李倩

摘要：目的 采用HPLC法測(cè)定諾氟沙星膠囊溶出度。方法 選擇色譜柱為Agilent HC-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為：磷酸-三乙胺緩沖液∶水∶乙腈（60∶28∶12），流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為277 nm，柱溫25 ℃，按照藥典中漿法測(cè)定諾氟沙星膠囊溶出度。結(jié)果 HPLC法中諾氟沙星膠囊在2.03～50.95 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程Y=634.4X-543.1，加樣回收率平均值為100.23%，RSD 1.7%；諾氟沙星膠囊在醋酸緩沖液介質(zhì)中溶出度均值為91.37%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論 高效液相法測(cè)定諾氟沙星膠囊準(zhǔn)確、可靠，可以作為溶出度檢測(cè)的參考方法。

關(guān)鍵詞：高效液相法；諾氟沙星膠囊；溶出度

諾氟沙星屬第三代喹諾酮類(lèi)抗菌藥，具有抗菌作用強(qiáng)、抗菌譜廣、不良反應(yīng)發(fā)生率低等特點(diǎn)，目前已有注射劑、滴眼劑、膠囊劑等多種劑型，且以膠囊劑較為多見(jiàn)[1]。近年來(lái)溶出度試驗(yàn)已成為評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量及生產(chǎn)工藝的指標(biāo)之一，也已列入藥典考察指標(biāo)中。諾氟沙星含量測(cè)定方法目前有高效液相色譜法、紫外分光光度法等，2015版藥典中對(duì)于諾氟沙星膠囊劑考察為紫外分光光度法[2]，但有報(bào)道指出，諾氟沙星所用膠囊在對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)下存在一定吸收[3]，進(jìn)而可能干擾檢測(cè)結(jié)果，本文由此出發(fā)，考察高效液相法測(cè)定諾氟沙星的可行性。

1資料與方法

1.1儀器與試藥 島津 LC-2010CHT型高效液相色譜儀；瑞士梅特勒XS205DU型電子天平；乙腈、甲醇均由霍尼韋爾貿(mào)易（上海）有限公司提供，為色譜醇；冰醋酸、氫氧化鈉、磷酸、三乙胺均為分析純；諾氟沙星對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：130450-201206，含量：99.5%）；諾氟沙星片（浙江萬(wàn)邦藥業(yè)股份有限公司）。

1.2方法

1.2.1高效液相法

1.2.1.1色譜條件 色譜柱選擇Agilent HC-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：磷酸-三乙胺緩沖液（磷酸4 ml與三乙胺7 ml，加50%甲醇稀釋至1000 ml）∶水∶乙腈（60∶28∶12），檢測(cè)波長(zhǎng)277 nm，進(jìn)樣量10 μl，流速1.0 ml/min，柱溫為室溫（25℃）。

1.2.1.2溶液的制備

①供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取20粒諾氟沙星膠囊，傾出全部?jī)?nèi)容物后，研細(xì)，混合均勻，精密稱(chēng)取上述供試品50 mg置于50 ml容量瓶中，加入0.1 mol/L鹽酸適量溶解并定量稀釋至刻度，取上述溶液5 ml于50 ml容量瓶中，加入0.1 mol/L鹽酸稀釋并定容，取適量溶液經(jīng)微孔濾膜（0.45um）過(guò)濾，取續(xù)濾液待用。

②對(duì)照品溶液的制備 采用十萬(wàn)分之一天平稱(chēng)取諾氟沙星對(duì)照品10.19 mg于100 ml容量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸適量稀釋至刻度，搖勻即得。

1.2.1.3方法學(xué)考察

①精密度試驗(yàn) 在“1.2.1.1”項(xiàng)色譜條件下，對(duì)照品溶液過(guò)0.45 μm濾膜后重復(fù)進(jìn)樣6次，10 μl/次，分別測(cè)定峰面積，并計(jì)算6組數(shù)據(jù)所得的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果為 1.6%<2.0%，符合藥典規(guī)定，提示本組方法精密度良好。

②重復(fù)性試驗(yàn) 選擇同批號(hào)諾氟沙星膠囊6份，精密稱(chēng)定后，根據(jù)供試品“1.2.1.2①”項(xiàng)操作制備供試品溶液，采用“1.2.1.1”項(xiàng)色譜條件，進(jìn)樣10 μl，采集6份樣品的色譜圖，計(jì)算溶液的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.4%（n=6）<2.0%，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，提示本組方法具有較好的重復(fù)性。

③穩(wěn)定性試驗(yàn) 于2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取供試品溶液，采用相同色譜條件，進(jìn)樣10 μl，根據(jù)測(cè)得的色譜峰面積，供試品組RSD為1.3%<2.0%，提示供試品溶液在24 h內(nèi)較為穩(wěn)定。

④回收率考察 精密移取“1.2.1.2①”項(xiàng)供試液2 ml于10 ml容量瓶中，保存至3個(gè)錐形瓶?jī)?nèi)，依次加諾氟沙星對(duì)照品溶液1 ml、2 ml和3 ml，加0.1 mol/L鹽酸定容至刻度，過(guò)0.45 μm微孔濾膜后取續(xù)濾液，進(jìn)樣10 μl，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定，得到回收率分別為100.18、100.25%和100.20%，平均100.23%，RSD 1.7%，與藥典標(biāo)準(zhǔn)相符。

1.2.1.4線性關(guān)系考察 采用移液管精密移取“1.2.1.2②”下對(duì)照品溶液0.20 ml、0.50 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml于10 ml容量瓶中，使用0.1 mol/L鹽酸稀釋至刻度，澄清后，采用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，得到系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。結(jié)合對(duì)應(yīng)色譜條件，進(jìn)樣10 μl，測(cè)定樣品色譜峰面積，以峰面積和濃度為坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程為：Y=634.4X-543.1（r=0.9992），提示，諾氟沙星濃度在2.03～50.95 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積存在良好的線性關(guān)系。

1.2.2溶出度考察[3] 按照藥典中溶出度與釋放度測(cè)定法，配置醋酸緩沖液（取冰醋酸2.86 ml與50%氫氧化鈉溶液1 ml，加水900 ml，振搖，測(cè)定pH并結(jié)合所測(cè)pH用冰醋酸或50% 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至4.0，加水至1000 ml）1000 ml作為溶出介質(zhì)，調(diào)節(jié)溶出儀，設(shè)定轉(zhuǎn)速50 r/min，取本品，依法操作，30 min后吸取溶液適量，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，用溶出介質(zhì)稀釋至約5 μg/ml，為供試品，根據(jù)“1.2.1.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，并通過(guò)“1.2.1.4”標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度，結(jié)合稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品含量m測(cè)，結(jié)合膠囊標(biāo)示量m標(biāo)，計(jì)算30 min溶出度=（m測(cè)/m標(biāo)）×100%。

2結(jié)果

高效液相法測(cè)定的諾氟沙星膠囊平均溶出度（與標(biāo)識(shí)量比較）為91.37%，各自單獨(dú)溶出度及平均溶出度均高于75%，符合藥典要求，見(jiàn)表1。

3討論

早期諾氟沙星HPLC法測(cè)定多以磷酸-乙腈系統(tǒng)為主，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中曾以此法進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)峰形拖尾嚴(yán)重，柱效低，保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，故舍棄該法，后查閱到文獻(xiàn)[4]中提到三乙胺的加入可有效改善峰形，經(jīng)摸索，選擇磷酸-三乙胺緩沖液∶水∶乙腈（60∶28∶12）作為本次研究所用流動(dòng)相。由本文結(jié)果可知，高效液相法測(cè)定諾氟沙星含量的方法準(zhǔn)確性高、精密度好、重現(xiàn)性均符合相關(guān)要求，同時(shí)針對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)中提及的空膠囊殼本身存在吸收干擾，故而不利于紫外分光光度的準(zhǔn)確性，采用高效液相法通過(guò)色譜柱的分離作用，將諾氟沙星制備過(guò)程中的有關(guān)物質(zhì)、雜質(zhì)等干擾有效分離，進(jìn)而可提高其檢測(cè)準(zhǔn)確性[5]。

綜上所述，高效液相法測(cè)定諾氟沙星膠囊準(zhǔn)確、可靠，可以作為溶出度檢測(cè)的參考方法。

參考文獻(xiàn)：

[1]吳燕紅，梁權(quán)輝，謝加庭，等.不同廠家諾氟沙星膠囊含量及其溶出度的觀察[J].中國(guó)處方藥，2016，14（11）：18-19.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：1198-1199.

[3]楊亮，蔣玲，李劍，等.口服諾氟沙星膠囊致多形紅斑1例[J].中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析，2017（1）：143-144.

[4]陳珊珊，蔡建華，許巧云.諾氟沙星膠囊溶出度的研究[J].海峽藥學(xué)，2010，22（10）：66-68.

[5]楊靜，徐軼飛，苗愛(ài)東.諾氟沙星膠囊含量測(cè)定的不確定度評(píng)估[J].白求恩醫(yī)學(xué)雜志，2015，13（6）：593-595.

編輯/王海靜