何惠嫦，黃瑾，陳應(yīng)智，高海洋，相媛媛

(中山市人民醫(yī)院婦科1、病理科2，廣東中山528400)

EMP2、TTF-1在子宮內(nèi)膜增生癥和子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)及意義

何惠嫦1，黃瑾1，陳應(yīng)智2，高海洋1，相媛媛1

(中山市人民醫(yī)院婦科1、病理科2，廣東中山528400)

目的探討上皮膜蛋白2(EMP2)與甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(TTF-1)在子宮內(nèi)膜增生癥和子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)及其臨床意義。方法選取1990年1月至2014年10月間在中山市人民醫(yī)院婦科就診、起初病理診斷為子宮內(nèi)膜增生癥(包括單純型、復(fù)雜型、不典型增生)，經(jīng)過10年隨訪發(fā)展和沒有發(fā)展為子宮內(nèi)膜癌的患者標(biāo)本107例，其中正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本28例，子宮內(nèi)膜增生癥癌變標(biāo)本51例，子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本28例，應(yīng)用免疫組化S-P法檢測(cè)各組標(biāo)本中EMP2、TTF-1表達(dá)情況。結(jié)果在正常增生期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥、子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中EMP2蛋白的陽性表達(dá)率分別為10.7%、33.3%、82.1%，依次遞增，TTF-1的陽性表達(dá)率分別67.9%、45.1%、35.7%，依次遞減，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05)；EMP2陽性者的比例隨手術(shù)病理分期、組織病理分級(jí)的升高而增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05)，而TTF-1陽性者的比例隨手術(shù)病理分期、組織病理分級(jí)的升高而逐漸下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05)。結(jié)論EMP2、TTF-1可能參與子宮內(nèi)膜增生發(fā)展至子宮內(nèi)膜癌的過程，對(duì)子宮內(nèi)膜癌的早期診斷及預(yù)測(cè)預(yù)后有一定的價(jià)值。

上皮膜蛋白2；甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1；子宮內(nèi)膜癌；子宮內(nèi)膜增生癥；子宮內(nèi)膜增生癥癌變；免疫組織化學(xué)

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的三大惡性腫瘤之一，其中以子宮內(nèi)膜樣腺癌最常見，且子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率有升高和年輕化趨勢(shì)。子宮內(nèi)膜腺癌發(fā)病的分子機(jī)制尚不明確，我們通過免疫組化SP法檢測(cè)子宮內(nèi)膜樣腺癌及子宮內(nèi)膜增生癥、正常子宮內(nèi)膜組織中EMP2、TTF-1的表達(dá)，探討兩者在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)病過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取1990年1月至2014年10月間在中山市人民醫(yī)院婦科因異常陰道出血行診刮病理診斷為子宮內(nèi)膜增殖癥的患者107例，10年隨訪期間按因再次異常陰道出血而診刮術(shù)或因子宮良性病變行全子宮切除術(shù)的內(nèi)膜病理檢查結(jié)果分組，其中正常子宮內(nèi)膜組28例(空白對(duì)照組)，年齡31～54歲，中位年齡45歲；子宮內(nèi)膜增生組(包括單純型增生、復(fù)雜型增生、不典型增生)51例，年齡25～45歲，中位年齡37歲；子宮內(nèi)膜癌組28例，年齡31～64歲，中位年齡52歲。所有患者均有完整的臨床資料和存檔石蠟塊，術(shù)前均未接受放療或化療，且所有患者在年齡等因素方面比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法EMP2鼠抗人單克隆抗體、TTF-鼠抗人單克隆抗體、SP免疫組化染色試劑盒購自福州邁新生物有限技術(shù)公司，應(yīng)用免疫組化S-P法檢測(cè)上述2組患者組織標(biāo)本EMP2和TTF-1的表達(dá)情況。

1.3 結(jié)果判定PBS代替一抗為陰性對(duì)照。每張切片選10個(gè)高倍視野，每高倍視野記數(shù)100個(gè)正常細(xì)胞或瘤細(xì)胞消門EMP2陽性表達(dá)定位于胞質(zhì)和胞膜。TTF-1陽性表達(dá)定位于胞核。免疫組化結(jié)果經(jīng)2名病理醫(yī)師分別閱片和評(píng)分，結(jié)果一致方作為最后結(jié)果。免疫組化評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[1]：分別為陽性強(qiáng)度評(píng)分：無著色0分，淺黃1分，棕黃色2分，棕黑色3分；陽性細(xì)胞占所有細(xì)胞的比例評(píng)分：?5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。將兩項(xiàng)乘積分別評(píng)價(jià)：9～12分者為強(qiáng)陽性表達(dá)，4～8分者為弱陽性表達(dá)，0～3分者為陰性表達(dá)。強(qiáng)陽性及弱陽性均按陽性處理。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料均采用χ2檢驗(yàn)和Fisher確切概率法，均為雙側(cè)檢驗(yàn)，以P?0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EMP2、TTF-1在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)在正常增生期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥、子宮內(nèi)膜腺癌組織中EMP2蛋白的陽性表達(dá)率依次遞增(圖1、圖2)，TTF-1的陽性表達(dá)率依次遞減(圖3、圖4)。三種不同病理類型的子宮內(nèi)膜組織中EMP2和TTF-1陽性表達(dá)率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 31.62，6.27，P?0.05)，見表1。

2.2 EMP2在不同期別子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)EMP2在晚期(Ⅲ～Ⅳ期)子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率比早期(Ⅰ～Ⅱ期)稍高，G3～G2的陽性表達(dá)率比G1高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的陽性表達(dá)率比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高，深肌層浸潤者的陽性表達(dá)率比無深肌層浸潤者高，以上各項(xiàng)指標(biāo)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 31.62，P?0.05)，見表2。

圖1 增生期子宮內(nèi)膜EMP2弱陽性表達(dá)(×200)

圖2 子宮內(nèi)膜癌EMP2強(qiáng)陽性表達(dá)(×200)

圖3 單純性子宮內(nèi)膜增殖TTF1表達(dá)(×200)

圖4 子宮內(nèi)膜癌TTF1弱陽性表達(dá)(×200)

2.3 TTF-1在不同期別子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)TTF-1在晚期(Ⅲ～Ⅳ期)子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率比早期(Ⅰ～Ⅱ期)低，G3～G2的陽性表達(dá)率比G1低，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和深肌層浸潤者的陽性表達(dá)率比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者低，深肌層浸潤者的陽性表達(dá)率比無深肌層浸潤者低，以上各項(xiàng)指標(biāo)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.27，P?0.05)，見表3。

表1 三種不同病理類型的子宮內(nèi)膜組織中EMP2和TTF-1陽性表達(dá)

表2 EMP2表達(dá)與子宮內(nèi)膜患者臨床病例參數(shù)的關(guān)系（例）

表3 TTF-1表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

3 討論

3.1 子宮內(nèi)膜增生與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系子宮內(nèi)膜增生癥包括單純型子宮內(nèi)膜增生、復(fù)雜型子宮內(nèi)膜增生、不典型子宮內(nèi)膜增生，其中不典型子宮內(nèi)膜增生屬癌前病變。子宮內(nèi)膜增生癥發(fā)病率高于子宮內(nèi)膜癌，若不治療，部分子宮內(nèi)膜增生癥會(huì)緩慢發(fā)展成子宮內(nèi)膜癌。Kurman等[2]研究發(fā)現(xiàn)單純型增生、復(fù)雜型增生、不典型增生惡變率分別為1%、3%、29%；子宮內(nèi)膜癌占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%，近年來發(fā)病率有上升趨勢(shì)，已接近甚至超過宮頸癌發(fā)病率[3-5]。子宮內(nèi)膜癌的確切病因尚不清楚，目前認(rèn)為子宮內(nèi)膜癌可能有兩種發(fā)病類型：雌激素依賴型和非雌激素依賴型。前一種類型占子宮內(nèi)膜癌的大多數(shù)，均為子宮內(nèi)膜樣腺癌，它的發(fā)生可能是在無孕激素拮抗的雌激素長期作用下發(fā)生子宮內(nèi)膜異常增生甚至癌變，盡早發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜增生發(fā)展子宮內(nèi)膜樣腺癌的高風(fēng)險(xiǎn)人群，并作出相應(yīng)激素治療及隨訪管理，有望降低子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)病率或早期發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌。

3.2 EMP2與子宮內(nèi)膜增生、子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系EMP2是一種原癌基因產(chǎn)物，是含有167個(gè)氨基酸的多通道蛋白，屬于GAS3/PMP22(生長停滯特異性-3/外周髓鞘蛋白22)家族，定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，作為一種細(xì)胞表面的連接受體，EMP2參與細(xì)胞與細(xì)胞之間的信號(hào)傳導(dǎo)，參與細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄，主要通過調(diào)節(jié)某種特定信號(hào)復(fù)合物的活性來發(fā)揮作用[6-7]，從而引起細(xì)胞增殖失控，凋亡受阻，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。Habeeb等[8]和Freije等[9]研究發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤多種腫瘤中都有EMP2的超表達(dá)，并且EMP2表達(dá)的失控可能還與腫瘤的進(jìn)展、惡化、預(yù)后有一定的相關(guān)性。在子宮內(nèi)膜癌，EMP2通過調(diào)節(jié)血管表面生長因子的產(chǎn)生來影響腫瘤組織的血管再生，從而促進(jìn)腫瘤生長。提示EMP2可作為子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的一個(gè)良好的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

本研究中EMP2在正常子宮內(nèi)膜中低表達(dá)，陽性率只有10.7%，在子宮內(nèi)膜增生癥組表達(dá)水平稍升高為33.3%，在子宮內(nèi)膜癌中進(jìn)一步升高，陽性率達(dá)82.1%。在子宮內(nèi)膜癌患者中，隨著手術(shù)病理分期越晚、細(xì)胞組織學(xué)分級(jí)越高EMP2的陽性表達(dá)率越高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、深肌層浸潤患者的EMP2陽性率較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無深肌層浸潤患者的高。提示子宮內(nèi)膜增生癥發(fā)展到子宮內(nèi)膜癌的過程中EMP2可能起著某種促進(jìn)作用。

3.3 TTF-1與子宮內(nèi)膜增生癥癌變的關(guān)系TTF-1作為一種抑癌基因產(chǎn)物，是DNA連接蛋白，含有371個(gè)氨基酸，是相對(duì)分子量為38 kDa的核蛋白，在1989年Civitareale等[10]通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TTF-1可以調(diào)節(jié)甲狀腺球蛋白基因的特異性表達(dá)，為甲狀腺球蛋白的特異性轉(zhuǎn)錄因子，從而命名為甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1。Myong等[11]研究發(fā)現(xiàn)，TTF-1表達(dá)與細(xì)胞增殖抗原(Ki67)表達(dá)呈負(fù)性相關(guān)，意味著TTF-1表達(dá)水平越高，瘤細(xì)胞增殖率越低，提示患者的預(yù)后越好。Zhang等[12]首先發(fā)現(xiàn)了在正常子宮內(nèi)膜組織中TTF-1的陽性表達(dá)。Sullivan等[13]研究表明，TTF-1陽性表達(dá)可以降低子宮內(nèi)膜組織發(fā)展為子宮內(nèi)膜癌的概率。這些研究結(jié)果表明，TTF-1在正常子宮內(nèi)膜或子宮內(nèi)膜增殖癥癌變的過程中起到了一定作用。

本研究中，TTF-1在正常子宮內(nèi)膜中高表達(dá)，陽性率為67.9%，在子宮內(nèi)膜增生癥組表達(dá)水平稍下降，陽性率為45.1%，在子宮內(nèi)膜癌中的陽性率進(jìn)一步下降，陽性率為35.7%。在子宮內(nèi)膜癌患者中，隨著手術(shù)病理分期越晚、細(xì)胞組織學(xué)分級(jí)越高TTF-1的陰性表達(dá)率越高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、深肌層浸潤患者的TTF-1陰性率較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無深肌層浸潤患者的高。這些結(jié)果提示TTF-1可能參與了癌變過程，與子宮內(nèi)膜癌的侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)，并且在子宮內(nèi)膜增殖癥癌變的過程中起到了抑制作用。

綜上所述，EMP2、TTF-1在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥、子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)分別呈階梯型升高和階梯型降低，表明兩者可能參與了子宮內(nèi)內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程，對(duì)子宮內(nèi)膜癌的早期診斷及預(yù)測(cè)預(yù)后有一定的價(jià)值。有望成為新的分子導(dǎo)向治療靶點(diǎn)。EMP2、TTF-1有助于我們區(qū)分出在子宮內(nèi)膜增殖癥患者中哪些屬于可能發(fā)生癌變的高風(fēng)險(xiǎn)人群，尤其是對(duì)育齡期子宮內(nèi)膜增生癥的患者，幫助這些患者選擇一種最合適的治療方案。

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Expression and clinical significance of EMP2 and TTF-1 in endometrial hyperplasia and endometrial adenocarcinoma.

HE Hui-chang1,HUANG Jin1,CHEN Ying-zhi2,GAO Hai-yang1,XIANG Yuan-yuan1.
Department of Gynecology1,Department of Pathology2,Zhongshan People's Hospital,Zhongshan 528400,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of epithelial membrane protein-2(EMP2)and thyroid transcription factor-1(TTF-1)in endometrial hyperplasia and endometrial adenocarcinoma.MethodsA total of 107 cases of patients,who admitted to Department of Gynecology of Zhongshan People’s Hospital and initially confirmed as by endometrial hyperplasia(including simple hyperplasia,complex hyperplasia,atypical hyperplasia)by pathology diagnosis from January 1990 to October 2014,were selected as the research subjects.After ten years of clinical follow-up,among of 107 cases of specimens,there were 28 cases of normal endometrial specimens,51 cases of endometrial hyperplasia specimens,28 cases of endometrial adenocarcinoma.The expression of EMP2 and TTF-1 were detected by immunohistochemical S-P method.ResultsThe positive expression rate of EMP2 in normal proliferative endometrium,endometrial hyperplasia(simple hyperplasia,complex hyperplasia,atypical hyperplasia),and endometrial adenocarcinoma tissue were 10.7%,33.3%and 82.1%,respectively,with an increasing trend;the positive expression rate of TTF-1 in three different tissues were 67.9%,45.1%and 35.7%,respectively,with a decreasing trend (P?0.05).The proportion of EMP2 positive patients increased with increase of surgical pathology and histopathological grade(P?0.05),while the proportion of TTF-1 positive patients decreased with increase of surgical pathology and histopathological grade(P?0.05).ConclusionEMP2 and TTF-1 may be involved in the occurrence and development from endometrial hyperplasia to endometrial carcinoma,which may be valuable for the early diagnosis and prognosis of endometrial carcinoma.

Epithelial membrane protein-2(EMP2);Thyroid transcription factor-1(TTF-1);Endometrial cancer;Endometrial hyperplasia;Cancerous endometrial hyperplasia;Immunohistochemistry

R737.33

A

1003—6350（2017）11—1732—04

2016-08-10)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.11.004

廣東省中山市科技計(jì)劃局項(xiàng)目(編號(hào)：20132A080)

何惠嫦。E-mail：huhehuichang@163.com