唐婷玉 李志軍 俞李羚 黃勍棟

讀者·作者·編者

NF-κB 下游炎癥因子在非肥胖 OSAS 患者外周血中的表達(dá)及臨床意義

唐婷玉 李志軍 俞李羚 黃勍棟

目的 分析 NF-κB 下游炎癥因子在非肥胖阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征（OSAS）患者外周血中的表達(dá)及其與 OSAS患者疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性，以評(píng)價(jià)其臨床價(jià)值。 方法 選擇夜間打鼾憋氣伴日間嗜睡的非肥胖人群，進(jìn)行多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè)（PSG），根據(jù) AHI指數(shù)分為非 OSAS 組 98 例，OSAS 組 100 例（輕度 45 例、中度 30 例、重度 25 例），所有入組對(duì)象抽取外周靜脈血，采用 ELISA法檢測(cè)外周血 IL-6、TNF- α、C 反應(yīng)蛋白（CRP），分析兩組間上述指標(biāo)的差異，并與呼吸暫停低通氣指數(shù)（AHI）進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果 與非 OSAS 組相比，OSAS 組外周血 IL-6、TNF- α、CRP 升高（均 P＜0.05）；輕度 OSAS 患者 AHI與 TNF- α、CRP 不相關(guān)（r=0. 170、0.239，均 P ＞0.05），與 IL-6 呈低度相關(guān)（r=0.330，P＜0.05），中度患者 AHI與 IL-6、TNF- α、CRP 呈中度相關(guān)（r=0.637、0.644、0.705，均 P＜0.05），重度患者 AHI與 IL-6、TNF- α、CRP 呈高度相關(guān) （r=0.821、0.805、0.854，均 P＜0.05）。 結(jié)論 非肥胖人群OSAS 患者外周血炎癥指標(biāo)的表達(dá)較非 OSAS 者升高，并在中、重度患者中與 AHI相關(guān)，這些指標(biāo)對(duì) OSAS 的診斷及嚴(yán)重程度的評(píng)價(jià)有一定的臨床價(jià)值。

非肥胖 阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征 核因子-κB 炎癥因子

【 Abstract 】 Objective To investigate the expression of NF- κB downstream inflammatory factors in non-obese patients with obstructive sleep apnea syndrome(OSAS)and its relation to the disease severity. Methods One hundred and ninety eight non-obese subjects with nocturnal snoring with daytime somnolence were monitored with polysomnography(PSG),according to apnea hypopnea index(AHI),100 subjects were classified as OSAS and 98 as non-OSAS.Serum IL-6,TNF- α and CRP levels were measured with ELISA method.Results Compared with the non-OSAS group,serum IL-6,TNF- α and CRP were elevated significantly(P＜0.05).In OSAS AHI score and TNF alpha,mild group were not associated with CRP(r=0.170、0.239,P ＞0.05) associated with IL-6 mild(r=0.330,P＜0.05)and OSAS moderate group AHI index and IL-6,TNF alpha,moderately correlated to the CRP(r=0.637、0.644、0.705,P＜0.05),severe group and IL-6,TNF alpha,CRP was highly correlated(r=0.821、0.805、0.854, P ＜0.05). Conclusion Non-obese people the expression of peripheral blood in patients with OSAS group inflammation index than in OSAS group increases,and in the middle and severe population associated with AHI index,evaluation of diagnosis and severity of OSAS has certain clinical value.

【 Key words 】 Non-obese OSAS NF- κappa B Inflammation factors

阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征（OSAS）可引起慢性炎癥反應(yīng)，其病理?yè)p傷核心因素是體內(nèi)長(zhǎng)期存在的間歇低氧/再氧合環(huán)境。間歇低氧可以優(yōu)先激活炎癥通路，促進(jìn)下游炎性細(xì)胞因子、趨化因子和黏附分子的表達(dá)，造成機(jī)體全身性炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷和功能紊亂，促進(jìn)各種心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展。間歇低氧引起的炎癥通路機(jī)制包括 NF-κB 通路、細(xì)胞外調(diào)解蛋白激酶通路、p38 絲裂原活化蛋白激酶通路。近幾年，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)炎癥通路的研究熱點(diǎn)正是 NF-κB 通路，重點(diǎn)是其下游產(chǎn)物即外周血 IL-6、TNF-α、C 反應(yīng)蛋白 （CRP）在體內(nèi)的表達(dá)。呼吸暫停低通氣指數(shù)（AHI）是反映 OSAS病情嚴(yán)重程度的主要指標(biāo)，無(wú)論患者有無(wú)日間癥狀，該指標(biāo)均可能與心血管疾病的發(fā)病率顯著相關(guān)[1]，而炎癥反應(yīng)在 OSAS 及其并發(fā)癥發(fā)病機(jī)制中的作用也越來(lái)越

受到重視。目前對(duì)于 OSAS 患者外周血指標(biāo)與 AHI是否有相關(guān)性，可否用該指標(biāo)判斷 OSAS患者的嚴(yán)重程度，尚有不同的觀點(diǎn)，部分分歧在于肥胖對(duì) OSAS 的炎癥指標(biāo)水平有影響。此外，OSAS 與肥胖的共存以及缺氧、炎癥和脂肪之間的相互關(guān)系，均可使炎癥表型的評(píng)價(jià)復(fù)雜化[2-3]。有研究發(fā)現(xiàn)中國(guó)人頜骨畸形的發(fā)生率較高，這可能是導(dǎo)致 OSAS 發(fā)生的重要因素。本研究在排除肥胖因素后研究 NF-κB 下游炎癥因子在 OSAS 患者中的表達(dá)，以期為臨床判斷 OSAS 病情的嚴(yán)重程度提供參考。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選擇本院 2014 年 6 月至 2016 年 6 月因夜間睡眠打鼾、憋氣及日間嗜睡為主訴就診的非肥胖患者（BMI＜28kg/m2）198 例，其 中男 128 例 ，女 70 例 ，年 齡45～77（61±13）歲。根據(jù) AHI分組，非 OSAS 組 98 例，男60 例 ，女 38 例 ，年 齡 45 ～70（59 ±11）歲；BMI 23kg/m2。OSAS 組 100 例，男 68 例，女 32 例，年齡 47～77（63±13）歲；BMI 26kg/m2。兩組對(duì)象性別、年齡、BMI 比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P ＞0.05）。OSAS 診斷符合 2011 年中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)睡眠呼吸障礙學(xué)組修訂的《阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診治指南》。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并心功能、腎功能衰竭，嚴(yán)重的感染性疾病，血液系統(tǒng)疾病，惡性腫瘤，中重度嗜酒，長(zhǎng)期使用精神類藥物，有風(fēng)濕性疾病及其他全身炎癥性疾病，使用吸入、口服或靜脈輸注激素的患者；有哮喘、過(guò)敏性鼻炎或過(guò)敏體質(zhì)的患者，需要手術(shù)治療的 OSAS 患者。

1.2 方法

1.2.1 多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè)（PSG） 采用睡眠生理儀（美國(guó)Alice5），按國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方法記錄腦電圖、眼電圖、下頜肌電圖、心電圖、血氧飽和度、鼻呼吸氣流、胸腹呼吸運(yùn)動(dòng)、鼾聲及體位。監(jiān)測(cè)時(shí)間為 22∶00 至次日 6∶00，一般需要整夜不少于 7h 的睡眠，睡眠分期、AHI、血氧飽和度低于 90%的時(shí)間（OLT90%）由計(jì)算機(jī)自動(dòng)分析。AHI為每小時(shí)呼吸暫停次數(shù)和睡眠低通氣次數(shù)之和。低通氣定義為口鼻氣流較基線水平降低＞50%且氣流持續(xù)至少10s，并伴有氧飽和度下降＞3%。呼吸暫停指口鼻氣流消失或明顯減弱，持續(xù)時(shí)間＞10s。

1.2.2 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù) AHI評(píng)判 OSAS 病情程度，5＜AHI≤15 次/h 為輕度，15＜AHI≤30 次/h 為中度，＞30次/h 為重度。以此為依據(jù)將 OSAS 患者分為輕度、中度、重度3組。

1.2.3 標(biāo)本的采集及測(cè)定 在獲得所有研究對(duì)象知情同意后，清晨空腹抽取肘靜脈血 5ml，2h 內(nèi)分離血清，-70℃低溫保存。采用 ELISA 法檢測(cè) IL-6、TNF-α、CRP，操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書要求進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)軟件，正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，相 關(guān) 性 分 析 采 用 Pearson 相 關(guān) ，r≥0.8 為 高 度 相 關(guān) ，0.5≤r＜0.8 為中度相關(guān)，0.3≤r＜0.5 為低度相關(guān)，r＜0.3 為不相關(guān)。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清 CRP、TNF-α、IL-6 水平比較 見表 1。

表1 兩組血清 CRP、TNF-α、IL-6 水平比較

由表 1 可見，與非 OSAS 組相比，OSAS 組血清 IL-6、TNF-α、CRP 水平均升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

2.2 OSAS 組患者 AHI與 CRP、TNF-α、IL-6 的相關(guān)性分析 見圖 1-3，表 2。

圖1 AHI與 TNF-α 相關(guān)性散點(diǎn)圖

圖2 AHI與 CRP 相關(guān)性散點(diǎn)圖

圖3 AHI與 IL-6 相關(guān)性散點(diǎn)圖

由圖 1-3、表 2 可見，輕度 OSAS 患者 AHI 與 TNF- α、CRP 不相關(guān)（r=0.170、0.239，均 P ＞0.05），與 IL-6 呈低度相關(guān) （r=0.330，P＜0.05），中度患者 AHI 與 IL-6、TNF-α、CRP 呈中度相關(guān)（r=0.637、0.644、0.705，均 P＜0.05），重度患者 AHI與 IL-6、TNF-α、CRP 呈高度相關(guān)（r=0.821、0.805、0.854，均 P＜0.05）。

表2 不同程度 OSAS 患者 AHI、CRP、TNF-α、IL-6 指標(biāo)比較

3 討論

OSAS 是指睡眠時(shí)反復(fù)發(fā)生上呼吸道部分或完全阻塞，導(dǎo)致氣流中斷或減少，引起血氧飽和度和高碳酸血癥，隨后發(fā)生微覺醒的睡眠呼吸障礙性疾病?；颊咭话惚憩F(xiàn)為疲勞和白天嗜睡，注意力和記憶力減退及睡眠打鼾史[4]。OSAS 是一個(gè)全球性的健康問(wèn)題，在發(fā)達(dá)國(guó)家和亞洲發(fā)展中國(guó)家均存在[5]。OSAS 極易發(fā)生并發(fā)癥，是多種疾病發(fā)生、發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，如心臟疾病、糖尿病、性功能障礙、認(rèn)知功能障礙及慢性阻塞性肺疾病等[6-8]。OSAS 診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是 PSG。但 PSG 檢查存在一定的局限性，首先由于檢查過(guò)程繁瑣，需要消耗大量的人力、物力及時(shí)間，因此基層醫(yī)院不具備完成該檢查的設(shè)備及技術(shù)；其次，對(duì)于醫(yī)從性較差的患者，如兒童、阿爾茨海默病患者、精神障礙患者等，PSG 無(wú)法實(shí)施。因此，從 OSAS 的病理生理過(guò)程及多系統(tǒng)損傷的層面出發(fā)，尋找變化顯著并簡(jiǎn)便易行的生物學(xué)標(biāo)志物來(lái)診斷疾病及判斷療效將成為研究重點(diǎn)之一。

OSAS 反復(fù)發(fā)作的呼吸暫停和低通氣可激活一系列炎癥相關(guān)機(jī)制如慢性間歇缺氧條件下 NF-κB 的活化[9]。NF-κB 是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，是 Rel家族蛋白的成員之一。有觀點(diǎn)認(rèn)為，間歇低氧/再氧合導(dǎo)致活性氧（ROS）和炎癥因子的高表達(dá)[10]，進(jìn)而引起 OSAS 炎癥聯(lián)級(jí)反應(yīng)[11]。ROS 水平增高通過(guò)影響炎癥核心因子NF-κB 信號(hào)通路，提高單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）分泌水平[12]。MCP-1 具有單核細(xì)胞趨化活性，能激活單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，使其胞漿 Ca2+濃度升高，產(chǎn)生和釋放超氧陰離子，引起炎癥因子 TNF-α、IL-6 水平增高。TNF-α、IL-6 又是合成血清 CRP 的重要調(diào)節(jié)因子。同一個(gè)體的 CRP 水平在 24h 內(nèi)相當(dāng)穩(wěn)定，可以用來(lái)反映炎癥反應(yīng)的嚴(yán)重程度[13]。NF-κB 和 NF-κB 介導(dǎo)的炎癥通路激活后，其下游產(chǎn)物 TNF-α、IL-6 等細(xì)胞因子又可作為重要的生物因子刺激活化 NF-κB，使整個(gè)炎癥反應(yīng)過(guò)程呈現(xiàn)聯(lián)級(jí)放大效應(yīng)。

目前，國(guó)內(nèi)外評(píng)估 OSAS 患者的炎癥反應(yīng)基因的研究進(jìn)展迅速，范斯坦醫(yī)學(xué)研究所報(bào)道，NF-κB 的 P50 亞組基因被敲除后導(dǎo)致間歇低氧及高脂喂養(yǎng)的大鼠不能產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化，由此可以證明 NF-κB 在間歇低氧及高脂飲食導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化中是一個(gè)重要的通路[14]。Zhang 等[15]發(fā)現(xiàn) IL-6 基因啟動(dòng)子區(qū)位點(diǎn)的基因多態(tài)性可影響其基因表達(dá)；Larkin 等[16]認(rèn)為 IL-6 在非裔美國(guó)人群有6種基因分型，同時(shí)發(fā)現(xiàn)無(wú)論是否調(diào)整體重指數(shù)，該基因編碼區(qū)的同義突變均可顯著降低 OSAS 的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。據(jù)此，該學(xué)者認(rèn)為無(wú)論肥胖與否，IL-6 基因多態(tài)性均可影響 OSAS 的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。Kaditis 等[17]發(fā)現(xiàn)相同人群中，IL-6 基因和 CRP 基因改變可增加 OSAS 的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。Riha 等[18]發(fā)現(xiàn) TNF-α 基因多態(tài)性的存在可導(dǎo)致循環(huán)血液中與 OSAS 發(fā)生相關(guān)的 TNF-α 水平升高，Bhushan 等[19]研究發(fā)現(xiàn) 印度 OSAS 患者 TNF-α A 等位基因的頻率較高，并且 TNF-α 與 OSAS 的嚴(yán)重程度直接相關(guān)。國(guó)內(nèi)亦有報(bào)道顯示，NF-κB、TNF-α、IL-8 及IL-6 在間歇低氧中的表達(dá)得到上調(diào)[20]。本研究檢測(cè)數(shù)據(jù)來(lái)自外周血，以 NF-κB 的炎癥通路為研究方向，得到的結(jié)果與上述遺傳學(xué)基因研究等一致，并有實(shí)際臨床意義。非肥胖 OSAS 組外周血 IL-6、TNF-α、CRP 較非OSAS 組明顯升高，并且中、重度 OSAS 患者上述指標(biāo)與AHI呈正相關(guān)，說(shuō)明在排除了肥胖因素后，NF-κB 下游炎癥因子的表達(dá)在 OSAS 人群明顯升高，并且與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。如能以此為依據(jù)對(duì)于部分不能進(jìn)行 PSG的患者，通過(guò)外周血的測(cè)定判斷 OSAS，并及早干預(yù)，可以在患者健康及經(jīng)濟(jì)影響方面有獲益。

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Expression of NF- κB downstream inflammatory factors in non-obese patients with obstruction sleep apnea syndrome

TANG Tingyu,LI Zhijun,YU Liling,et al.
Department of Respiratory Medicine,Zhejiang Hospital,Hangzhou 310013，China

2016-09-12）

（本文編輯：馬雯娜）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.7.2016-1407

310013 杭州，浙江醫(yī)院呼吸內(nèi)科

黃勍棟，E-mail：zjyyhqd@163.com