萇 玲 吳孟嵐 舒 柯* 王定兵 龍建丹 朱 丹

1.貴州省藥品檢驗(yàn)所，貴州 貴陽 550004；2.黔東南州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，貴州 凱里 556000； 3.貴州圣濟(jì)堂制藥有限公司，貴州 貴陽 550004

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膽清膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

萇 玲1吳孟嵐2舒 柯1*王定兵3龍建丹3朱 丹3

1.貴州省藥品檢驗(yàn)所，貴州 貴陽 550004；2.黔東南州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，貴州 凱里 556000； 3.貴州圣濟(jì)堂制藥有限公司，貴州 貴陽 550004

目的：建立膽清膠囊中虎耳草的薄層色譜鑒別及虎耳草中巖白菜素的含量測(cè)定方法。方法：采用薄層色譜法對(duì)膽清膠囊中虎耳草進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法測(cè)定虎耳草中巖白菜素的含量；色譜柱為Thermo C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相以乙腈為流動(dòng)相A，以0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B，采用梯度洗脫；流速1mL/min；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。結(jié)果：薄層色譜鑒別斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無干擾；巖白菜素在0.05048μg～0.70666μg范圍中線性關(guān)系良好，r=0.9993，平均回收率為98.01%，RSD為1.39%(n=6)。結(jié)論：所建立的方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于膽清膠囊中虎耳草鑒別和巖白菜素的含量測(cè)定。

膽清膠囊；虎耳草；巖白菜素

膽清膠囊是按苗醫(yī)理論組方的復(fù)方制劑，具有清熱利濕、舒肝利膽的作用，臨床用于肝膽濕熱所致的脘脅疼痛、呃逆嘔惡、口干口苦、大便秘結(jié)，以及膽囊炎、膽石癥見上述證候者。膽清膠囊由虎耳草、鳳尾草、大黃和牛膽汁四味藥材組成[1]，方中虎耳草、鳳尾草、大黃粉碎成最細(xì)粉備用，牛膽汁濾過，與上述最細(xì)粉混勻，制成顆粒，干燥，裝入膠囊即得。原標(biāo)準(zhǔn)中只有大黃、牛膽汁及鳳尾草的薄層色譜鑒別和大黃的含量測(cè)定，對(duì)組方中成分最多的虎耳草無質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，為提高該中成藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增強(qiáng)用藥安全性，特建立虎耳草的薄層色譜鑒別及虎耳草中巖白菜素的含量測(cè)定。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters2695高效液相色譜儀及配套工作站；超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備廠，功率250W，頻率33kHz)；電子天平(梅特勒XPE205)。

1.2 材料 膽清膠囊(規(guī)格為0.3g/粒，批號(hào)：20150101、20150301、20150302)；陰性樣品自制；槲皮素(批號(hào)：100081-201408)、巖白菜素(批號(hào): 111532-201203)購自中國(guó)食品藥品檢定研究院。薄層色譜硅膠G(青島海洋化工有限公司)，乙腈為色譜純、水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別 取本品內(nèi)容物4g，加甲醇20mL，加熱回流2h，濾過，濾液加水5mL，蒸去甲醇，殘液用石油醚(30～60℃)提取3次，每次5mL，棄去石油醚液，提取后的水溶液加稀鹽酸5mL，水浴上加熱水解30min，冷卻后用乙酸乙酯20mL分2次振搖提取，合并提取液，揮干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液；取缺虎耳草的陰性樣品同法制成陰性對(duì)照溶液；另取槲皮素對(duì)照品加甲醇制成1mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液[2]。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2015年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶4∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，在紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光斑點(diǎn)。結(jié)果表明，樣品斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性無干擾。見圖1。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品的制備 精密稱取巖白菜素對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含巖白菜素0.04mg的溶液，即為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品的制備 取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率25kHz)1h，放冷，稱重，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 依照處方工藝，制備缺虎耳草的陰性樣品，并按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 色譜條件 色譜柱：Thermo-C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)，梯度洗脫(0～20min，9%A；20～22min，9%A→20%A；22～32min，20%A；32～34min，20%A→9%A；34～55min，9%A)；檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm；流速：1.0mL/min，柱溫：30℃；進(jìn)樣量10μL：理論塔板數(shù)按巖白菜素計(jì)算應(yīng)不低于5000。結(jié)果見圖2。2.2.5 線性范圍考察 巖白菜素對(duì)照品溶液：0.050476mg/mL，進(jìn)樣體積為1、2、4、6、7、10、12、14μL。 按上述色譜條件測(cè)定對(duì)照品峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，巖白菜素的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程，巖白菜素：y=1569274.1894x+6434.7273，r=0.9993。結(jié)果表明巖白菜素在0.05048～0.70666μg范圍中線性關(guān)系良好。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液10μL，按2.2.4項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定巖白菜素的峰面積。結(jié)果巖白菜素峰面積的RSD為0.67%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同1份供試品(20150302)，按2.2.2項(xiàng)下方法制備，按2.2.4項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8、10、24h進(jìn)樣，測(cè)定巖白菜素峰面積，RSD為0.78%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同1份供試品(20150302)，按2.2.2項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按2.2.4項(xiàng)下色譜條件測(cè)定巖白菜素含量，結(jié)果巖白菜素平均含量為0.8999mg/g，RSD為0.51%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知巖白菜素含量的供試品6份(平均含量為0.8999mg/g)，分別精密加入含0.01896mg/mL的巖白菜素對(duì)照品溶液25mL，按2.2.2項(xiàng)下方法制備，按2.2.4項(xiàng)下色譜條件測(cè)定巖白菜素含量，計(jì)算加樣回收率，平均加樣回收率為98.01%，RSD為1.39%，結(jié)果表明該方法回收率較好。結(jié)果見表1。

表1 巖白菜素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

2.2.9 樣品測(cè)定 分別精密稱取不同批次的供試品粉末1g，按2.2.2項(xiàng)下方法制備，按2.2.4項(xiàng)下色譜條件分別測(cè)定峰面積和計(jì)算巖白菜素含量，三批樣品測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定 (n=3)

3 討論

3.1 薄層色譜 試驗(yàn)中分別對(duì)溫度、濕度、以及薄層板進(jìn)行了考察，結(jié)果表明供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性無干擾，重現(xiàn)性好。

3.2 供試品的制備 試驗(yàn)中分別對(duì)提取方法、提取時(shí)間、提取溶劑以及提取溶劑的體積進(jìn)行了考察，結(jié)果表明50%的甲醇25mL超聲1h，有效成分提取完全，方法簡(jiǎn)便。

3.3 檢測(cè)波長(zhǎng) 經(jīng)查閱資料并對(duì)巖白菜素進(jìn)行光譜掃描后，確定檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。3.4 色譜條件優(yōu)化 試驗(yàn)中分別比較了不同的流動(dòng)相系統(tǒng)、柱溫及流速，結(jié)果以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，柱溫30℃，流速1.0mL/min時(shí)，色譜峰基線分離，峰型對(duì)稱，分離較好，保留時(shí)間適中。

虎耳草主要化學(xué)成分有巖白菜素、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷、槲皮素 3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素、沒食子酸、原兒茶酸、琥珀酸、反甲基丁烯二酸、β-谷甾醇及長(zhǎng)鏈烷烴等[4]。筆者在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上經(jīng)研究，增加了虎耳草的薄層鑒別和含量測(cè)定，方法專屬性好，靈敏度高，結(jié)果穩(wěn)定可靠，使膽清膠囊的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)更趨完善，可有效控制膽清膠囊的質(zhì)量。

[1]WS-10049(ZD-0049)-2002-2011Z .國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2]貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[M]. 貴陽：貴州科技出版社，2003:235.

[3]徐昌艷，張麗艷，李燕. 黔產(chǎn)苗藥虎耳草的 HPLC 指紋圖譜研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012,18(5):73-76.

[4]蒲祥，宋良科.虎耳草的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009, 37(31):15224 -15226.

Study on Quality Standard of Danqing Capsule

CHANG Ling1WU Menglan2SHU Ke1*WANG Dingbing3LONG Jiandan3ZHU Dan3

1.Guizhou Provincial Institute for Drug Control, Guiyang 550004,China; 2.Qiandongnan Prefecture Food Drug Inspection Testing Center, Kaili 556000,China; 3.Guizhou Shengjitang Pharmaceutical Co. Ltd.Guiyang 550004,China

Objective To establish a method for the determination of Danqing capsule in the Saxifraga stolonifera by TLC and the content of Bergenin in Saxifraga stolonifera. Methods The TLC method of Danqing capsule in in the Saxifraga stolonifera were identified, the content of Bergenin in Saxifraga stolonifera was determined by HPLC; column chromatography Thermo C18(4.6mm×250mm，5μ), flow phase: with acetonitrile as the mobile phase A, with 0.1% phosphoric acid as mobile phase B, the gradient elution, flow rate of 1ml/min, column temperature 30℃, detection wavelength was 275nm.Results TLC spots were clear, without the interference of negative control; Bergeninum in 0.05048μg～0.70666μg range linear relationship is good,r=0.9993. The average recovery rate was 98.01%,RSD=1.39% (n=6). Conclusion The established method is simple, accurate and with good reproducibility and can be used for the determination of the content of Bergenin in Saxifraga stolonifera in Danqing capsule and the identification of Saxifraga stolonifera.

Danqing Capsule;Saxifragastolonifera; Bergenin

萇玲(1979-)，女，本科，主管藥師，研究方向?yàn)樗幤窂?fù)核檢驗(yàn)、標(biāo)準(zhǔn)擬定。E-mail:29630048@qq.com

R284.1

A

1007-8517(2017)11-0046-03

2017-04-10 編輯：梁志慶)