李志，陸遠(yuǎn)，馮輝，張敏，張卓琦，王志榮，楊煜，徐晤

(徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科，江蘇徐州221000)

MPC30-DEA70載AMO-miR-146a對(duì)大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷后血管內(nèi)膜增生的影響

李志，陸遠(yuǎn)，馮輝，張敏，張卓琦，王志榮，楊煜，徐晤

(徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科，江蘇徐州221000)

目的陽離子磷酸膽堿聚合物(MPC30-DEA70)負(fù)載反義miR-146a寡核苷酸(AMO-miR-146a)轉(zhuǎn)染大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷處血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)，觀察其對(duì)血管內(nèi)膜增生的影響。方法60只SD大鼠完全隨機(jī)化分為未損傷組、單純損傷組、多聚賴氨酸(PLL)組、AMO-miR-146a組、PLL載MPC30-DEA70/AMO-miR-146a復(fù)合物(P/M=3：1組和P/M=5：1組)，每組10只。通過光學(xué)顯微鏡觀察4周后大鼠頸總動(dòng)脈組織形態(tài)學(xué)變化，q-PCR法檢測(cè)miR-146a的表達(dá)以及應(yīng)用Western blot法檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原蛋白(PCNA)、NFκBp65的表達(dá)情況。結(jié)果蘇木精-伊紅染色，光鏡下顯示，除未損傷組外，單純損傷組、PLL組、AMO-miR-146a組、P/M=3：1組、P/M=5：1組大鼠頸總動(dòng)脈血管新生內(nèi)膜有不同程度的增生，而中膜面積無明顯改變；與單純損傷組比較，PLL組、AMO-miR-146a組新生內(nèi)膜面積差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，P/M=3：1組和P/M=5：1組新生內(nèi)膜面積明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，后兩組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；q-PCR及Western blot檢測(cè)顯示P/M=3：1組和P/M=5：1組miR-146a及目的蛋白PCNA、NFκBp56的表達(dá)較未損傷組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但明顯低于單純損傷組、PLL組、AMO-miR-146a組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05)，而P/M=3：1組和P/M=5：1組組間miR-146a、PCNA、NF κBp56的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；單純損傷組、PLL組、AMO-miR-146a組組間miR-146a、PCNA、NFκBp56的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論MPC30-DEA70可與AMO-miR-146a絡(luò)合，借助PLL進(jìn)入VSMC，有效抑制球囊損傷后VSMC的miRNA-146a的表達(dá)，使PCNA、NFκBp56下調(diào)，抑制新生內(nèi)膜增生，防止血管狹窄。

陽離子磷酸膽堿聚合物；反義寡核苷酸；miR-146a；血管狹窄；基因載體

冠心病已經(jīng)成為全球主要的死亡原因之一[1]，目前的治療方法主要包括藥物治療、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈成形術(shù)，支架植入術(shù)以及冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)。藥物涂層支架植入術(shù)已經(jīng)被醫(yī)務(wù)人員和患者廣泛接受和認(rèn)可，其降低了早期支架內(nèi)血栓形成及再狹窄的發(fā)生率[2-3]，但仍面臨藥物涂層支架植入后晚期支架內(nèi)血栓形成、內(nèi)膜增生等需要迫切解決的問題[4]。研究發(fā)現(xiàn)，在球囊損傷再狹窄的動(dòng)物模型中，miR-146a的表達(dá)水平顯著上調(diào)[5]，通過基因沉默技術(shù)減少血管平滑肌細(xì)胞中miR-146a的表達(dá)，可以抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖[6]。陽離子聚合物作為一類易于制備的新型非病毒類轉(zhuǎn)基因載體，與其他非病毒載體相比，具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、性能易于調(diào)整、目的基因容量大、合成簡(jiǎn)便及良好的生物相容性等優(yōu)點(diǎn)。故本實(shí)驗(yàn)采用陽離子磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70作為非病毒載體，建立大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷模型，通過多聚賴氨酸的粘附將AMO-miR-146a轉(zhuǎn)入損傷后的大鼠頸總動(dòng)脈血管壁，探討其對(duì)大鼠頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要材料健康雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量150～200 g，由徐州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，普通飼料分籠飼養(yǎng)。RT-PCR試劑盒(Promega，USA)，大鼠miR-146a反義寡核苷酸(蘇州吉瑪生物技術(shù)有限公司)，miR-146a莖環(huán)引物、5S莖環(huán)引物(上海捷瑞公司)，0.1%的PLL(上海生工生物工程公司)，PCNA兔多克隆蛋白抗體(Santa Cruz公司)，Anti-NFκBP65兔單克隆蛋白抗體(Abcam USA)，GAPDH蛋白一抗(北京巴戊德生物技術(shù)有限公司)，F(xiàn)ITC標(biāo)記的山羊抗兔IgG (北京中杉金橋科技有限公司)，MPC30-DEA70由中國礦業(yè)大學(xué)曹希傳博士惠贈(zèng)，1.25 mm×6 mm球囊導(dǎo)管等介入器材由美敦力公司提供。

1.2 基因球囊的制備取0.1%PLL溶液30 μL，以去離子水稀釋成100 μL，均勻涂抹于球囊導(dǎo)管的球囊表面，后反復(fù)吹干備用。取90 μL、150 μL的MPC30-DEA70溶液(1 g/L)分別加入到兩組30 μL的AMO-miR-146a的溶液中，形成P/M比值為3：1、5：1的MPC30-DEA70/AMO-miR-146a復(fù)合溶液，室溫下靜置30 min。以去離子水補(bǔ)充體積至200 μL，涂抹于PLL球囊表面，干燥備用。上述操作均在無菌環(huán)境中進(jìn)行。

1.3 動(dòng)物模型的制備60只SD雄性大鼠隨機(jī)化分為6組，即未損傷組、單純損傷組、多聚賴氨酸(PLL)組、AMO-miR-146a組，以及PLL載AMO-miR-146a基因復(fù)合物P/M=3：1組與P/M=5：1組，每組10只。未損傷組僅切開分離頸總動(dòng)脈，不予球囊損傷處理；單純損傷組僅給予球囊損傷；其余各組不僅給予球囊損傷，而且將涂有干預(yù)成分的球囊導(dǎo)管送至大鼠頸總動(dòng)脈損傷血管段。使用3%戊巴比妥鈉按照體重30 mg/kg經(jīng)腹腔注射麻醉。常規(guī)備皮、消毒、鋪巾，沿頸部正中剪開皮膚，鈍性分離筋膜、肌肉等皮下組織，暴露頸總動(dòng)脈，及其頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈，長度約1.5 cm。頸內(nèi)動(dòng)脈血管近心端給予縫線穿過備用，遠(yuǎn)心端結(jié)扎，頸總動(dòng)脈近心段予以血管夾夾閉，用虹膜剪在頸內(nèi)動(dòng)脈正中剪“V”型切口，直視下將插入0.014英寸(大約0.355 6 mm)引導(dǎo)導(dǎo)絲的1.25×6 mm美敦力球囊送入大鼠頸總動(dòng)脈約1 cm，壓力泵給予4 kPa壓力，緩慢回拉球囊至切口處，再次將球囊送至原處，重復(fù)上述過程5次后，制作大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷模型。各干預(yù)組均給予涂有干預(yù)成分的球囊于損傷處以4 kPa保持10 min，結(jié)束后撤出球囊導(dǎo)管及導(dǎo)絲，結(jié)扎近心端頸內(nèi)動(dòng)脈并逐層縫合及碘伏消毒，普通飼料喂養(yǎng)。所有SD大鼠術(shù)后肌內(nèi)注射青霉素40萬U(2次/d，5 d)以預(yù)防感染，普通飼料喂養(yǎng)。

1.4 動(dòng)物取材每組大鼠飼養(yǎng)48 h后隨機(jī)取出7只用3%戊巴比妥鈉經(jīng)腹腔麻醉，延頸部正中切口逐層分離筋膜與組織，暴露頸總動(dòng)脈血管，取出頸總動(dòng)脈局部藥物轉(zhuǎn)運(yùn)段血管，將其放入提前預(yù)冷并放置肝素水的培養(yǎng)皿中，用無齒鑷小心輕壓管腔，排出管腔內(nèi)血液并去除管腔上殘留的脂肪組織，用錫紙標(biāo)記包好放入液氮罐中，48 h后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于提取總蛋白及總RNA。

1.5 組織病理形態(tài)檢測(cè)術(shù)后4周處死大鼠，取轉(zhuǎn)基因血管段制作病理標(biāo)本，蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察各組內(nèi)膜增生及血管管腔狹窄程度，采用Image-pro-plus 6.0軟件進(jìn)行圖像分析，測(cè)量新生內(nèi)膜面積(NIA)、中膜面積(MA)，并計(jì)算新生內(nèi)膜面積(NIA)/中膜面積(MA)面積比。

1.6 q-PCR檢測(cè)大鼠頸總動(dòng)脈miR-146a的表達(dá)采用Trizol試劑一步法提取SD大鼠頸總動(dòng)脈RNA。采用兩步法進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：反應(yīng)體系為RNA 2 μL、miR-146a莖環(huán)引物1 μL、5S莖環(huán)引物1 μL、Super Pure dNTP 2 μL，RNase-Free ddH2O 8.5 μL；5×First-Strand Buffer(含有DTT)4 μL；RNasin 0.5 μL；反應(yīng)條件為42℃50 min，95℃5 min。PCR反應(yīng)：反應(yīng)體系為：2×SuperReal PreMix Plus 10 μL、上游引物0.6 μL、下游引物0.6 μL、cDNA模板2 μL、50×ROX Reference Dye 1 μL、RNase-Free ddH2O 5.8 μL；反應(yīng)條件：95℃15 min，循環(huán)1次；95℃10 s，58℃30 s 72℃32 s，循環(huán)40次。miR-146a莖環(huán)引物、上下游引物、內(nèi)參5S等均由上海捷瑞公司設(shè)計(jì)與合成。結(jié)果采用△△Ct值法進(jìn)行相對(duì)定量分析。

1.7 Western blot檢測(cè)PCNA、NFκBp56蛋白的表達(dá)取各實(shí)驗(yàn)組損傷處轉(zhuǎn)基因段血管，嚴(yán)格按照組織提取試劑盒操作步驟提取總蛋白，應(yīng)用BCA蛋白檢測(cè)試劑盒進(jìn)行蛋白濃度測(cè)定，應(yīng)用Western blot法檢測(cè)各組血管PCNA、NFκBp56蛋白的表達(dá)情況。利用Image J圖像分析系統(tǒng)對(duì)Western blot結(jié)果進(jìn)行灰度分析。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用Graphpad Prism 5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，樣本的統(tǒng)計(jì)效能＞0.8，計(jì)量資料滿足正態(tài)性及方差齊性，應(yīng)用單因素方差分析(ANOVA)，兩兩組間比較采用q檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病理形態(tài)學(xué)改變大鼠頸總動(dòng)脈采用HE染色，光鏡下觀察，見圖1：除未損傷組(圖1A)外，所有實(shí)驗(yàn)組均呈現(xiàn)不同程度的內(nèi)膜增生及血管管腔狹窄，中膜未見明顯變化；單純損傷組(圖1B)、PLL組(圖1C)、 AMO-miR-146a組(圖1D)內(nèi)膜增生明顯，血管管腔明顯狹窄，高倍鏡下可見增生的內(nèi)膜主要由平滑肌細(xì)胞和膠原纖維構(gòu)成，平滑肌排列紊亂，形態(tài)不一(見圖1b、1c、1d)；P/M=3：1組(圖1E)、P/M=5：1組(圖1F)也可見到新生內(nèi)膜增生，但內(nèi)膜增生及管腔狹窄程度較單純球傷組、PLL組、AMO-miR-146a組明顯減輕。

2.2 各組新生血管的內(nèi)膜面積、中膜面積及內(nèi)中膜面積比較與單純損傷組比較，PLL組、AMO-miR-146a組新生內(nèi)膜面積差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，P/M=3：1組、P/M=5：1組新生內(nèi)膜面積顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05)，而P/M=3：1組、P/M= 5：1組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；各組中膜面積差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.756)；與單純損傷組相比，PLL組、AMO-miR-146a組新生內(nèi)膜/中膜面積比(I/M)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，P/M=3：1組、P/M= 5：1組新生內(nèi)膜/中膜面積比(I/M)顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05)，而P/M=3：1組、P/M=5：1組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

圖1 各組光鏡下頸總動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)改變(HE染色)注：A，未損傷組；B，單純損傷組；C，PLL組；D，AMO-miR-146a組；E，P/M=3：1組；F，P/M=5：1組(均×100)。a、b、c、d、e、f為相應(yīng)的高倍鏡視野(×400)。

表1 各組新生血管內(nèi)膜面積、中膜面積及內(nèi)中膜面積的比較(n=3，x-±s)

2.3 q-PCR法檢測(cè)球囊損傷后頸總動(dòng)脈miR-146a的表達(dá)與未損傷組比較，大鼠頸總動(dòng)脈經(jīng)球囊損傷48 h后，miR-146a的表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.001)；單純損傷組、PLL組、AMO-miR-146a組miR146a的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，表明裸PLL或AMO-miR-146a都不能影響頸總動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞miR-146a的表達(dá)；P/M=3：1與P/M=5：1組較單純損傷組、PLL組、AMO-miR-146a組的miR-146a的表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ?0.001)，表明MPC30-DEA70/AMO-miR-146a基因復(fù)合物借助PLL的粘附作用，可以成功轉(zhuǎn)染頸總動(dòng)脈的血管平滑肌細(xì)胞，降低miR-146a的表達(dá)，見圖2。

圖2 各組頸總動(dòng)脈miR-146a的表達(dá)情況注：1，未損傷組，2，單純損傷組；3，PLL組；4，AMO-miR-146a組；5，P/M=3：1組；6，P/M=5：1組；與未損傷組比較，aP?0.001；與單純損傷組比較，bP?0.001。

2.4 Western blot法檢測(cè)球囊損傷后血管壁PCNA與NFκBp56的表達(dá)與未損傷組比較，其余各組PCNA與NFκBp56蛋白的表達(dá)均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05)，其中PLL載兩種不同復(fù)合物P/M=3：1與P/M= 5：1組蛋白表達(dá)量升高程度低于單純損傷組、PLL組、AMO-miR-146a組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05)；P/M= 3：1與P/M=5：1組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；單純損傷組、PLL組、裸AMO-miR-146a組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見圖3。

圖3 各組PCNA、NFкBp56蛋白的表達(dá)注：1，未損傷組；2，單純損傷組；3，PLL組；4，AMO-miR-146a組；5，P/M=3：1組；6，P/M=5：1組。

3 討論

micro-RNAs(mi-RNAs)是一種內(nèi)源性的、高度保守的、單鏈非編碼小分子單鏈RNA，通過降解mRNA或抑制mRNA的翻譯水平，從而調(diào)控靶基因表達(dá)[7-8]。MiR-146是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)在免疫系統(tǒng)中具有調(diào)節(jié)作用的miRNA，在固有免疫和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用，參與了自身免疫性疾病、膿毒血癥、腫瘤等多種疾病的發(fā)展[9-10]。在球囊損傷再狹窄的動(dòng)物模型中也發(fā)現(xiàn)miR-146a的表達(dá)水平顯著上調(diào)[5]。熊瑋等[6]證實(shí)了通過基因沉默技術(shù)，在血管平滑肌細(xì)胞中轉(zhuǎn)入AMO-miR-146a基因，能夠減少miR-146a的表達(dá)，進(jìn)一步使NFκBp65、PCNA的表達(dá)量明顯降低，血管平滑肌細(xì)胞增殖減少、凋亡增多。

隨著基因治療的發(fā)展和應(yīng)用，借助基因載體，可將目的基因?qū)爰?xì)胞或組織，抑制目的基因的表達(dá)，進(jìn)一步產(chǎn)生特定的生物學(xué)效應(yīng)。陽離子聚合物作為一類易于制備的新型非病毒類轉(zhuǎn)基因載體，與脂質(zhì)體及其他非病毒載體相比，具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、性能易于調(diào)整、目的基因容量大、合成簡(jiǎn)便及良好的生物相容性等優(yōu)點(diǎn)，成為當(dāng)前基因載體研究方面的熱點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)組前期體外實(shí)驗(yàn)已證實(shí)新型陽離子磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70可以安全、有效地負(fù)載反義寡核苷酸進(jìn)入VSMC內(nèi)并發(fā)揮生物學(xué)功能[11]。

本研究以陽離子磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70作為轉(zhuǎn)基因載體，利用多聚賴氨酸(PLL)涂層球囊將MPC30-DEA70/AMO-miR-146a基因復(fù)合物導(dǎo)入大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷處。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，球囊損傷后頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生明顯，光鏡下可見增生的內(nèi)膜主要由平滑肌細(xì)胞和膠原纖維構(gòu)成，但未見內(nèi)膜損傷后的附壁血栓形成?？赡艿脑颍菏紫?，球囊損傷后，經(jīng)過大鼠自身的凝血及纖容系統(tǒng)作用，4周后大鼠頸總動(dòng)脈內(nèi)膜損傷處形成的附壁血栓自行消失；其次，病理取材時(shí)，取出的頸總動(dòng)脈，反復(fù)用預(yù)冷的肝素鹽水沖洗，并用無齒鑷小心輕壓管腔，排出管腔內(nèi)血液并去除管腔上殘留的脂肪組織，可能會(huì)造成附壁血栓的消失。與未損傷組比較，球囊損傷后的各組大鼠頸總動(dòng)脈均出現(xiàn)不同程度的管腔狹窄，新生內(nèi)膜面積明顯增加，miR-146a表達(dá)增加，同時(shí)NFκBp65和PCNA的蛋白表達(dá)水平也相應(yīng)明顯上升。而轉(zhuǎn)染P/M=3：1和P/M= 5：1基因復(fù)合物治療組血管管腔狹窄程度較其余各球囊損傷組有所減輕，新生內(nèi)膜增生面積減少，miR-146a以及NFκBp65、PCNA的蛋白表達(dá)水平相對(duì)下降，證明AMO-miR-146a在無MPC30-DEA70的情況下幾乎不能進(jìn)人血管內(nèi)膜發(fā)揮其作用，而在MPC30-DEA70轉(zhuǎn)基因載體的作用下，利用PLL提高基因復(fù)合物在血管局部停留和轉(zhuǎn)染時(shí)間，即可大量進(jìn)入VSMC，通過反義作用與靶細(xì)胞內(nèi)特異和互補(bǔ)的mRNA結(jié)合，通過某種信號(hào)通路，阻止NFκBp65和PCNA蛋白的表達(dá)，抑制VSMC增殖，從而緩解頸總動(dòng)脈的狹窄程度。

經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈支架植入術(shù)是治療冠心病重要的手段之一，但晚期支架內(nèi)血栓形成、內(nèi)膜增生的發(fā)生率仍然較高[4]。通過藥物球囊與基因沉默技術(shù)相結(jié)合，以陽離子磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70作為轉(zhuǎn)基因載體，利用MPC30-DEA70負(fù)載AMO-miR-146a，借助PLL的黏附作用，將MPC30-DEA70/AMO-miRNA-146a基因復(fù)合物導(dǎo)入VSMC，有效抑制miR-146a基因表達(dá)和VSMC增殖，防止血管狹窄，為一些支架置入患者防止術(shù)后再狹窄提供有益的治療措施。

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EffectsofAMO-miR-146acarriedbycationicphosphorylcholinepolymerMPC30-DEA70onrats' neointimal hyperplasia after common arteria carotis balloon.

LI Zhi,LU Yuan,FENG Hui,ZHANG Min,ZHANG Zhuo-qi,WANG Zhi-rong,YANG Yu,XU Wu.
Department of Cardiology,the Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University,Xuzhou 221000,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo investigate the influence of the delivery of phosphorylcholine copolymer MPC30-DEA70 carrying antisense mediated oligonucleotide miR-146a gene into vascular smooth muscle cells(VSMC) on the degree of neointimal hyperplasia after balloon injury in rats.MethodsA total of 60 rats were randomly divided into six groups as follows：no-injury group,pure balloon injury group,polylysine(PLL)group,AMO-miR-146a group, PLL-carrier P/M=3：1 group and P/M=5：1 group,with 10 rats in each group.The morphological changes of common carotid arteries in rats after 4 weeks were observed by optical microscope.q-PCR method was used to detect the expression of miR-146a,and Western blot was adopted to detect the expression of proliferating cell nuclear antigen protein(PCNA)and NFκBp65.ResultsExcept for the no-injury group,the other experimental groups showed varying degrees of neointimal hyperplasia and vascular stenosis with HE staining,but the medial area had no significant change.Compared with the pure balloon injury group,the polylysine group and AMO-miR-146a group had no significant difference in new neointima area (P＞0.05);P/M=3：1 group and P/M=5：1 group were reduced significantly(P?0.05),but there was no significant difference between P/M=3：1 group and P/M=5：1 group(P＞0.05).The detection of q-PCR and Western blot methods showed the expressions of miR-146a and the protein expression contents of PCNA and NFκBp56 in the PLL-carrier P/M=3：1 and P/M= 5：1 groups were significant higher than those in the no-injury groups(P?0.05),but significantly lower than those in the pure balloon injury group,polylysine(PLL)group,andAMO-miR-146a group(P?0.05).There was no significant difference be-tween P/M=3：1 group and P/M=5：1 group in the expression of miR-146a,PCNA,NFκBp56(P＞0.05).There was also no significant difference among pure balloon injury group,polylysine group and AMO-miR-146a group on the expressions of miR-146a,PCNA and NFκBp56(P＞0.05).ConclusionMPC30-DEA70 can be integrated with the AMO-miR-146a and get into VSMC with the help of PLL to effectively inhibit the expression of vascular miRNA-146a after the balloon injury,which can make PCNA and NFκBp56 down-regulation and prevent the neointimal proliferation and the hemadostenosis.

MPC30-DEA70;AMO-miR-146a;miR-146a;Hemadostenosis;Gene carrier

R-332

A

1003—6350（2017）11—1724—04

2017-02-25)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.11.002

徐晤。E-mail：xzxuwu@163.com