彭波+劉春龍

摘 要：目的：構(gòu)建限量檢查醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊中烏頭堿的薄層色譜法（TLC）。方法：采用TLC方法對醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊中烏頭堿水平進行測定分析，以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（體積比為20：18：3：6：1）作為展開劑，經(jīng)耐用性分析，探討該方法的應(yīng)用效果。結(jié)果：（1）供試品色譜與對照品色譜相應(yīng)的部位上面未發(fā)現(xiàn)有斑點存在，陰性未存在干擾；（2）采用甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（體積比為20：18：3：6：1）作為展開劑時，供試品之間較易分離開來，烏頭堿斑點十分清楚、規(guī)整，且與其他斑點之間很容易分離，重復效果理想；（3）供試品色譜之中，在與對照品色譜相對應(yīng)的部位所產(chǎn)生的斑點強度以及規(guī)格均小于對照品斑點，或者無斑點產(chǎn)生。結(jié)論：薄層色譜法應(yīng)用于醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊中烏頭堿含量的測定之中，操作便捷，重復性佳，應(yīng)加以推廣及應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：烏頭堿；薄層色譜法；姜紅活血止痛酊

烏頭，屬毛莨科，其有效成分為雙酯型的生物堿，其中有效成分為烏頭堿。臨床藥理學研究表明：烏頭堿具有鎮(zhèn)痛、麻醉以及降壓等方面的重要功效，但是其毒性非常強，其致死量僅為3-5mg，且致死時間非常短（接觸到死亡僅需8min-4h）。由于烏頭堿的中毒劑量同治療劑量相當，由于各方面的因素的影響可能會導致患者出現(xiàn)中毒而死的情況。烏頭堿很容易發(fā)生水解反應(yīng)，對烏頭堿中毒的醫(yī)學鑒定造成了極大的困難。對此，應(yīng)該強化對醫(yī)學制劑中烏頭堿的含量進行定量測定分析，本研究主要采用薄層色譜法對醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊中烏頭堿含量進行測定分析，現(xiàn)報道如下：

1 儀器及試劑

1.1 儀器

層析缸、微量點樣器、玻璃噴霧器、薄層制版器以及電子天平等儀器。

1.2 試劑

烏頭堿對照品（鼎瑞化工上海有限公司生產(chǎn)，批號為20160112號）、姜紅活血止痛酊（醫(yī)院自主研制，批號為20161122號）、姜紅活血止痛酊陰性樣品（醫(yī)院自主研制，批號為20161203號）、乙醚（安徽金邦醫(yī)藥化工有限公司生產(chǎn)，批號927820-24-4）、氯仿（上海市長達化工貿(mào)易有限公司生產(chǎn)，批號20050802）、硅膠G（南京奧佳化工有限公司生產(chǎn)，批號20121204）、羧甲基纖維素鈉（上海萬照精細化工有限公司生產(chǎn)，批號20101012）。上述試劑均屬于分析純，水屬于超純水。

2 方法及結(jié)果

2.1 溶液的制取

2.1.1 供試品溶液

首先取2.0mL的溶液樣品，將其置于錐形瓶之中，向其中加入5.0mL的濃氨液以及80mL的乙醚溶液，將其進行振蕩、搖晃1h，靜置24h，分取乙醚層提取液，將其蒸干，然后再向其中加入污水乙醇溶液稀釋至1mL，作為供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液

取一定量的烏頭堿對照品溶液，精確稱量，向其中加入無水乙醇溶液制成每1mL中含有2mg烏頭堿的對照品溶液。

2.1.3 陰性對照溶液

根據(jù)姜紅活血止痛酊的制作工藝制備姜紅活血止痛酊的陰性對照品，以2.1.1中的方法制取陰性對照溶液。

2.2 限度測定

根據(jù)薄層色譜法，即TLC法（《中國藥典》（2010版））中的方法進行試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液以及陰性對照溶液各為5.0μL，將其分別點在同一硅膠G薄層板之上，以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（體積比為20：18：3：6：1）作為展開劑，將其放置在氨蒸汽飽和的展開缸之中進行展開處理，將其取出，晾干，按照順序噴以稀碘化鉍鉀試劑以及亞硝酸鈉乙醇試劑，將其置于可見光條件下進行檢視。結(jié)果顯示：在供試品色譜之中，與對照品色譜相對應(yīng)的部位出現(xiàn)的斑點大小于強度均明顯比對照品的斑點面積要小，或者不存在斑點。將溫度和相對濕度分別設(shè)置為18℃以及68%，在上述3批供試品色譜之中，在與對照品色譜相應(yīng)的部位上面未發(fā)現(xiàn)有斑點存在，陰性未存在干擾。上述結(jié)果提示本方法的專屬較為理想。

2.3 耐用性測定

2.3.1 設(shè)定取樣量

取6mL的樣品，將烏頭堿限量設(shè)置為2.0mg，供試品點養(yǎng)量為5μL，與5μL的烏頭堿對照品溶液相當。結(jié)果表明：供試品色譜之中，在與對照品色譜相對應(yīng)的部位所產(chǎn)生的斑點強度以及規(guī)格均小于對照品斑點，或者無斑點產(chǎn)生。

2.3.2 選取展開劑

對兩組展開劑進行分組考察：（1）展開劑1：環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺（三者體積比分別為5：2：1）；（2）展開劑2：甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（體積比為20：18：3：6：1）。按照2.2節(jié)中的相關(guān)方法進行操作處理，結(jié)果顯示：溫度及相對濕度分別設(shè)置為18℃及68%時，采用展開劑1，供試品其他成分斑點之間的分離度非常小，接近于烏頭堿的斑點，分離起來難度較大。采用展開劑2時，供試品之間較易分離開來，烏頭堿斑點十分清楚、規(guī)整，且與其他斑點之間很容易分離，重復效果理想，因此選擇展開劑2，即甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（體積比為20：18：3：6：1）。其中：A表示環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺（三者體積比分別為5：2：1）；B表示甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（體積比為20：18：3：6：1）。1：對照品；2、3、4：不同生產(chǎn)批號的供試品。

3 討論

醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊的主要化學成分為烏頭堿，它不僅屬于一種烏頭類植物的生理活性物質(zhì)，而且它也極易引起患者中毒。由于其毒性巨大，炮制不徹底、劑量過大以及煎煮方法不當?shù)确矫娴囊蛩?，常常會導致患者死亡的產(chǎn)生。醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊含有大量的烏頭堿，為了確保該制劑安全有效，應(yīng)注重對烏頭堿的含量進行準確地定量檢測。

根據(jù)《中國藥典》中的相關(guān)規(guī)定內(nèi)容，姜紅活血止痛酊的常用劑量為1.5-3.0g，含酯型生物堿以烏頭堿作為當量進行計算，不能超過0.15%。如果實驗設(shè)定對照品的限量以止痛酊常用劑量的1.5g來計算，那么相對應(yīng)的烏頭堿對照品限量則為2.25mg，本研究中烏頭堿的實際設(shè)計量為2.0mg。所以，確保制劑安全的一個重要條件就是：供試品溶液的斑點強度及大小均小于相應(yīng)劑量的烏頭堿對照品溶液的斑點強度及大小，或者斑點未出現(xiàn)，此時烏頭堿的含量則在安全范圍之內(nèi)，可以放心用藥。本研究中設(shè)定點樣量大小為5μL，與5μL的烏頭堿對照品溶液相當。本研究中所使用的方法參考了《中國藥典》（2010年版）中制定的相關(guān)操作守則及方法。實驗中所運用的烏頭堿溶液，則采用無水乙醇溶液對其進行稀釋，應(yīng)注意新配新用，或者溶液配制好之后，將其置于溫度為2-8℃的冰箱中進行保存，第一時間使用。

綜上所述可知，薄層色譜法應(yīng)用于醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊中烏頭堿含量的測定之中，操作便捷，重復性佳，應(yīng)加以推廣及應(yīng)用。

參考文獻

[1]賀云杰，趙晨，李妍，等.參附強心丸中人參、大黃、桑白皮的薄層色譜鑒別及烏頭堿限度檢查[J].世界科學技術(shù)：中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2009，11（3）：468.

[2]黃可婧，王麗娟.附子理中片的質(zhì)量標準研究[J].天津藥學，2014，26（5）：16-20.

[3]武琳，楊光，黃菲.連翹敗毒丸質(zhì)量標準研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2014，21（5）：95-97.

[4]肖霞，曹俊凱.牡丹皮中丹皮酚的薄層層析鑒別[J].中國實用醫(yī)藥，2014，9（26）：256-257.