陳秀麗

[摘要] 目的 分析不同核酸檢測(cè)方法對(duì)獻(xiàn)血者隱匿性乙肝病毒感染的檢測(cè)能力。方法 方便抽取2015年1月—2016年10月期間到獻(xiàn)血站進(jìn)行無償獻(xiàn)血的8 000名人員，對(duì)其分別選擇Procleix Ultrio以及nested-PCR兩種自動(dòng)核算檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)其血漿標(biāo)本予以HBN核酸檢測(cè)，同時(shí)序列分析核酸陽性標(biāo)本。結(jié)果 通過研究后可知，40名獻(xiàn)血者HBsAg檢測(cè)結(jié)果為陽性，比例經(jīng)計(jì)算后為0.50%，420名獻(xiàn)血者抗-HBc結(jié)果為陽性，比例經(jīng)計(jì)算后為5.25%，25例獻(xiàn)血者經(jīng)過Procleix Ultrio以及nested-PCR能力相當(dāng)，表現(xiàn)為陽性結(jié)果。結(jié)論 獻(xiàn)血人員中隱匿性乙肝病毒感染比例較高，而核酸檢測(cè)方法的差異性致使檢測(cè)能力有所不同。

[關(guān)鍵詞] 核酸檢測(cè)；獻(xiàn)血者；隱匿性乙肝病毒感染

[中圖分類號(hào)] R440 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2017）04（c）-0068-03

[Abstract] Objective To analyze the effect of different nucleic acid test methods on the occult hepatitis B virus infection of blood donors. Methods 8 000 cases of blood donors from January 2015 to October 2016 were extracted and the plasma specimens were given the HBN nucleic acid test respectively by the Procleix Ultrio and nested-PCR， at the same time， the nucleic acid positive samples were given the sequence analysis. Results The research showed that of the 40 blood donors， the HBsAg test result was positive accounting for 0.50%， of 420 cases of blood donors， the anti-HBC result was positive， accounting for 5.25%， the result of Procleix Ultrio was similar to that of nested-PCR， positive. Conclusion The ratio of occult hepatitis B virus infection of blood donors is higher， and the difference in the nucleic acid test method lead to different test abilities.

[Key words] Nucleic acid test； Blood donor； Occult hepatitis B virus infection

HBV感染是我國較為重要的公共衛(wèi)生課題，而檢測(cè)HBV感染的主要指標(biāo)為HBsAg。然而在排除早期感染檢測(cè)窗口期，而經(jīng)過HBV DNA陽性比例均有隱匿性HBV感染引發(fā)HBsAg陰性結(jié)果。HBV感染的一種特殊類型為OBI，如果獻(xiàn)血者出現(xiàn)OBI，當(dāng)其進(jìn)行獻(xiàn)血時(shí)會(huì)使得受血者產(chǎn)生病毒性肝炎或者感染HBV[1]。臨床對(duì)于OBI的檢測(cè)并無良好的手段，通常選擇NAT（核酸檢測(cè)）對(duì)HBV DNA進(jìn)行檢測(cè)。核算檢測(cè)方法則在PCR原理基礎(chǔ)上以及TMA原理基礎(chǔ)上，上述兩種原理均可對(duì)HIV、HCV以及HBV病毒進(jìn)行檢測(cè)[2]。該次研究則分析同核酸檢測(cè)方法對(duì)獻(xiàn)血者隱匿性乙肝病毒感染的檢測(cè)能力，方便抽取2015年1月—2016年10月期間到獻(xiàn)血者進(jìn)行無償獻(xiàn)血的8 000名人員，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便抽取2015年1月—2016年10月期間到獻(xiàn)血者進(jìn)行無償獻(xiàn)血的8 000名人員，對(duì)其血漿標(biāo)本進(jìn)行抽取，每人需要將2管血漿標(biāo)本進(jìn)行保留，兩管均為8 mL真空采血管，具有EDTA-K2抗凝以及帶分離膠，同時(shí)型號(hào)為L(zhǎng)OT N786502。一管進(jìn)行Procleix Ultrio檢測(cè)，另外一個(gè)管首先將1 mL血漿進(jìn)行分離，在-20℃環(huán)境中進(jìn)行保存，隨后對(duì)其進(jìn)行nested-PCR檢測(cè)。剩余標(biāo)本進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)。

1.2 方法

血清學(xué)檢測(cè)。8 000名獻(xiàn)血人員在進(jìn)行獻(xiàn)血之前需要實(shí)施HBsAg試紙條初次篩選，為HBsAg（乙型肝炎病毒表面抗原）診斷，隨后對(duì)此標(biāo)本實(shí)施檢測(cè)，其檢測(cè)內(nèi)容包含HBsAb、HBsAg以及HbcAb，此試劑采用膠體金法進(jìn)行檢測(cè)。采用北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的檢測(cè)劑HBsAb和HbcA，采用美國雅培以及廈門新創(chuàng)生產(chǎn)的HBsAg試劑，此試劑采用ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)。上述試劑均進(jìn)行批檢同時(shí)按照試劑盒操作說明書予以操作。HBsAg陰性結(jié)果為兩種HBsAg試劑經(jīng)檢測(cè)后均為陰性，任何一種HBsAg檢測(cè)為陽性則說明HBsAg結(jié)果陽性[3]。

Procleix Ultrio檢測(cè)。Procleix Ultrio檢測(cè)選擇單人份核算檢查，隨后和血清學(xué)檢測(cè)一同進(jìn)行。Ultrio在進(jìn)行初檢的過程中，如果出現(xiàn)反應(yīng)性標(biāo)本需要進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，如再次產(chǎn)生反應(yīng)性則為Ultrio反應(yīng)性，如對(duì)其實(shí)施重復(fù)檢測(cè)后無反應(yīng)性，通過辮子血血漿進(jìn)行檢測(cè)，如依舊未產(chǎn)生反應(yīng)性則為Ultrio非反應(yīng)性，再次予以檢測(cè)后可將其判定為Ultrio反應(yīng)性。因?yàn)镻rocleix Ultrio檢測(cè)能夠?qū)IV、HVC、以及HBV混合病毒進(jìn)行檢測(cè)，為此Ultrio 反應(yīng)行標(biāo)本需要實(shí)施HBV鑒別，從而對(duì)其是否為陽性結(jié)果進(jìn)行確定[4]。

nested-PCR檢測(cè)。nested-PCR檢測(cè)則是按照抗-HBc陽性單獨(dú)標(biāo)本實(shí)施檢測(cè)，檢測(cè)過程中為單人份HBV-nested-PCR檢測(cè)。Procleix Ultrio檢測(cè) NAT結(jié)果如果為陽性，其標(biāo)本并非是抗-HBc單獨(dú)陽性，隨后對(duì)其實(shí)施單人份HBV-nested-PCR檢測(cè)[5]。血漿檢測(cè)時(shí)，選擇QIAamp DNA Blood Mini Kit對(duì)HBV-DNA進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)過程中選擇6套不同地區(qū)的引物實(shí)施巢式PCR，20 copies/mL為巢式PCR檢測(cè)指標(biāo)。如果進(jìn)行初次檢測(cè)后其標(biāo)本結(jié)果為陽性，對(duì)其標(biāo)本進(jìn)行保存，并對(duì)DNA標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)提取，進(jìn)而實(shí)施復(fù)檢，當(dāng)復(fù)檢結(jié)果為陽性時(shí)其檢測(cè)結(jié)果為陽性，當(dāng)復(fù)檢結(jié)果為陰性時(shí)檢測(cè)結(jié)果為陰性[6]。

1.3 HBV S基因片段測(cè)試

S基因區(qū)域中的a表位片段是采用ABI 3 100 DNA全自動(dòng)測(cè)試予以檢查，a表位片段包含aa110-aa165。在進(jìn)行檢測(cè)的過程中其引物為S3 GCGGGGTTTTCTTGTTGAC 以及S4 GGGACTCAAGATGTTGTACAG，通過檢測(cè)可知其序列長(zhǎng)度大致為544bp，同時(shí)表現(xiàn)為雙向[7-8]?；蚍中蛣t選擇MEFA3.1序列軟件實(shí)施，隨后采用Neighbor-Join-ing對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 分析獻(xiàn)血人員一般情況和血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

8 000名獻(xiàn)血人員男性4 500名，女性3 500名，年齡最大者為38歲，年齡最小者為21歲，經(jīng)軟件計(jì)算后平均年齡為（31.4±2.0）歲，3 000名為初次獻(xiàn)血。通過檢測(cè)后可知40名獻(xiàn)血者HBsAg檢測(cè)結(jié)果為陽性，比例經(jīng)計(jì)算后為0.50%，420名獻(xiàn)血者抗-HBc結(jié)果為陽性，比例經(jīng)計(jì)算后為5.25%。

2.2 分析HBV核酸檢測(cè)結(jié)果

40名獻(xiàn)血者為陽性結(jié)果，而25例獻(xiàn)血者經(jīng)過Procleix Ultrio以及nested-PCR能力相當(dāng)，表現(xiàn)為陽性結(jié)果，詳細(xì)數(shù)據(jù)由表1可知。與此同時(shí)，20名獻(xiàn)血者為B型基因，6名獻(xiàn)血者為C型基因，其中OBI中5名為B基因，10名為C基因。

3 討論

無償獻(xiàn)血人員中通常會(huì)產(chǎn)生OBI現(xiàn)象，而此現(xiàn)象同樣在多數(shù)研究中進(jìn)行報(bào)道。同時(shí)該地區(qū)采用抗-HBc單獨(dú)陽性結(jié)果聯(lián)合nested-PCR方法對(duì)無償獻(xiàn)血者進(jìn)行檢測(cè)[9]。而該次研究結(jié)果表明，本地區(qū)無償獻(xiàn)血患者中具有較高的隱匿性乙肝病毒感染發(fā)生率，而將血液篩選方法進(jìn)行有效改進(jìn)，保證血液安全是臨床一直研究的課題。與此同時(shí)說明nested-PCR為核酸檢測(cè)方法的靈敏度以及穩(wěn)定性良好，但是因?yàn)榇朔椒ú僮鬟^程中具有一定的復(fù)雜性，因此不能將此方法在臨床中進(jìn)行常規(guī)應(yīng)用。

Procleix Ultrio為目前臨床中常用的血液核酸篩查系統(tǒng)，我國部分供血機(jī)構(gòu)均采用此系統(tǒng)對(duì)NAT進(jìn)行檢測(cè)，臨床研究證實(shí)nested-PCR檢測(cè)方法的靈敏度高于Procleix Ultrio檢測(cè)，對(duì)其原因因素進(jìn)行分析可能為以下幾點(diǎn)，兩種檢測(cè)方法的原理存在差異行，nested-PCR為一種方法，而Procleix Ultrio采用TMA原理，為此前者檢測(cè)方法的靈敏度高于后者，但是需要進(jìn)行深度研究，此外Procleix Ultrio系統(tǒng)對(duì)于HBV核酸并無較高的靈敏度。通常情況下，隱匿性乙肝病毒感染載量在200 IU以下，Procleix Ultrio雖然可實(shí)現(xiàn)幾個(gè)IU，但是其自身的靈敏度存在差異性，同時(shí)因?yàn)榄h(huán)境、標(biāo)本和操作等相關(guān)因素的影響，無法實(shí)現(xiàn)檢測(cè)水平，進(jìn)而降低了檢出正確率。

該次研究通過探究后可知，40名獻(xiàn)血者HBsAg檢測(cè)結(jié)果為陽性，比例經(jīng)計(jì)算后為0.50%，420名獻(xiàn)血者抗-HBc結(jié)果為陽性，比例經(jīng)計(jì)算后為5.25%，25名獻(xiàn)血者經(jīng)過Procleix Ultrio以及nested-PCR能力相當(dāng)，表現(xiàn)為陽性結(jié)果。由此能夠看出不同核酸檢測(cè)方法對(duì)獻(xiàn)血者隱匿性乙肝病毒感染具有不同的臨床意義，此研究結(jié)果和臨床以往的研究結(jié)果存在一致性，和李錦等人[10]對(duì)隱匿性乙肝獻(xiàn)血者中TGF-β1的表達(dá)結(jié)果存在相似性，其研究結(jié)果證實(shí)C型極易產(chǎn)生OBI患者。

綜上所述，C型極易產(chǎn)生OBI，但是由于該次研究時(shí)間以及樣本數(shù)量等問題，對(duì)于OBI的產(chǎn)生機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2017-01-24）