許 慶 何繼祥 安艷蘇

云南省曲靖市食品藥品檢驗檢測中心，云南 曲靖 655000

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HPLC法測定感冒止咳膏中黃芩苷的含量

許 慶 何繼祥 安艷蘇

云南省曲靖市食品藥品檢驗檢測中心，云南 曲靖 655000

目的：建立高效液相色譜法(HPLC)測定感冒止咳膏中黃芩苷含量的方法。方法： 采用BDS HYPERSIL C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；以甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)為流動相，梯度洗脫(0～11min，55%B；11～12min，55%B→20%B；12～19min， 20%B；19～20min，20%B→55%B；20～25min，55%B)；流速為1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：280nm。結(jié)果：黃芩苷濃度在5.70～91.12μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=0.9999，平均回收率為97.88%(RSD為1.16%)。結(jié)論：該方法準確、快速、簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于感冒止咳膏中黃芩苷的含量測定。

感冒止咳膏；黃芩苷；高效液相色譜法

感冒止咳膏為曲靖市第一人民醫(yī)院制劑室研制的制劑,由黃芩、南沙參、柴胡、款冬花、百部、荊芥、紫菀等十六味中藥制成。該品具有解表驅(qū)邪、清熱潤肺、止咳化痰的作用，主要用于傷風感冒引起的喉嚨腫痛，咳嗽、痰多等癥。其中黃芩為制劑中的君藥，來源于唇形科黃芩屬植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi) 的干燥根，是常用中藥之一。黃芩藥用歷史悠久，始列于《神農(nóng)本草經(jīng)》。性寒、味苦; 歸肺、心、肝、大腸經(jīng)，能清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎，為清熱燥濕常用藥[1]。黃芩中主要藥理活性成分為黃芩苷，已被證明有廣泛的藥理活性，具有消炎、解熱、抗病毒、抗菌的作用[2-4]。但有研究發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地、不同栽培年限及不同部位的黃芩藥材中的黃芩苷含量差別較大[5]。感冒止咳膏為多味藥材制成的膏狀液體制劑，其中所含成分較為復雜，現(xiàn)行質(zhì)量標準[6]中僅以薄層色譜來鑒別其中的金蕎麥、桔梗兩種藥材，質(zhì)量標準滯后，急需建立一些對制劑中君藥成分定量控制的方法。筆者參照文獻[1,7]，以黃芩中黃芩苷為定量控制指標，采用高效液相色譜法對黃芩苷進行含量測定，為有效控制“感冒止咳膏”質(zhì)量提供可靠且簡便易行的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1260型高效液相色譜儀(包括G1311C系列四元泵，G1314F VWD檢測器，G1316A柱溫箱，G1329B自動進樣器)；KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；METTLE MS205DU電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；PURELAB Flex 3一體式超純水儀(英國ELGA公司)

1.2 材料 黃芩苷對照品(批號：110715-201318，中國食品藥品檢定研究院，含量為93.3%)；磷酸(分析純，批號：2015071401，成都市科龍化工試劑廠)；甲醇(色譜純，CAS號：67-56-1，賽默飛世爾科技(中國)有限公司)；乙醇(分析純，批號：20160708，成都市科龍化工試劑廠)；水為純化水。感冒止咳膏(批號：20160714、20160806、20160923，曲靖市第一人民醫(yī)院制劑室)。陰性樣品用藥材南沙參、柴胡、款冬花、百部、荊芥、紫菀等十六味中藥來源于曲靖市食品藥品檢驗檢測中心中藥標本室經(jīng)檢驗合格的留樣標本。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：BDS HYPERSIL C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)，梯度洗脫(0～11min，55%B；11～12min，55%B→20%B；12～19min，20%B；19～20min，20%B→55%B；20～25min，55%B)；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：280nm；進樣量：10μL。

2.2 溶液制備2.2.1 供試品溶液制備 取本品內(nèi)容物1.0g，精密稱定，置50mL燒杯中，加入70%乙醇攪拌使溶化，再轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，用70%乙醇洗滌燒杯，洗液并入量瓶中，超聲(頻率：45KHz，功率：300W)15min，取出，放冷，用70%乙醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品(含量93.3%)12.21mg置50mL量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，即得黃芩苷質(zhì)量濃度為0.2278mg/mL的對照品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按感冒止咳膏處方比例，分別稱取除黃芩外的其它藥材，依感冒止咳膏工藝制備不含黃芩的陰性樣品，并按“2.2.1”項下制備陰性樣品溶液。

2.3 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取“2.2.2”項下黃芩苷對照品溶液0.625、1.25、2.5、5.0、10.0mL，分別置25mL量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，制得含黃芩苷5.70、10.39、22.78、45.56、91.12μg/mL的系列對照品溶液。在“2.1”項下色譜條件進樣分析，以對照品濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，計算線性回歸方程，得黃芩苷的回歸方程Y=35.4007X-6.0126(r=0.9999)。結(jié)果表明：黃芩苷濃度在5.70～91.12μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗 精密吸取同一黃芩苷對照品溶液(含黃芩苷45.56μg/mL)在“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，測定峰面積值，RSD為0.8%，表明儀器的精密度良好。

2.5 重復性試驗 取同1批感冒止咳膏(批號：20160714)6份，按“2.2.1”項下的方法處理，記錄峰面積，計算含量，結(jié)果每1g樣品中平均含黃芩苷1.66mg，RSD為1.2%，表明該方法的重復性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同1份供試品溶液(批號：20160714)，分別于0、2、8、12、16、24h按“2.1”項下色譜條件進行分析，記錄峰面積。結(jié)果黃芩苷的RSD為1.1%，表明供試品溶液在24h內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗 分別取已知含量的同一批感冒止咳膏(批號：20160714)約0.5g，精密稱定，共6份，分別精密加入對照品溶液(濃度為0.2278mg/mL)4mL，按“2.2.1”項下的方法處理，制備供試液，分別測定，計算回收率。平均回收率為97.88%，RSD為1.16%。見表1。

2.8 專屬性試驗 將陰性樣品溶液按“2.1”項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果色譜圖中在黃芩苷相應出峰位置未出現(xiàn)干擾峰。

2.9 樣品含量測定 取不同批號的供試品3批按“2.2.1”項下的方法處理，制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，按上述色譜條件測定峰面積積分值，以外標法計算黃芩苷含量。見表2。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果 (n=6)

表2 樣品含量測定結(jié)果 (mg/g,n=3)

3 討論

3.1 流動相的選擇 研究先后試用文獻中[1,7]甲醇-水-磷酸、甲醇-水-冰乙酸為流動相的等度分析，由于樣品中成分復雜，黃芩苷峰后仍還有一些強保留的雜質(zhì)峰出現(xiàn)，整個分析時間較長，考慮到分析時間及黃芩苷峰的分離效果，筆者采用了甲醇-0.2%磷酸為流動相并采取梯度洗脫，結(jié)果能得到對稱性、分離度均較好的黃芩苷峰，且能把強保留雜質(zhì)較快的洗脫出來，縮短了分析時間，提高了分析效率。故選用甲醇-0.2%磷酸為流動相梯度洗脫。

3.2 供試品取樣方法的選擇 取樣時先采用量取樣品體積，但發(fā)現(xiàn)由于供試品為粘稠的膏狀液體，精密量取體積較難操作，故筆者針對制劑特點采用稱取樣品質(zhì)量，并先于燒杯中溶化樣品再轉(zhuǎn)移至量瓶中溶解定容，整個取樣過程簡單、易行。

3.3 提取條件的選擇 超聲時間的確定：精密稱取樣品(批號20160714)5份，每份約1.0g，按“2.2.1”項下的方法處理，5份樣品分別超聲(頻率：45KHz；功率：300W)處理5、10、15、20、25min，結(jié)果超聲10min后黃芩苷含量基本不變，證明樣品超聲處理15min，能將樣品中的黃芩苷提取完全，所以超聲(頻率：45KHz；功率：300W)時間確定為15min。

此方法準確、快速、簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于感冒止咳膏中黃芩苷的含量測定。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2015:301.

[2]呂武清，龍新華.中成藥中的藥材薄層色譜鑒別[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996:455-468.

[3]徐丹洋，陳佩東，張麗妹，等.黃芩的化學成分研究[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17(1):78.

[4]王雅芳，李婷，唐正海，等.中藥黃芩的化學成分及藥理研究進展[J].中華中醫(yī)藥學刊，2015，1(33):206-211.

[5]鄢長華，陳俊林，趙海濤. HPLC法對不同栽培年限及不同產(chǎn)地的黃芩中黃芩苷的含量測定分析研究 [J].內(nèi)蒙古醫(yī)學雜志，2006，38(6):515-517.

[6]云南省食品藥品監(jiān)督管理局.云南醫(yī)院制劑標準[S]：滇ZJGF/2012-0001.

[7]劉美蘭, 楊立新，萬元浩，等. RP-HPLC法測定7種藥用黃芩中黃芩苷和漢黃芩苷的含量[J]. 藥物分析雜志，2002, 22(2): 99-102.

Dtermination of the Content of Baicalin in Cold Cough Relieving Ointment by HPLC

XU Qing HE Jixiang AN Yansu

Qujing Food and Drug Inspection Test Center of Yunnan,Qujing 655000,China

Objective To establish an HPLC method for the determination of Baicalin in cold cough relieving plaster (HPLC). Methods Using BDS HYPERSIL C18column (250mm×4.6mm, 5μm); (A) in methanol -0.2% phosphoric acid solution (B) as mobile phase, gradient elution (0～11min, 11～12min, 55%B; 55%B, 20%B; 20%B; 12～19min, 19～20min, 20%B, 55%B; 20～25min. 55%B); the flow rate was 1.0mL/min; column temperature: 30 C; detection wavelength: 280nm. Results Baicalin concentration in the range of 5.70～91.14μg and peak area showed a good linear relationship,r=0.9999, the average recovery was (RSD=1.1%). Conclusion The method is accurate, rapid, simple, reliable and stable. It can be used to determine the content of Baicalin in cold cough relieving ointment.

Cold Cough Ointment; Baicalin; HPLC

許慶，男，漢族，本科，主管藥師，研究方向為食品藥品檢測。E-mail:114204205@qq.com

R284.1

A

1007-8517(2017)11-0043-03

2017-04-05 編輯：梁志慶)