李煥明，鄭召芹，謝海鵬，黨安坤，徐淑華，蘭鄒然

（1. 諸城市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，山東諸城 262200；2. 諸城市龍都畜牧獸醫(yī)管理站，山東諸城 262200；3. 山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250022）

小反芻獸疫（PPR）又名小反芻獸假性牛瘟、口炎肺腸炎復(fù)合癥，是由小反芻獸疫病毒（PPRV）引起的一種急性病毒性傳染病，易感動(dòng)物主要是山羊、綿羊等小反芻動(dòng)物，臨床以高稽留熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征。自2013年底新疆暴發(fā)的PPR疫情在全國范圍內(nèi)大面積流行以來[1-2]，PPR已成為危害我國羊養(yǎng)殖業(yè)的主要疫病之一，給產(chǎn)業(yè)發(fā)展造成了較大經(jīng)濟(jì)損失。該病已被列為《國家動(dòng)物疫病防治中長期規(guī)劃（2010-2020年）》重點(diǎn)防范的外來動(dòng)物疫病病種，已列入國家強(qiáng)制免疫病種。山東省諸城市根據(jù)《國家中長期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2010-2020年）》和《山東省中長期動(dòng)物疫病防治規(guī)模（2013-2020年）》要求，從2014年開始實(shí)施了PPR強(qiáng)制免疫工作。為詳細(xì)掌握PPR免疫開展情況，評估免疫效果，2018年6月諸城市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室（以下簡稱本中心實(shí)驗(yàn)室）通過橫斷面調(diào)查技術(shù)，就PPR疫苗集中強(qiáng)制免疫效果進(jìn)行了評估。

1 材料與方法

1.1 相關(guān)定義

免疫合格樣品：經(jīng)競爭ELISA檢測為PPR抗體合格的羊血清樣品。

免疫不合格樣品：經(jīng)競爭ELISA檢測為PPR抗體不合格的羊血清樣品。

免疫合格場（村）：經(jīng)競爭ELISA檢測，PPR抗體合格樣品數(shù)大于等于檢測樣品總數(shù)70%的養(yǎng)羊場（村）。

免疫不合格場（村）：經(jīng)競爭ELISA檢測，PPR抗體合格樣品數(shù)小于檢測樣品總數(shù)70%的養(yǎng)羊場（村）。

1.2 研究群和抽樣單元

研究群：2018年6月，在全市16個(gè)鎮(zhèn)（街）的968個(gè)羊養(yǎng)殖場戶（1個(gè)自然村的所有小規(guī)模養(yǎng)羊戶存欄為1個(gè)場群）開展PPR免疫效果調(diào)查。

抽樣單元：規(guī)模場和自然村層面，抽樣單元為每個(gè)規(guī)模養(yǎng)羊場和每個(gè)自然村；場內(nèi)和村內(nèi)層面，抽樣單元為所有PPR免疫羊只。

1.3 抽樣方案

根據(jù)本地規(guī)模場和自然村的羊存欄情況，采用兩層、兩階段抽樣方法。

第1階段，先計(jì)算全市開展PPR免疫效果評估橫斷面調(diào)查所需的總抽樣場數(shù)，用估計(jì)流行率的方法[3]計(jì)算。按95%置信水平，92%的預(yù)期免疫合格率（根據(jù)以往的測量結(jié)果確定預(yù)期免疫合格率），10%的可接受誤差，全市968個(gè)場群，計(jì)算出應(yīng)抽樣場群為28個(gè)。然后按規(guī)模場和自然村兩層分配各自的抽樣場村數(shù)?？紤]到本市16個(gè)鎮(zhèn)（街）中，有2個(gè)沒有規(guī)模養(yǎng)羊場，最終確定本次調(diào)查抽樣場群為30個(gè)：14個(gè)有規(guī)模養(yǎng)羊場的鎮(zhèn)（街）各抽取1個(gè)規(guī)模場，16個(gè)鎮(zhèn)（街）各抽取1個(gè)自然村。規(guī)模養(yǎng)羊場和自然村的選擇均采用簡單隨機(jī)抽樣法來確定。抽樣數(shù)計(jì)算公式如下：

第2階段，計(jì)算規(guī)模場和自然村內(nèi)各自所需的抽樣羊只數(shù)量。規(guī)模場的羊只抽樣數(shù)量仍用估計(jì)流行率方法[3]計(jì)算，按95%置信水平，92%的預(yù)期免疫合格率（根據(jù)以往監(jiān)測結(jié)果確定預(yù)期免疫合格率），10%的可接受誤差，群體數(shù)量均按無窮大計(jì)算，則場群內(nèi)需抽取不少于28只PPR免疫羊只?？紤]到原有檢測免疫抗體時(shí)的抽樣習(xí)慣，每個(gè)規(guī)模場均抽取30份免疫羊血清，場內(nèi)隨機(jī)選羊，按系統(tǒng)隨機(jī)方法抽樣。在每個(gè)自然村，由于養(yǎng)殖量非常少，綜合全縣情況，最終確定每個(gè)村按便利原則，采集10只羊的血樣。

1.4 檢測方法

對采集的血清，用PPR競爭ELISA 抗體檢測試劑盒（農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所，批號20180515118），酶標(biāo)儀（MR_96A，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）進(jìn)行PPR抗體檢測。

1.5 數(shù)據(jù)分析

免疫合格率的計(jì)算：根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，群體免疫合格率＝（免疫合格場（村）/檢測場（村）總數(shù)）×100%；個(gè)體免疫合格率＝個(gè)體免疫合格樣品數(shù)/檢測樣品總數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 規(guī)模場

在14個(gè)規(guī)模羊場，共檢測免疫羊血清420份，檢出抗體合格412份，總抗體合格率為98.1%（412/420）；各規(guī)模場中，抗體合格率最低為83.3%，最高為100.0%，全部超過70%的國家標(biāo)準(zhǔn)，群體免疫合格率為100%（表1）。

2.2 自然村

抽檢的16個(gè)自然村涉及63個(gè)養(yǎng)羊戶，每個(gè)自然村分別抽檢羊血清樣品10份，總共抽檢160份。檢測結(jié)果顯示，自然村血清抗體免疫合格148份，總抗體合格率為92.5%（148/160）；在各自然村中，抗體合格率最低為60.0%，最高為100%，僅1個(gè)自然村（60.0%）稍低于國家規(guī)定的保護(hù)水平（70%），群體免疫合格率為93.8%（表2）。

表1 2018年上半年諸城市規(guī)模場PPR免疫抗體檢測結(jié)果

表2 2018年上半年諸城市自然村PPR免疫抗體檢測結(jié)果

3 討論與結(jié)論

針對羊規(guī)模場PPR免疫抗體水平，從場群水平來看，免疫效果與散養(yǎng)戶（自然村）差異不顯著（經(jīng)卡方檢驗(yàn)，P＝0.34＞0.05），群體免疫效果較好；從個(gè)體水平來看，規(guī)模場明顯優(yōu)于散養(yǎng)戶（自然村）。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，P＜0.01。總體來看，羊規(guī)模場比散養(yǎng)戶更加重視PPR免疫，其程序化免疫、自主免疫，以及采取的免疫措施、免疫步驟更加規(guī)范和有序。而散養(yǎng)戶由社區(qū)組織專業(yè)免疫注射隊(duì)伍統(tǒng)一開展免疫，免疫效果也有一定保障。

檢測發(fā)現(xiàn)，有1個(gè)自然村免疫合格率僅為60%，低于國家規(guī)定的保護(hù)水平，還有1個(gè)自然村免疫合格率為70%，剛達(dá)到國家規(guī)定的保護(hù)水平。造成少數(shù)自然村免疫保護(hù)水平稍低的原因可能有以下幾方面：一是少數(shù)防疫員在免疫時(shí)不夠認(rèn)真，造成漏免；二是可能采集了部分未免疫PPR疫苗的羊只；三是個(gè)別羊只在免疫時(shí)可能正處于免疫抑制狀態(tài)，免疫應(yīng)答能力低；四是PPR疫苗是100頭份包裝，稀釋后以社區(qū)為單元統(tǒng)一為散養(yǎng)戶開展免疫，這樣會(huì)導(dǎo)致疫苗稀釋時(shí)間延長，因而對免疫效果造成一定影響；五是檢測過程可能會(huì)出現(xiàn)操作失誤等。對于免疫水平較低的散養(yǎng)戶，又集中進(jìn)行了補(bǔ)免，以確保該病持續(xù)處于免疫合格狀態(tài)。

從免疫效果調(diào)查總體結(jié)果來看，諸城市轄區(qū)內(nèi)的羊PPR免疫抗體合格率均超過了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部（70%）、山東?。?0%）的要求，集中檢測的580份羊血清樣品合格率達(dá)到96.5%（560/580），說明諸城市PPR防控工作扎實(shí)有效?？贵w合格率的提高與國家高度重視以及各級政府免疫措施落實(shí)到位是分不開的。同時(shí)，規(guī)模養(yǎng)殖羊場、養(yǎng)殖戶的主動(dòng)防控意識逐漸增強(qiáng)，疫苗注射、消毒滅源、主動(dòng)監(jiān)測、定點(diǎn)監(jiān)測和檢疫監(jiān)督等防控措施落實(shí)到位。

結(jié)合當(dāng)前的PPR防控情況，根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《全國小反芻獸疫消滅計(jì)劃（2016-2020年）》要求，諸城市將繼續(xù)深入做好PPR監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查工作，科學(xué)評估疫情風(fēng)險(xiǎn)，達(dá)到PPR免疫無疫區(qū)標(biāo)準(zhǔn)，全面推進(jìn)PPR消滅計(jì)劃。