黃 建，郭金強(qiáng)，周偉新，馮春宇，凌學(xué)民

（廣東省深圳市龍崗區(qū)第二人民醫(yī)院婦科，廣東 深圳 518100；2.廣東省深圳市龍崗區(qū)第二人民醫(yī)院功能科，廣東 深圳 518100；3.廣東省深圳市龍崗區(qū)第二人民醫(yī)院病理科，廣東 深圳 518100）

子宮內(nèi)膜異位癥在婦科疾病中屬于較多見的良性病癥，通常主要臨床癥狀為慢性盆腔疼痛或者痛經(jīng)、不孕，給患者的身心以及生活帶來極大不便。該病雖被歸結(jié)為良性病癥，但卻可表現(xiàn)為惡性腫瘤的生物學(xué)行為，如新生血管的生成、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)移等現(xiàn)象，其中，黏附、侵襲以及新生血管是該病發(fā)生發(fā)展的三大步驟，當(dāng)子宮內(nèi)膜碎片通過逆向流動進(jìn)入盆腔時(shí)粘附在盆腔生長[1-2]。在整個(gè)疾病過程中，腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制基因（non-metastatic23，nm23）在細(xì)胞信號傳遞以及增殖分化中起到了主導(dǎo)作用，目前也有文獻(xiàn)報(bào)道nm23或許可抑制腫瘤血管生成。本研究使用免疫組織化學(xué)法檢測nm23在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)，并探討其在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院于選取我院于2012年6月～2017年12月收治的子宮內(nèi)膜異位癥患者38例作為研究組；同時(shí)選擇同期因不孕癥（排除器質(zhì)性疾病及子宮內(nèi)膜異位癥）行子宮內(nèi)膜活檢結(jié)果為正常子宮內(nèi)膜患者32例作為對照組。其中研究組年齡24～50歲，平均（33.18±6.61）歲；對照組年齡24～44歲，平均（33.13±5.57）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者術(shù)前未接受放療與化療，3個(gè)月內(nèi)未使用甾體類激素。排除標(biāo)準(zhǔn)：不愿意參與本次試驗(yàn)者。所有患者的年齡，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有患者均簽署知情同意書，且該方案通過倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

組織樣品均在手術(shù)時(shí)采樣，取樣后經(jīng)10%甲醛溶液固定12h，脫水包埋，切片厚度5μm，篩選后進(jìn)行下一步。免疫組化使用SP法，nm23是鼠抗人單克隆抗體，DAB顯色液與SP試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。實(shí)驗(yàn)流程參照試劑盒說明書，陰性染色對照使用PBS替代一抗，陽性對照來自試劑盒陽性片。

1.3 結(jié)果判定

通過細(xì)胞著色強(qiáng)度與染色細(xì)胞的面積的總和判定：1）染色強(qiáng)度的評判標(biāo)準(zhǔn)：未染上顏色為0分，染上黃色為1分，染上棕色為2分，染上黃褐色為3分；2）染色細(xì)胞的面積評判標(biāo)準(zhǔn)：未見陽性細(xì)胞染色的為0分，陽性細(xì)胞＜25%的為1分，陽性細(xì)胞占25%～50%的為2分，陽性細(xì)胞＞50%的為3分；3）兩個(gè)評分總和＞2為陽性，≤2為陰性；其中，分?jǐn)?shù)于0～1分之間的為陰性，2分為弱陽性，于3～4分之間為陽性，于5～6分之間為強(qiáng)陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0軟件分析，采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 nm23免疫組織化學(xué)法染色結(jié)果

nm23免疫組織化學(xué)法染色顯示其主要表達(dá)在子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞漿中，細(xì)胞核中僅有少數(shù)表達(dá)，對照組內(nèi)膜中nm23的表達(dá)率高達(dá)90.63%，而研究組內(nèi)膜中的表達(dá)率僅42.11%，顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 nm23在子宮內(nèi)膜異位及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)

3 討 論

目前子宮內(nèi)膜異位癥的機(jī)制以及機(jī)理尚未完全闡明，其有著與惡性腫瘤相同的轉(zhuǎn)移與入侵能力這一奇特現(xiàn)象被大家所關(guān)注，目前多數(shù)學(xué)者贊成黏附、侵襲以及血管的生成是該病病程中的主要步驟，且在病程中起主導(dǎo)作用，在這些過程中，黏附又是該病發(fā)展的第一步[3]。

nm23基因與腫瘤轉(zhuǎn)移與抑制存在某種關(guān)聯(lián)，該基因編碼的蛋白產(chǎn)物不僅有著核苷二磷酸激酶 (NDPK)活性，還具有其他多種生物學(xué)用途，如：與許多蛋白之間存在交互作用；可結(jié)合DNA，參與DNA與蛋白質(zhì)的合成等多種用途。若該基因發(fā)生缺失或突變將導(dǎo)致nm23蛋白直接影響細(xì)胞骨架激活細(xì)胞運(yùn)動，使加入至腫瘤中的浸潤轉(zhuǎn)移這一過程中去，同時(shí)參與至腫瘤的發(fā)育過程，其次，該蛋白也將引起異常的微管聚合過程，最終導(dǎo)致紡錘體在減數(shù)分裂時(shí)期出現(xiàn)異常，致使癌細(xì)胞的非整倍染色體出現(xiàn)，從而起到促進(jìn)腫瘤生長的效果。此外，nm23還參與到了抑制血管新生的過程中，已有研究表明[4]，nm23的蛋白產(chǎn)物會與新生血管以及腫瘤的發(fā)生產(chǎn)生某種關(guān)聯(lián)，最終達(dá)到負(fù)調(diào)控乳腺癌的轉(zhuǎn)移。已有文獻(xiàn)通過RT-PCR等方法檢測了子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜的nm23蛋白及mRNA水平顯著低于正常子宮內(nèi)膜[2,5]，該實(shí)驗(yàn)與本文研究結(jié)果相對應(yīng)。

雖然子宮內(nèi)膜異位癥屬于良性病癥，卻具有與惡性腫瘤相同的轉(zhuǎn)移與入侵能力，目前導(dǎo)致這一特殊現(xiàn)象的原因機(jī)理還未闡明，因此研究nm23基因在子宮內(nèi)膜異位癥中的調(diào)控機(jī)理以及其本身作用對該病本身具有十分重要的研究意義。

[1] Youn B, Kim H D,Kim J.Nm23-H1/nucleoside diphosphate kinase as a key molecule in breast tumor angiogenesis[J].Expert Opinion on Therapeutic Targets, 2008,12(11):1419-30.

[2] 汪根蓮,林愛琴,段仁杰,等.nm23-H1和p53基因在子宮內(nèi)膜異位癥患者異位組織中的表達(dá)及意義[J].皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2016,35(01):5-7.

[3] Li Y,Kang S,Qin JJ, et al. nm23 gene polymorphisms are associated with survival of patients with epithelial ovarian cancer but not with susceptibility to disease[J]. Gynecol Oncol, 2012, 126(3):455-459.

[4] Huang X I, Wei Z, Yan L I, et al. Association between nm23 gene polymorphisms and the risk of endometriosis[J]. Biomedical Reports,2015, 3(6): 874-878.

[5] 汪根蓮.子宮內(nèi)膜異位癥中nm23-H1基因和p53基因的表達(dá)及相關(guān)性研究[D].皖南醫(yī)學(xué)院, 2016.