盧肖蘭

隨著我國科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展進(jìn)步，色譜分離柱等低噪音高靈敏的檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)也隨之出現(xiàn)，據(jù)相關(guān)研究表明，液相色譜技術(shù)方法非常穩(wěn)定，能夠快速分離檢測(cè)物質(zhì)，并且檢驗(yàn)結(jié)果十分準(zhǔn)確，在實(shí)驗(yàn)室中非常受到液相色譜工作者的青睞，液相色譜技術(shù)已經(jīng)成為實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用最為廣泛的技術(shù)。比如：液相色譜工作者常常把液相色譜技術(shù)應(yīng)用到定量分析中，包括我們?nèi)粘Ｉ钪兴车氖称窢I養(yǎng)素含量分析、血和藥濃度檢測(cè)以及生物活性物質(zhì)分析等等。在本文中，筆者將對(duì)液相色譜技術(shù)在定量分析中的應(yīng)用進(jìn)行研究探討。

液相色譜儀的組成

液相色譜儀是一種對(duì)混合物質(zhì)進(jìn)行分離的分析鑒定儀器，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，現(xiàn)代液相色譜儀也發(fā)展得更加符合實(shí)驗(yàn)室工作要求。在液相色譜儀的組成當(dāng)中，高壓輸液泵、色譜柱以及檢測(cè)器占有非常重要的位置，具體如下所述：

液相色譜儀之高壓輸液泵。由于高壓輸液泵具有耐高壓、輸出流量比較穩(wěn)定以及流量精度極高等特點(diǎn)，其在液相色譜分析中應(yīng)用極為廣泛，它通過柱塞泵電機(jī)驅(qū)動(dòng)凸輪運(yùn)轉(zhuǎn)，將柱塞桿往液缸內(nèi)部反復(fù)攪動(dòng)，使泵腔內(nèi)部的液體周期性的以高壓狀態(tài)排出，從而使樣品進(jìn)入色譜柱當(dāng)中，讓樣品從色譜柱填料與流動(dòng)相分離開來。

液相色譜儀之色譜柱。液相色譜儀色譜分離是根據(jù)樣品的不同成分之間的配比系數(shù)，通過色譜柱實(shí)現(xiàn)多次吸附和分析，從而將樣品混合物分離出來。其中，色譜柱一般由色譜柱頭螺絲、色譜柱篩板、色譜柱管、色譜柱填料以及色譜柱堵頭組成，其內(nèi)壁一般由直形不銹鋼管材料制作，這種材料都是經(jīng)過高度拋光處理的材料，可用于有機(jī)溶劑以及水溶性緩沖鹽液等。另外，為了更好的實(shí)現(xiàn)樣品混合物質(zhì)分離，液相色譜固定相基質(zhì)一般采用無機(jī)基質(zhì)和有機(jī)基質(zhì)兩種，無機(jī)基質(zhì)可以通過樣品物質(zhì)表面引入多個(gè)功能基因進(jìn)行不同程度的分離，有機(jī)基質(zhì)化學(xué)物質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定，可以保證樣品混合物質(zhì)分離的準(zhǔn)確性和高精度性。

液相色譜儀之檢測(cè)器。

在液相色譜儀中，除了色譜柱和高壓輸液泵是非常重要的分析儀器之外，檢測(cè)器同樣也具有非常重要的作用。檢測(cè)器主要用于檢測(cè)樣品混合物在經(jīng)過色譜柱分離之后其成分濃度的變化，為定量分析提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)。其中，檢測(cè)器主要分為UVD（紫外線吸收檢測(cè)器）、FLD（熒光檢測(cè)器）以及電化學(xué)檢測(cè)器等等。UVD（紫外線吸收檢測(cè)器）是以上三種檢測(cè)器中應(yīng)用范圍最為廣泛的檢測(cè)器，它利用自身紫外線光可以吸收的特點(diǎn)來檢測(cè)樣品混合物質(zhì)濃度，靈敏性非常高，并且不具有破壞性。FLD（熒光檢測(cè)器）可以吸收一定長(zhǎng)度的波長(zhǎng)的光，可以用來做梯度分析，雖然沒有UVD（紫外線吸收檢測(cè)器）應(yīng)用的范圍廣，但是作為選擇性的檢測(cè)器還是非常不錯(cuò)的。至于電化學(xué)檢測(cè)器，這是一種靈敏度極強(qiáng)的選擇器，它的固體工作電極主要是使用玻璃碳電極材料制作，壽命較其他檢測(cè)器極長(zhǎng)。

液相色譜技術(shù)在定量分析中的預(yù)處理技術(shù)

由于天然樣品的構(gòu)成非常復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)室液相色譜工作人員在進(jìn)行天然樣品成分分析時(shí)，都需要進(jìn)行預(yù)處理，將天然樣品的組成成分進(jìn)行提取，再進(jìn)一步純化濃縮，才能得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。在下文中，筆者講為大家介紹一些常用的天然樣品預(yù)處理方法，以供大家分析研究。

預(yù)處理技術(shù)之沉淀提取。沉淀提取在預(yù)處理技術(shù)中是一種比較傳統(tǒng)的提取方法，它具有操作簡(jiǎn)單以及經(jīng)濟(jì)適用的特點(diǎn)。它主要是通過在天然樣品中添加沉淀劑，讓天然樣品中的大分子在不進(jìn)行分析的情況下就可以沉淀出來，然后再通過離心操作，選取上清液分析天然樣品成分。這種方法非常適合生理體液和組織體液樣品的定量分析，不僅節(jié)約了檢測(cè)成本，還能使檢驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確。

預(yù)處理技術(shù)之溶劑萃取。溶劑萃取是指將天然樣品的成分進(jìn)行提取、濃縮。往往在天然樣品中添加的萃取劑越多，提取被測(cè)物質(zhì)的次數(shù)也就越多，但是相對(duì)應(yīng)的萃取率也就更高。這種方法一般用于血漿藥物的濃度分析。

預(yù)處理技術(shù)支持固相萃取。據(jù)調(diào)查顯示，固相萃取是當(dāng)前預(yù)處理技術(shù)中應(yīng)用最多的方法，它主要用于生物材料的藥物提取以及活性物質(zhì)提取。液相色譜工作者將需要檢測(cè)的物質(zhì)放入常壓色譜柱當(dāng)中去除雜質(zhì)，然后再用相應(yīng)的溶劑進(jìn)行洗脫，將被測(cè)物質(zhì)純化。在這個(gè)過程中，常會(huì)用到氧化鋁以及樹脂等固定相。

預(yù)處理技術(shù)之超臨界流體萃取。進(jìn)行超臨界流體萃取操作一般要在固定的溫度以及壓力下進(jìn)行，通過特殊裝置，將固體樣品用超臨界的二氧化碳流體進(jìn)行提取。由于超臨界流體萃取方法擴(kuò)散速度非?？?，分離操作不僅環(huán)保而且省時(shí)，常用于提取一些脂溶性物質(zhì)。

液相色譜技術(shù)在定量分析中的儀器實(shí)驗(yàn)技術(shù)

儀器實(shí)驗(yàn)技術(shù)在液相色譜技術(shù)中占有非常重要的位置，它主要涉及流動(dòng)相配置、色譜柱使用方法以及檢測(cè)器使用技術(shù)三個(gè)方面，具體如下所述：

流動(dòng)相配置。實(shí)驗(yàn)室液相色譜工作者在進(jìn)行流動(dòng)相配置時(shí)，必須使用符合有關(guān)規(guī)定和要求的溶劑和純水。另外，為了保證流動(dòng)相配置的質(zhì)量，配置所使用的溶劑必須使用達(dá)到液相色譜純度的溶劑，配置所用的純水則必須使用電阻率為18歐姆米。配置完成之后還需要注意通過0.14微米的過濾膜過濾，這樣不僅能有效保證流路管道通暢，還能防止溶劑被污染。除此之外，在進(jìn)行液相色譜系統(tǒng)之前，工作人員需要對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣操作，防止氣體溶解在溶劑中，破壞溶劑的純度。

色譜柱使用方法。色譜柱作為液相色譜儀進(jìn)行分離的重要組成部分，液相色譜工作者要注意保持色譜柱的效果以及延長(zhǎng)色譜柱的壽命，如果色譜柱出現(xiàn)以上兩個(gè)任一問題，對(duì)待測(cè)樣品的檢測(cè)結(jié)構(gòu)都非常不利。因此，在使用色譜柱時(shí)，要在進(jìn)樣閥和色譜柱中間使用相應(yīng)的過濾器，如在線過濾器，還要避免使用對(duì)固定相具有強(qiáng)侵蝕性的流動(dòng)相組合，從而延長(zhǎng)色譜柱的使用時(shí)間。

檢測(cè)器使用技術(shù)。在液相色譜儀中，有三種常用的檢測(cè)儀器，不同的檢測(cè)器有不同的使用方法，檢測(cè)器的好壞直接關(guān)系到液相色譜在定量分析中的應(yīng)用，因此，必須對(duì)每一種檢測(cè)器都有所了解，并掌握主要的三種檢測(cè)儀器。

紫外檢測(cè)器在使用時(shí)需要注意周圍環(huán)境，一定要在固定的溫度和壓力下進(jìn)行，否則會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。熒光檢測(cè)器相比紫外檢測(cè)器靈敏度要高出很多，在使用時(shí)不能使用不穩(wěn)定或具有較強(qiáng)吸收力的溶劑來作為流動(dòng)相，并且在進(jìn)行熒光檢測(cè)時(shí)，待檢測(cè)的樣品需要配成低于0.000006g/mL濃度的樣品。電化學(xué)檢測(cè)器一般用于痕量分析，這種檢測(cè)器對(duì)電極精密度要求非常高，因此，平時(shí)要注意對(duì)工作電極的保護(hù)，保證電化學(xué)檢測(cè)器的靈敏度。另外，在使用電化學(xué)檢測(cè)器時(shí)，需要注意消除氣泡，減少金屬離子干擾被測(cè)樣品。

綜上所述，液相色譜技術(shù)在定量分析中應(yīng)用應(yīng)該注意預(yù)處理技術(shù)和儀器實(shí)驗(yàn)技術(shù)的使用，為了保證樣品定量分析結(jié)果的準(zhǔn)確度，在使用預(yù)處理技術(shù)時(shí)需要根據(jù)樣品的屬性選擇科學(xué)合理的預(yù)處理方法，并且按照相關(guān)規(guī)定和要求使用檢測(cè)儀器。