等.胸水中干擾素釋放測定在結(jié)核性胸膜炎診斷中的價值[J].中華生物醫(yī)學(xué)工程雜志，2013，19（4）：324-326.

[10] 陳希，李曉轅，李玲，等.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在結(jié)核性胸膜炎診斷中的價值[J].中國防癆雜志，2015，37（1）：40-46.

[11] 杜巖青，馮爽，馮冉冉，等.T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)在結(jié)核性胸膜炎診斷中的價值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012，27（12）：1070-1073.

[12] 高增艷，苗麗君，張瑞霞，等.外周血T-SPOT.TB預(yù)測結(jié)核性胸膜炎患者病情穩(wěn)定快慢的價值[J].廣東醫(yī)學(xué)，2013，34（17）：2655-2657.

[13] 張亦飛，廖小雯，張麗儀，等.結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對結(jié)核性胸膜炎診斷的臨床價值[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，33（1）：47-49.

[14] 杜鳳嬌，陳曦，劉菲，等.不同抗原酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測技術(shù)對結(jié)核性胸膜炎輔助診斷價值的比較[J].北京醫(yī)學(xué)，2011，33（12）：981-985.

[15] 戈啟萍，賀正一，高微微，等.流式細(xì)胞術(shù)檢測特異性刺激后淋巴細(xì)胞亞群變化對結(jié)核性胸腔積液的診斷價值[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2013，36（6）：406-410.

[16] 黃秋生，陳惠芬，高愛霞，等.胸水單核細(xì)胞內(nèi)早期分泌抗原靶蛋白6在結(jié)核性胸膜炎診斷中的價值[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2016，26（12）：2727-2729.

（收稿日期：2017-01-03）