施華球，謝瑞蓮，鄢俊，陳悅，盧增紅，吳隆秋，衷敬華

(江西贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院腫瘤科，江西 贛州 341000)

血清髓鞘堿性蛋白在肺癌腦轉(zhuǎn)移患者中的表達及臨床意義

施華球，謝瑞蓮，鄢俊，陳悅，盧增紅，吳隆秋，衷敬華

(江西贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院腫瘤科，江西 贛州 341000)

目的 探討血清MBP蛋白在肺癌腦轉(zhuǎn)移早期診斷的輔助作用和對生存預后的影響。方法采用ELISA法檢測肺癌腦轉(zhuǎn)移組76（例）、肺癌未腦轉(zhuǎn)移組（100例）、肺部良性疾病組（100例）、健康對照組（100例）的血清MBP蛋白表達水平，比較上述各組、肺癌腦轉(zhuǎn)移前后、不同大小的腦轉(zhuǎn)移灶亞組的血清MBP表達差異，分析血清MBP表達與肺癌腦轉(zhuǎn)移生存預后的關(guān)系。結(jié)果肺癌腦轉(zhuǎn)移組血清MBP水平為(4.389±0.516）g/L，顯著高于肺癌未腦轉(zhuǎn)移組的（1.738±0.218）g/L、良性肺疾病組的（1.659±0.359）g/L和健康對照組的（1.629± 0.591)g/L，差異均有統(tǒng)計學意義（P=0.00O1)；腦轉(zhuǎn)移前后血清MBP水平分別為(4.863±0.475)g/L和(2.076±0.248)g/L，兩組血清MBP比較具有統(tǒng)計學差異（t=21.129，P=0.0001）；腦轉(zhuǎn)移灶≤1 cm、1～3 cm、＞3 cm血清MBP表達水平無統(tǒng)計學差異（P=0.335）；肺癌腦轉(zhuǎn)移組在血清MBP＞4.5 g/L和≤4.5 g/L亞組的總生存時間無統(tǒng)計學差異（P=0.945）。肺癌腦轉(zhuǎn)移組的血清MBP在性別、年齡、病理類型和轉(zhuǎn)移部位表達無統(tǒng)計學差異（P=0.154，P=0.586，P=0.501，P=0.239）。結(jié)論血清MBP表達水平在肺癌腦轉(zhuǎn)移顯著升高，可能作為肺癌腦轉(zhuǎn)移早期診斷的輔助指標之一，但需要更大樣本多中心研究進一步驗證。

MBP蛋白；肺癌；腦轉(zhuǎn)移；診斷

肺癌是全球發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，近年來我國肺癌的發(fā)病率呈持續(xù)上升趨勢，其中肺癌腦轉(zhuǎn)移是肺癌治療失敗及肺癌患者致死的重要原因之一。究其原因是肺癌腦轉(zhuǎn)移主要依據(jù)影像學診斷，而早期較小病灶影像學上顯示率較低，容易延誤診斷時間，同時大部分肺癌腦轉(zhuǎn)移患者無有效抗腫瘤藥物治療。因此目前廣大學者致力于進一步探索肺癌腦轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移機制，積極尋找特異性、有效的預測指標和潛在治療靶點。

髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein，MBP)在髓鞘形成和腦分化發(fā)育過程中起著重要作用，當中樞神經(jīng)系統(tǒng)遭受損傷或患某種急性疾病時，血腦屏障受到破壞或通透性發(fā)生改變，血清中MBP的含量會明顯增高。有研究表明血清MBP含量測定有助于腦實質(zhì)破壞性病變和功能性疾病的鑒別[1]。本研究通過檢測肺癌腦轉(zhuǎn)移患者的血清MBP水平，探討血清MBP在肺癌腦轉(zhuǎn)移的早期診斷價值和預后意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年1月～2014年6月在本院病理學確診肺癌，并且行頭顱CT或核磁共振檢查，分為肺癌腦轉(zhuǎn)移組和肺癌未腦轉(zhuǎn)移組。肺癌腦轉(zhuǎn)移組患者共76例，均經(jīng)頭顱CT或核磁共振檢查證實腦轉(zhuǎn)移，男54例，女22例，年齡35～81歲，中位年齡53歲，腺癌42例，鱗癌24例，小細胞癌10例，其中單純大腦轉(zhuǎn)移50例，單純小腦轉(zhuǎn)移9例，大小腦混合轉(zhuǎn)移14例，合并腦膜轉(zhuǎn)移3例；肺癌未腦轉(zhuǎn)移組患者共100例，均經(jīng)頭顱CT或核磁共振檢查排除腦轉(zhuǎn)移，男70例，女22例，年齡29～79歲，中位年齡57歲，腺癌50例，鱗癌41例，小細胞肺癌9例。同時收集同期肺部良性疾病患者100例，排除肺性腦病、周圍性呼吸衰竭患者，其中肺炎88例，肺結(jié)核6例，炎性假瘤10例，錯構(gòu)瘤2例，男58例，女42例，年齡17～84歲，中位年齡42歲。由我院健康體檢中心提供健康人員100例設立為對照組，男59例，女41例，年齡18～68歲，中位年齡38歲。所有入選患者或健康對照均排除既往或目前存在中樞性系統(tǒng)疾病或損傷，并入組前均簽署知情同意書，并且本研究已獲得本院醫(yī)學倫理委員會審批通過。

1.2 MBP檢測方法 抽取待檢者空腹靜脈血5 mL，30 min自然凝固，在轉(zhuǎn)速2 000～3 000 r/min的速度下離心20 min，取分離的血清，放至-70℃冰箱儲存。MBP檢測所有操作步驟嚴格按試劑和儀器說明書進行，對于超過試劑線性范圍的樣本用試劑盒內(nèi)的樣本稀釋液稀釋后重測，其結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。血清MBP采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）在全自動酶檢測儀系統(tǒng)測定，人MBP ELISA定量試劑盒購自南京森貝伽生物科技有限公司。

1.3 臨床隨訪 對于肺癌腦轉(zhuǎn)移和肺癌未腦轉(zhuǎn)移兩組病例，入組后每3個月全面復查，包括頭顱CT/MRI、胸CT、腹部B超以及全身ECT，有條件可全身PET/CT檢查，評價病情，隨訪18個月，記錄總生存期（Overall survival,OS），定義是指從隨機化開始至因任何原因引起死亡的時間。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計分析。各組血清MBP檢測數(shù)據(jù)采用“±s”差表示，采用單因素方差分析（oneway ANOVA）比較各組數(shù)據(jù)的差異性，方差齊時采用LSD法比較組間數(shù)據(jù)的差異性，反之方差不齊時采用Tamhane法比較組間數(shù)據(jù)的差異性；采用配對t檢驗比較配對數(shù)據(jù)的差異；采用Kaplan-Meier法分析各組生存情況。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清MBP表達的比較 肺癌腦轉(zhuǎn)移組血清MBP水平為（4.389±0.516）g/L，顯著高于肺癌未腦轉(zhuǎn)移組的（1.738±0.218）g／L、良性肺疾病組的（1.659±0.359）g/L和健康對照組的（1.629±0.591）g/L，差異均有統(tǒng)計學意義（P=0.00O1)；肺癌未腦轉(zhuǎn)移組與良性疾病組肺癌組、健康對照組血清MBP水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.316和P= 0.386）；良性肺疾病組與健康對照組血清MBP水平比較也無統(tǒng)計學差異（P=0.998)。

2.2 肺癌腦轉(zhuǎn)移前后血清MBP表達的比較 在肺癌組患者入組后20例出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移，腦轉(zhuǎn)移前后血清MBP水平分別為（4.863±0.475）g/L和（2.076±0.248）g/L，兩組血清MBP比較具有統(tǒng)計學差異（t=21.129，P=0.0001）。

2.3 血清MBP在肺癌腦轉(zhuǎn)移中性別、年齡、病理類型、轉(zhuǎn)移部位的表達 血清MBP在男性與女性組比較無顯著統(tǒng)計學差異（t=-0.379，F(xiàn)=2.071，P=0.154）；MBP表達在≤中位年齡53歲與＞中位年齡53歲兩組比較無統(tǒng)計學差異（t=0.533, F=0.299,P=0.586）；在腺癌、鱗癌、小細胞癌中MBP表達比較也顯示無統(tǒng)計學差異（P=0.501）；在單純大腦轉(zhuǎn)移、單純小腦轉(zhuǎn)移、混合轉(zhuǎn)移、腦膜轉(zhuǎn)移部位中血清MBP表達比較仍顯示無統(tǒng)計學差異（P=0.239）。

2.4 腦轉(zhuǎn)移灶大小與血清MBP表達的關(guān)系 在肺癌腦轉(zhuǎn)移組中腦轉(zhuǎn)移灶≤1 cm、1～3 cm、＞3 cm 3組血清MBP表達水平分別是（4.195±0.689）g/L、（4.414±0.628）g/L、4.402± 0.345）g/L，比較3組患者血清MBP表達無統(tǒng)計學差異（P=0.335）。

2.5 血清MBP表達與肺癌腦轉(zhuǎn)移患者生存預后的關(guān)系以血清MBP為4.5 g/L為臨界值，記錄肺癌腦轉(zhuǎn)移血清MBP＞4.5 g/L和≤4.5 g/L亞組的生存情況，比較兩亞組的總生存時間無統(tǒng)計學差異（P=0.945）。見圖1。

圖1 肺癌腦轉(zhuǎn)移患者不同血清MBP表達的生存（OS）情況Figure 1 Survival rate(OS)of different serum MBP expression in lung cancer patients with brain metastases

3 討論

肺癌約有23%的肺癌以腦部為首發(fā)轉(zhuǎn)移部位，并且有將大概50%的肺癌在不同期別轉(zhuǎn)移至腦部，同時有一半左右的腦轉(zhuǎn)移瘤來源于肺癌[2-3]。肺癌腦轉(zhuǎn)移在肺腺癌最多見。發(fā)生腦轉(zhuǎn)移者自然病程為4周，雖然接受了化療、放療以及各種綜合治療，但是中位生存期僅為3～10個月[4]，結(jié)果仍然不盡人意。而其主要原因就是肺癌腦轉(zhuǎn)移早期診斷困難，并且大部分肺癌腦轉(zhuǎn)移患者無有效藥物治療。所以積極尋找早期診斷肺癌腦轉(zhuǎn)移的指標或方法是目前研究熱點。

MBP是脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)少突細胞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)雪旺細胞合成的一種強堿性膜蛋白，含有多種堿性氨基酸。研究表明：MBP在髓鞘形成和腦分化發(fā)育過程中起著重要作用，當中樞神經(jīng)系統(tǒng)遭受損傷或患某種急性疾病時，血腦屏障受到破壞或通透性發(fā)生改變，血清中MBP的含量會明顯增高。國內(nèi)外學者對腦外傷、腦血管疾病、多發(fā)性硬化癥、腦炎和腦膜炎等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病進行MBP含量測定，認為髓鞘蛋白可釋放到腦脊液或血液，并可作為判斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)破壞程度的指標，對判斷病情嚴重程度和預后有重要意義[5-7]。

當肺癌腦轉(zhuǎn)移后，因腦血流和代謝變化、腦水腫形成等引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)繼發(fā)性損害，加重了血一腦屏障功能的損傷，可能使血中MBP持續(xù)保持在較高水平。研究發(fā)現(xiàn)免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)MBP能在人肺腺癌細胞株A549中表達，說明MBP與人肺腺癌細胞株A549生長有關(guān)，因此推測肺癌細胞可能發(fā)生了雪旺細胞分化，具有嗜神經(jīng)組織特性，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有很好的親和力，成為肺癌轉(zhuǎn)移的原因之一[8]。本研究發(fā)現(xiàn)肺癌腦轉(zhuǎn)移組的血清MBP水平明顯高于未轉(zhuǎn)移組、肺部良性疾病組和健康對照組（P＜0.05），并且在腦轉(zhuǎn)移前后配對比較中也證實此點，但是血清MBP表達與腦轉(zhuǎn)移灶大小、生存預后無相關(guān)性，因此檢測血清MBP表達水平有望作為肺癌腦轉(zhuǎn)移的預測因子之一。徐春華等[9]發(fā)現(xiàn)肺癌腦轉(zhuǎn)移組的血清MBP的水平顯著高于肺癌組、良性肺疾病組和健康對照組，但肺癌組與良性肺疾病組和健康對照組的差異均無統(tǒng)計學意義，提示血清MBP在肺癌腦轉(zhuǎn)移中有一定的特異性，并且不受肺癌原發(fā)灶組織的影響。同時根據(jù)瘤體大小分組檢測血清MBP，結(jié)果提示血清MBP水平與肺癌腦轉(zhuǎn)移瘤體大小無關(guān)。最終認為血清MBP水平對于診斷肺癌腦轉(zhuǎn)移有重要的提示作用，有望成為肺癌腦轉(zhuǎn)移的輔助診斷指標之一。2015年Liu等[10]也證實血清MBP表達水平與肺癌腦轉(zhuǎn)移相關(guān)，與腦轉(zhuǎn)移灶大小無關(guān)。但是本研究顯示肺癌腦轉(zhuǎn)移血清MBP表達水平在患者性別、年齡、病理類型以及轉(zhuǎn)移部位無顯著表達差異。

因此，本研究初步證實肺癌腦轉(zhuǎn)移患者的血清MBP表達水平明顯升高，可能作為肺癌腦轉(zhuǎn)移的早期輔助診斷指標之一，但是需要更大樣本和多中心研究進一步驗證此結(jié)論。

[1]劉和錄，韓杰輝，竇宇紅，等．腦外傷患者髓鞘堿性蛋白和腦源性神經(jīng)生長因子檢測的價值[J]．國際檢驗醫(yī)學雜志，201I，32(13)：1466-1468．

[2]GasparLE，ChanskyK，AlbainKS，eta1．Timefrom treatment to subsequent diagnosis of brain metastases stageⅢ non small-cell cancer：a retrospective review by the Southwest Oncology Group[J]．J Clin Oncol，2005，23：2955-2961．

[3]DSKong，JILee，DHNam，eta1．Prognosisofnon．small cell lung cancer with synchronous brain metastases treated with gamma knife radiosurgery[J]．Korean Mad Sci，2006，21(3)：527-532．

[4]方美玉，馬勝林，王升曄，等，肺癌腦轉(zhuǎn)移214例生存及預后分析[J].中華神經(jīng)科雜志，2008，41（12）：831-834.

[5]MinY，KristiansenK，BoggsJM，eta1．Interaction forces and adhesion of supported myelin lipid bilayers modulated by myelin basic protein[J]．Prec Natl Acad Sci USA，2009，106(9)：3154-3159．

[6]D Aversa TG,Eugenim EA,Lope L,et al.Myelin basic protein induces inflammatory mediators from primary human endothelial cells and blood-brainbarrier disruption:implications for the pathogenesis of multiple sclerosis[J].Neuroapathol Appl Neurobiol,2013, 39(3):270-283.

[7]Brouns R,De Vil B,Cras P,et al. Neurobiochemical markers of brain damage in cerebrospinal fluid of acute ischemic stroke patients[J].Clin Chem,2010,56 (3):451-458.

[8]袁兵，譚燕，王盛蘭，等.髓鞘堿性蛋白在肺腺癌A549細胞表達及其功能意義[J].昆明醫(yī)學院學報2011，32(7)：52-54.

[9]徐春華,于力克,張宇，等，肺癌腦轉(zhuǎn)移患者血清髓鞘堿性蛋白水平變化及其臨床意義[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2013，36（1）：56-58.

[10]Liu W，Zhao J,Wei Y.Association between brain metastasis from lung cancer and the serum level of myelin basic protein[J].Experimental&Therapeutic Medicine,2015,9(3):1048-1050.

Expression and clinical significance of serum myelin basic protein in patients with brain metastases of lung cancer

Shi Hua-qiu,Xie Rui-lian,Yan Jun,Chen Yue,Lu Zeng-hong,Wu Long-qiu,Zhong Jing-hua
(Department of Oncology,the First Affiliated Hospital of Gannan Medical College,Ganzhou,Jiangxi,341000,China)

Objective To investigate the role of serum MBP protein in early diagnosis of lung cancer with brain metastasis and its effect on prognosis.MethodsELISA method was used to detect the expression level of serum MBP protein in 76 cases of lung cancer with brain metastasis group(Lung Cancer Group)(n=100),lung benign disease group(n=100)and healthy control group(n=100),The expression of MBP in the brain metastases of different groups before and after metastasis was compared，The relationship between the expression of serum MBP and the prognosis of lung cancer with brain metastasis was analyzed.ResultsThe level of serum MBP in lung cancer brain metastasis group was(4.389±0.516)g/L,was significantly higher than that of the lung cancer without brain metastasis group(1.738±0.218)g／L,Benign lung disease group(1.659±0.359)g/ L and healthy control group of(1.629±0.591)g/L,the difference was statistically significant(P=0.0001),The serum MBP levels before and after brain metastases were(4.863±0.475)g/L and(2.076±0.248)g/L,respectively.The serum MBP levels of the two groups were statistically different(t= 21.129,P=0.0001)，Brain metastases less than 1cm,1～3 cm,3 cm,three groups of serum MBP expression level was not statistically significant(P= 0.335)，Survival time was no significant difference(P=0.945)in serum MBP in Lung cancer with brain metastasis group the total between 4.5g/L and less than 4.5g/L subgroup.There was no significant difference in the expression of serum MBP in patients with lung cancer brain metastasis in sex, age,pathological type and metastasis site(P=0.154,P=0.586,P=0.501,P=0.239).ConclusionThe expression level of MBP in lung cancer was significantly increased,which may be used as an auxiliary index for early diagnosis of lung cancer with brain metastasis.But it need a larger sample of multicenter studies to further validation.

MBP protein;Lung cancer;Brain metastasis;Diagnosis

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.15.003

江西省衛(wèi)生廳科技計劃（20143129）

謝瑞蓮，E-mail：xieruilian163@163.com