宣 偉

(阜陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心,安徽 阜陽(yáng) 236000)

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二極管陣列-高效液相色譜法測(cè)定月餅中的四種防腐劑

宣 偉

(阜陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心,安徽 阜陽(yáng) 236000)

關(guān)于月餅中安賽蜜的檢測(cè)沒(méi)有明確的前處理方法，而GB/T 5009.140—2003中對(duì)安賽蜜的檢測(cè)使用的流動(dòng)相較為復(fù)雜，本研究參照GB/T 5009.140—2003與GB/T 23495—2009的處理方法，利用106 g /L亞鐵氰化鉀溶液+ 220 g/L乙酸鋅作蛋白沉淀劑處理樣品后，過(guò)濾上機(jī)，經(jīng)Diamonsil C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)液相色譜柱分離，甲醇+0.02 mol/L乙酸銨溶液(體積比5∶95)作為流動(dòng)相，用二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)波長(zhǎng)選擇230 nm，各組分之間分離良好，無(wú)干擾，且測(cè)定相關(guān)系數(shù)均在0.999 9以上，檢測(cè)最低限0.000 450～0.000 675 mg/ml(S/N=3)，樣品加標(biāo)回收率為92.5%～102.5%。結(jié)果表明，該方法可用于月餅中防腐劑的檢測(cè)。

月餅；高效液相色譜法；防腐劑；二極管陣列檢測(cè)器

月餅作為中秋傳統(tǒng)美食，其跨地區(qū)流通及其常溫的貯藏方式?jīng)Q定其貨架期一般比較短。因此，一般添加防腐劑用于延長(zhǎng)貨架期。GB 2760—2014規(guī)定月餅防腐劑中安賽蜜和山梨酸的最大使用量不得超過(guò)0.3 mg/kg和1.0 g/kg，苯甲酸和糖精鈉按照規(guī)定不得檢出[1]。但是防腐劑超范圍、超限量使用現(xiàn)象仍然存在。GB/T 23495—2009規(guī)定了月餅等糕點(diǎn)中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉處理與檢驗(yàn)方法,但是無(wú)糕點(diǎn)中安賽蜜的檢測(cè)方法。目前，關(guān)于安賽蜜的測(cè)定僅僅為飲料中安賽蜜的高效液相色譜法,一方面流動(dòng)相復(fù)雜，另一方面也無(wú)具體針對(duì)月餅等糕點(diǎn)的具體處理方法[2-3]。因此,本研究結(jié)合GB/T 23495—2009與GB/T 5009.140—2003，探討在GB/T 23495—2009標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的高效液相色譜條件下分離該4種防腐劑的可行性，為節(jié)省時(shí)間、提高效率、避免相互干擾導(dǎo)致結(jié)論的誤判以及對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

儀器: LC-20AT 液相色譜儀(日本島津公司); 超聲波清洗器(德國(guó)ELMA)。

試劑: 除特別說(shuō)明外均為分析純。苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安塞蜜標(biāo)準(zhǔn)液: 濃度均為1.0 mg/ml(國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心)；甲醇,色譜純;0.02 mol/L乙酸銨溶液,稱(chēng)取1.54 g乙酸銨用水溶解定容至1 000 ml, 經(jīng)0.45 μ m濾膜過(guò)濾，超聲;220 g/L乙酸鋅溶液;106 g /L亞鐵氰化鉀溶液。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理

參照GB/T 23495—2009，稱(chēng)取粉碎的月餅樣品2 g于小燒杯中，用20 ml水?dāng)?shù)次清洗小燒杯將樣品移入25 ml容量瓶中，超聲振蕩提取5 min，取出后加2 ml 106 g/L亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入2 ml 220 g/L乙酸鋅溶液，搖勻，用水定容至刻度。移入離心管中，4 000 r/min 離心5 min，吸出上清液，過(guò)濾后，濾液待上機(jī)分析。

1.2.2 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18(250 mm ×4.6 mm，粒徑5 μm)。

流動(dòng)相：甲醇+0.02 mol/L 乙酸銨溶液(體積比5∶95)；流動(dòng)相流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：20 μl；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：35℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

圖1～圖4為4種防腐劑的色譜圖,由二極管陣列檢測(cè)器在190～800 nm內(nèi)掃描。

圖1 安賽蜜的色譜圖

對(duì)比4種物質(zhì)的吸收光譜圖得知，在200 nm以下流動(dòng)相有吸收，造成噪音過(guò)高，200 nm以上，安賽蜜在226.67 nm處最大吸收，苯甲酸在223.89 nm處最大吸收；山梨酸在 252.98 nm 處最大吸收； 糖精鈉在207.24 nm 處最大吸收。波長(zhǎng)250 nm處苯甲酸、糖精鈉靈敏度太低不能滿(mǎn)足檢測(cè)需要，為此選230 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖2 苯甲酸的色譜圖

圖3 山梨酸的色譜圖

圖4 糖精鈉的色譜圖

2.2 色譜分析

在1.2.2節(jié)色譜條件下測(cè)定，各個(gè)組分的色譜圖如圖5所示。

圖5 各個(gè)組分的色譜圖

由圖5可見(jiàn)，峰形及分離效果均比較好，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉4種物質(zhì)能夠完全分離，出峰時(shí)間分別是10.146、12.313、17.288、21.330 min。峰的對(duì)稱(chēng)性良好，峰與峰之間的分離效果好，無(wú)干擾。

2.3 線(xiàn)性范圍和檢出限

表1為各個(gè)組分的線(xiàn)性范圍、線(xiàn)性回歸方程、相關(guān)系數(shù)以及最小檢出限。按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，配置上述四種防腐劑的濃度為0.020、0.040、0.060、0.080、0.100 mg/ml，以各組分的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得到4種防腐劑的線(xiàn)性方程，并按3倍信噪比計(jì)算出各組分的檢出限，結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1可以看出,最小檢出限在0.000 450 mg/ml，其相關(guān)系數(shù)都在0.999 9以上，線(xiàn)性相關(guān)性強(qiáng)。

表1 線(xiàn)性范圍、線(xiàn)性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及最小檢出限

2.4 樣品測(cè)定回收率

表2為各個(gè)組分的樣品回收率，回收率在92.5%～102.5%，滿(mǎn)足檢測(cè)要求。

表2 各組分的樣品回收率

注：“—”表示未檢出。

3 結(jié)論

在GB/T 23495—2009標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的高效液相色譜條件下，各個(gè)組分之間分離良好，無(wú)干擾，食品中的成分復(fù)雜、雜質(zhì)多。標(biāo)樣的出峰時(shí)間在10 min后，能夠有效地避免食品中的雜質(zhì)峰，樣品在25 min后檢測(cè)結(jié)束，同樣有效地杜絕了食品中的雜質(zhì)對(duì)下一個(gè)樣品的影響。測(cè)定的相關(guān)系數(shù)均在0.999 9以上，檢測(cè)最低限在0.000 450～0.000 675 mg/ml(S/N=3)，樣品加標(biāo)回收率為92.5%～102.5%，符合要求，該法可用于月餅中4種防腐劑的同時(shí)檢測(cè)。

[1] 衛(wèi)生部.食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：GB 2760—2014[S]. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2014.

[2] 衛(wèi)生部.飲料中乙?；前匪徕浀臏y(cè)定 ：GB /T 5009. 140—2003[S]. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

[3] 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院.食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定高效液相色譜法：GB/T 23495—2009[S]. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社 ,2009.

(責(zé)任編輯：趙琳琳)

Simultaneous determination of four antimicrobial reagents in mooncake by high performance liquid chromatography with photo-diode array

XUAN Wei

(Fuyang Food and Drug Inspection Center,Fuyang 236000,China)

There is no pretreatment method of Acesulfame Potassium in moon cake. But the mobile phase in the detection of Acesulfame in GB/T 5009.140—2003 is complex. According to GB/T 5009.140—2003 and GB/T 23495—2009,we treated samples with 106 g /L potassium ferrocyanide solution and 220 g/L zinc acetate solution as protein precipitants. Detecting the filtrate. The analysis were performed on a Diamonsil C18column ( 250 mm×4.6 mm,5 μm ) with diode array detector using methanol and 0.02 mol/L ammonium acetate solution ( 5∶95) as the mobile phase.The results showed that 230 nm was the best detection wavelength; the separation between the individual components was good with no interference,and the determination of linear correlation were all above 0.999 9;the lower limits were 0.000 450-0.000 675 mg/ml (S/N=3),the average spiked recoveries range from 92.5% to 102.5%.It was concluded that the method was suitable in the detection of moon cake products.

moon cake;high performance liquid chromatography;antimicrobial reagents;photo-diode array detector

2017-03-01；

2017-05-10

宣 偉(1986-)，男，碩士，工程師，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量安全檢測(cè)。

10.7633/j.issn.1003-6202.2017.06.015

TS213.23；TS202.3

A

1003-6202(2017)06-0057-03