康麗 邱仁杰 王秀麗

?

沙苑子不同規(guī)格炮制品中沙苑子苷A的含量比較研究

康麗 邱仁杰 王秀麗

目的 建立沙苑子中沙苑子苷A的含量測定方法，考察沙苑子不同規(guī)格炮制品中沙苑子苷A的含量及其變化情況。方法 用鹽水、黃酒、米醋三種輔料，按照烘、炒、蒸三種不同工藝，炮制出9種不同規(guī)格沙苑子炮制品，采用高效液相色譜(HPLC)法測定不同規(guī)格沙苑子中沙苑子苷A的含量。結果 沙苑子苷A在0.0209 μg～0.4180 μg范圍內(nèi)線性關系良好(r=0.999 9，n=5)；平均加樣回收率為97.91%，RSD為1.48%，準確度符合要求。沙苑子生品、鹽水悶潤炒干品、鹽水悶潤烘干品、鹽水悶潤蒸后烘干品、黃酒悶潤炒干品、黃酒悶潤烘干品、黃酒悶潤蒸后烘干品、米醋悶潤炒干品、米醋悶潤烘干品、米醋悶潤蒸后烘干品中沙苑子苷A含量分別為0.98、0.89、0.85、1.16、0.88、0.90、1.09、0.85、0.87、1.18 mg/g。結論 建立的HPLC檢測方法快速準確、重復性好、專屬性強；鹽水、黃酒或米醋三種輔料悶潤炒干和悶潤烘干可導致沙苑子中沙苑子苷A含量下降，而輔料悶潤蒸后烘干則使得沙苑子苷A含量增加，尤以米醋悶潤蒸后烘干品中沙苑子苷A含量最高。

沙苑子； 炮制品； 沙苑子苷A； 高效液相色譜法； 含量測定

沙苑子，別名潼蒺藜、沙苑蒺藜，為豆科植物扁莖黃芪AstragaluscomplanatusR.Br.的干燥成熟種子，秋末冬初果實成熟尚未開裂時采割植株，曬干，打下種子，除去雜質，曬干，主產(chǎn)于陜西，內(nèi)蒙古、遼寧、河北、甘肅、吉林也有分布。本品始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味甘、性溫，歸肝、腎經(jīng)，具有溫補肝腎、固精、縮尿、明目等功效，用于腎虛腰痛、遺精早泄、白濁帶下、小便余瀝、眩暈目昏等病癥[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，沙苑子對血液流變學、免疫功能、血壓和腦血流量均有影響，同時還有解熱、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜 、耐寒、抗疲勞、抗炎和降脂保肝的作用[2]。

沙苑子主要含有氨基酸、多肽、蛋白質、黃酮類、酚類、鞣質、甾醇和三萜類、生物堿及礦質元素等[3]。有文獻報道，包括沙苑子苷A在內(nèi)的沙苑子總黃酮可降低血清膽固醇、甘油三酯，降低外周阻力使血壓尤其是舒張壓下降，降低SGPT并增加模型動物肝糖原等以保肝[4-6]，是沙苑子中主要的生物活性部位。2015年版《中華人民共和國藥典》(一部)以沙苑子苷作為沙苑子含量測定的指標成分，其中收載沙苑子炮制方法為凈制法(即除去雜質，洗凈，干燥)、鹽炙法[取凈沙苑子，照鹽水炙法(通則0213)炒干)][1]。其中鹽炙法是沙苑子最常用的炮制方法，具有悠久的歷史，但是也有酒炙、醋炙等炮制方法被廣泛應用卻并未被藥典收載。目前，沙苑子相關炮制研究屢有報道，有關沙苑子的沙苑子苷含量測定也多有研究成果出現(xiàn)，但這些相關炮制品研究大都停留在工藝優(yōu)化階段，且多以鹽炙法為主，炮制前后指標成分的含量變化研究少有報道。

本實驗分別用鹽水、黃酒、米醋三種輔料，按照烘、炒、蒸三種不同工藝，得9種不同規(guī)格沙苑子炮制品，采用高效液相色譜(HPLC)法測定沙苑子苷A的含量，通過比較沙苑子炮制前后沙苑子苷A含量變化以及不同炮制規(guī)格中的沙苑子苷A含量的差異，為沙苑子的質量標準建立和進一步的炮制研究提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

島津LC-20A高液相色譜儀，DAD檢測器，色譜柱：Kromasil C185 μm(4.6 mm×250 mm)；試劑：乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為超純水。FA1204B分析天平(上海精密儀器儀表有限公司)，101-1AB電熱鼓風干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司)，KQ-300VDB型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；沙苑子購于北京同仁堂望京店，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學中藥學院鑒定教研室王晶娟副教授鑒定為豆科植物扁莖黃芪AstragaluscomplanatusR. Br.的干燥成熟種子。對照品：沙苑子A對照品(批號：116183-66-5，供含量測定用，純度98.0%；上海詩丹德標準技術有限公司)。

2 方法與結果

2.1 炮制品制備

2.1.1 生品 取凈沙苑子50 g，粉碎，過60目篩，備用。

2.1.2 輔料悶潤炒干品 取凈沙苑子50 g，加入20 mL鹽水(含2%鹽)、黃酒或米醋至密閉容器內(nèi)，悶潤2小時，置炒鍋中，鍋底溫度120～130 ℃，炒制60秒，放涼，粉碎，過60目篩，備用。

2.1.3 輔料悶潤烘干品 取凈沙苑子50 g，加入20 mL鹽水(含2%鹽)、黃酒或米醋至密閉容器內(nèi)，悶潤2小時，置于烘箱內(nèi)，溫度為60℃，烘干，4小時后取出，放涼，粉碎，過60目篩，備用。

2.1.4 輔料悶潤蒸后烘干品 取凈沙苑子50 g，加入20 mL鹽水(含2%鹽)、黃酒或米醋至密閉容器內(nèi)，悶潤2小時，取出，置于蒸鍋中，圓氣后蒸60分鐘后取出，置于烘箱內(nèi)，溫度為60 ℃，烘干，4小時后取出，放涼，粉碎，過60目篩，備用[7]。

2.2 對照品溶液的制備

取沙苑子苷A對照品0.01045 g，精密稱定，置10 mL量瓶中，加50%乙醇至刻度，從中精密量取1 mL置于50 mL量瓶中配制成每1 mL含沙苑子苷A 0.0209 mg的對照品溶液[8]。

2.3 供試品制備

2.3.1 提取溶劑的選擇 試驗選用30%乙醇、60%乙醇、甲醇，作為提取溶劑進行比較，取本品(沙苑子生品)0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入相應溶劑25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用相應試劑補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。按上述色譜條件進行測定，結果60%乙醇提取效率較好，故選擇60%乙醇作為測定提取溶劑。見表1。

2.3.2 提取時間及提取方法的選擇 以60%乙醇為溶劑，分別采用超聲提取30、60分鐘、回流提取30分鐘、1小時、2小時。結果發(fā)現(xiàn)采用回流提取效果較好，選用60%乙醇回流提取1小時即可提取完全。見表2。

表1 不同溶劑提取后測定結果

表2 不同提取方法及時間測定結果

因此供試品制備方法為：取本品0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用60%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 色譜條件

色譜柱：Kromasil C185 μm(4.6 mm×250 mm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液 (20∶80)；檢測波長為266 nm；流速1.0 mL/min；柱溫：25℃。沙苑子苷A的保留時間在22分鐘左右，且沙苑子苷A與相鄰成分色譜峰的分離度都在1.5以上，理論板數(shù)按沙苑子苷A峰計算應不低于4000。分別精密吸取沙苑子苷A對照品溶液與供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，依上述色譜條件，測定，即得。對照品和供試品HPLC見圖1、2。

圖1 沙苑子苷A對照品HPLC圖

圖2 生沙苑子供試品HPLC圖

2.5 方法學考察

2.5.1 線性關系考察 分別精密吸取沙苑子苷A對照品溶液(濃度：0.0209 mg/mL)1、5、10、15、20 μL，注入高效液相色譜儀，按2.4項下色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，沙苑子苷A回歸方程為：Y=2.147×106X-3.779×103，相關系數(shù)r=0.9999(n=5)，結果表明沙苑子苷A在0.0209 μg～0.4180 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系。2.5.2 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一批供試品溶液(生沙苑子)，分別于配制后0、4、8、12、24小時，按2.4項下色譜條件測定，結果沙苑子苷A的RSD為1.64%，表明供試品溶液在配制后24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5.3 重復性試驗 取同一批沙苑子樣品，按照2.3項下方法制備供試品溶液，平行制備6份進行測定，結果沙苑子苷A的RSD分別為1.41%，表明方法重復性較好。

2.5.4 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的同一批樣品(生沙苑子)(沙苑子苷A含量0.984 mg/g)0.25 g，精密加入對照品溶液(沙苑子苷A濃度為0.010 45 mg/mL，純度98.0%)25 mL；按照2.3項下方法制備供試品溶液，各平行制備6份，依法測定，結果平均加樣回收率為97.91%，RSD為1.48%，表明本方法具有良好的準確度。2.6 樣品含量測定

取上述沙苑子生品及炮制品粉末各0.5 g，精密稱定，按照2.3項下方法制備供試品溶液，依據(jù)2.4項下色譜條件測定沙苑子苷A的含量，每個樣品皆平行測定3次，以外標一點法計算含量，其平均值和RSD，結果見表3。

表3 樣品中沙苑子苷A含量測定結果(n=3)

3 討論

研究表明，沙苑子總黃酮是沙苑子中主要的生物活性部位，而沙苑子苷A則是含量較高的黃酮類成分，且有研究發(fā)現(xiàn)，沙苑子苷A有較明顯的抗血小板聚集作用，表明其為沙苑子活性成分之一，故選擇黃酮類成分中含量較高的沙苑子苷A作為沙苑子的指標性成分進行含量測定。沙苑子炮制品色譜圖與生沙苑子基本相同，在沙苑子苷A峰的前后均無新的干擾峰出現(xiàn)，不影響測定。

試驗所用炮制品均由沙苑子原藥材加工制成。測定比較后發(fā)現(xiàn)，輔料[鹽水(含2%鹽)、黃酒或米醋]悶潤炒干品和輔料悶潤烘干品中沙苑子苷A的含量較沙苑子生品有所下降，可能因為炒制過程中溫度較高，沙苑子苷A(熔點278℃)受到破壞。而輔料悶潤蒸后烘干品中沙苑子苷A的含量較沙苑子生品有所增加，可能是因為在炮制加熱過程中酶解沙苑子苷A的自生酶被破壞，即“殺酶保苷”原理。而此酶在何種條件下完全失效以保苷以及何種條件下此酶活性最強而使沙苑子苷A受到破壞，尚有待進一步的研究。本次試驗成功建立沙苑子中沙苑子苷A的含量測定方法，該方法快速準確、重復性好、專屬性強，可用于沙苑子的質量控制，并為其進一步的炮制研究奠定了基礎。

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[S]. 北京：化學工業(yè)出版社，2015：183-184.

[2] 李昌勤. 沙苑子化學成分及藥理作用研究進展[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2000，11(11)：1041-1042.

[3] 劉奇梅. 沙苑子有效化學成分的提取分離及其藥理活性的研究[D]. 廣州：華南理工大學，2013.

[4] 謝梅林，朱路佳，劉春宇，等. 沙苑子提取物調(diào)脂和保肝作用的實驗研究[J]. 中國實驗方劑學雜志，2003，9(6)：27-29.

[5] 薛冰，李景新，陳連璧. 沙苑子總黃酮對SHR的降壓及血流動力學影響[J]. 中國中藥雜志，2002，27(11)：855-858.

[6] 張建軍，閆興麗，張玉杰，等. HPLC測定沙苑子中沙苑子苷A的含量[J]. 中國中藥雜志，2005，30(8)：600-602.

[7] 孫建中，張懷，賈天柱，等. 沙苑子及其炮制品中沙苑子A和鼠李檸檬素的含量測定研究[J]. 中成藥，2010，32(8)：1368-1371.

[8] 賀成，唐曉晶，陳玉武，等. 高效液相色譜法測定沙苑子及其炮制品中沙苑子苷的含量[J]. 中國中醫(yī)藥信息雜志，2010，17(3)：49-51.

(本文編輯： 董歷華)

Comparative study on the content of complanatuside A in different specifications of astragali complanati semen

KANGLi，QIURenjie，WANGXiuli.

YulinHospitaloftraditionalChinesemedicine,Yulin719000，China

WANGXiuli，E-mail：Lnwangxiuli@163.com

Objective To establish a method of content determination of complanatuside A in astragali complanati semen, and study the contents and changes of different specifications. Methods Saline water, rice-vinegar, rice-wine was used as excipients, according to the three different processes of baking, frying and steaming, the astragali complanati semen was made up of 9 kinds of products with different specifications, then the content of complanatuside A was determined by HPLC. Results Complanatuside A showed a good linearity relationship in the range of 0.0209 μg～0.4180 μg (r=0.999 9,n=5). The average recovery was 97.91%, RSD was 1.48%, the accuracy met the requirements. The contents of complanatuside A in not-processed product, roasting product after saline water moistening, drying product after saline water moistening, roasting product after saline water moistening and steaming, roasting product after rice-wine moistening, drying product after rice-wine moistening, roasting product after rice-wine moistening and steaming product, roasting product after rice-vinegar moistening, drying product after rice-vinegar moistening and drying product after rice-vinegar moistening and steaming, the content of complanatuside A was 0.98, 0.89, 0.85, 1.16, 0.88, 0.90, 1.09, 0.85, 0.87, 1.18 mg/g respectively. Conclusion The established HPLC detection method is fast, accurate, repeatable and strong specificity; roasting or drying after moistening with saline water, rice-vinegar or rice-wine can reduce the content of complanatuside A in astragali complanati semen, however the drying after moistening and steaming with excipients can increase the content of complanatoside A, the content of drying product after rice-vinegar moistening and steaming is highest.

astragali complanati semen; Processed products; Complanatoside A; HPLC; Content determination

陜西省中醫(yī)管理局中醫(yī)藥科研課題(15-ZY041)；國家中醫(yī)藥管理局全國中藥特色技術傳承人才培訓項目

719000 陜西省榆林市中醫(yī)醫(yī)院藥學部(康麗)；北京中醫(yī)藥大學中藥學院(邱仁杰、王秀麗)

康麗(1972- )，女，本科，副主任，中藥師。研究方向：中藥鑒定。E-mail：1186825832@qq.com

王秀麗(1978- )，女，博士，副研究員。研究方向：中藥復方及新藥研發(fā)。E-mail：Lnwangxiuli@163.com

R284

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2017.06.009

2017-02-22)