陳薇薇

藥材與試劑

5年生園參，樣品經(jīng)50℃烘干粉碎后（過40目篩），密封保存?zhèn)溆谩?/p>

甲醇、乙醚、無水乙醇、正丁醇、濃硫酸、香草醛、氯仿；以上試劑均為國產(chǎn)分析純，實(shí)驗(yàn)用水均為蒸餾水。

人參皂苷 Re 對(duì)照品購自中國藥品生物制品檢驗(yàn)所。

儀器與設(shè)備

TU-1810 型紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器）。

方法

對(duì)照品溶液的制備。取人參皂苷 Re 對(duì)照品 20mg，精密稱定，加甲醇溶解，定容至 10ml，搖勻、濾過，即得。

供試品溶液的制備。取供試品粉末約 1.0g（細(xì)粉），精密稱定，用中性濾紙包好，置索氏提取器中，加入乙醚47左右微沸回流提取1h，棄去乙醚液，供試品藥包揮干溶劑，加入甲醇浸泡過夜，次日再加入適量甲醇，90℃微沸回流提取，控制滴速 100～120滴/min，虹吸次數(shù)5～6次/h，回流3次，每次2h，以人參皂苷提盡為準(zhǔn)（ 定性鑒別為陰性），合并甲醇提取液，回收溶劑，少量甲醇提取液置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干。 蒸餾水溶解提取物，加水30ml置分液漏斗中，用水飽和正丁醇50ml進(jìn)行萃取，共4次。取上層液蒸干，加甲醇溶解后，轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻、濾過即得。

人參總皂苷提取定性鑒別。供試品回流提取3次以后，取索式提取器中載供試品瓶中的溶液少量點(diǎn)于硅膠G薄層后的下層溶液，用10%硫酸乙醇顯色，將薄層板置通風(fēng)櫥內(nèi)，噴10% 硫酸乙醇溶液，105℃ 加熱。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精密吸取人參皂苷Re對(duì)照品 10μl、20μl、30μl、40μl、60μl 置具塞玻璃試管中，水浴揮干甲醇。分別加入8%香草醛無水乙醇試液0.5ml，72%硫酸試液 5ml，充分振蕩搖勻后置60℃恒溫水浴鍋上加熱10min，立即用冰水冷卻10min，搖勻。以試劑做空白，照分光光度法于544nm處分別測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，對(duì)照品取樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

穩(wěn)定性考察 。精密吸取樣品溶液20μl，按3.4項(xiàng)下方法顯色，并分別在顯色后0、10、20、30min測定吸光度，計(jì)算樣品中的總皂苷含量。

精密度 。（1）重復(fù)性。精密吸取同一供試品溶液20μl，按方法顯色，連續(xù)測定5次，計(jì)算樣品中的總皂苷含量。

（2）重現(xiàn)性。精密吸取同一供試品溶液20μl，連續(xù)測定5次，按方法顯色，計(jì)算樣品中的總皂苷含量。

回收率。精確吸取供試品溶液20μL，平行5份，分別置于具塞試管中，分別精密加入Re對(duì)照品溶液（2mg/mL）20μL、30μL、40μL、50μL、60μL，計(jì)算回收率。

樣品含量測定。取樣品粉末約1.0g，精密稱定，平行稱定3份，制備供試品溶液，測定吸光度，計(jì)算樣品中的總皂苷含量。

試驗(yàn)結(jié)果與分析

人參總皂苷提取定性鑒別 。無紫紅色斑點(diǎn)（總皂苷陽性應(yīng)為紫紅色斑點(diǎn)）。結(jié)果表明，樣品中人參總皂苷已提取完全。

線性范圍?？傇碥諟y定的標(biāo)準(zhǔn)曲線為 y=0.0110x-0.0145，測定方法在20至120μg范圍內(nèi)線性關(guān)系較好，相關(guān)系數(shù) r2=0.9998。

穩(wěn)定性。

由上表可知，樣品顯色后在30min內(nèi)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.35%，在 30min 內(nèi)樣品的穩(wěn)定性較好，溶液顯色后應(yīng)在30min內(nèi)測定。

精密度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2和表3。

由上表可知，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.41%，重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.45%，說明本試驗(yàn)的精密度較好。

回收率。

由上表可知，5個(gè)回收率試驗(yàn)結(jié)果的平均值為100.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.65%，說明此方法可用于人參皂苷含量的測定。

含量測定。

討論

本實(shí)驗(yàn)采用索氏熱回流方法提取人參中人參總皂苷，通過薄層色譜定性鑒別，確定可將人參中的總皂苷提取完全。運(yùn)用紫外-可見分光光度法測定人參中人參總皂苷含量，方法簡便易行，精確度高，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性均較好，適用于人參中總皂苷的含量測定。