尚曙玉++胡曉鳳++李靜++秦俊蓮

[摘要]目的 觀察雙黃連注射液和雙黃連凍干粉針劑對家兔離體紅細胞溶血作用的影響。方法 健康家兔心臟取血20 ml，制備2%紅細胞混懸液，分別與雙黃連注射液、雙黃連凍干粉針劑、0.9%氯化鈉注射液共同溫育，進行體外溶血試驗，并通過分光光度計檢測其吸光度，觀察3 h內(nèi)紅細胞的溶血率。結(jié)果 濃度為0.06、0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml的雙黃連注射液的溶血率分別為8.39%、21.34%、40.98%、50.36%、67.68%，與0.9%氯化鈉注射液組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。濃度為0.06、0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml雙黃連凍干粉針劑的溶血率為2.15%、5.23%、7.31%、9.59%、13.35%，在濃度為0.3 g/ml時與0.9%氯化鈉注射液組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。在濃度為0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml時，雙黃連注射液與雙黃連凍干粉針劑組的溶血率相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 雙黃連粉針劑與雙黃連注射液相比，對家兔離體紅細胞溶血作用小。

[關(guān)鍵詞]雙黃連注射液；雙黃連凍干粉針劑；溶血試驗

[中圖分類號] R332 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）04（c）-0147-03

[Abstract]Objective To observe the influence of Shuanghuanglian Injection and Shuanghuanglian Lyophilized Power Injection on hemolytic effect in rabbits′red blood cell （RBC） in vitro.Methods The blood samples were collected from healthy rabbits by 20 ml，and the red blood cell suspension of 2% was prepared，and it with Shuanghuanglian Injection，Shuanghuanglian Lyophilized Power Injection and Sodium Chloride Injection of 0.9% were co-incubated，and hemolysis test was carried out in vitro，and the absorbance was detected by spectrophotometer.The hemolysis rate of RBC in 3 h was observed.Results The hemolysis rate of Shuanghuanglian Injection with concentration of 0.06，0.12，0.18，0.24，0.3 g/ml was 8.39%，21.34%，40.98%，50.36%，67.68% respectively，and there was a statistical difference between two groups compared with Sodium Chloride Injection of 0.9% （P<0.05）.The hemolysis rate of Shuanghuanglian Lyophilized Power Injection with concentration of 0.06，0.12，0.18，0.24，0.3 g/ml was 2.15%，5.23%，7.31%，9.59%，13.35% respectively，and there was a statistical difference when the concentration was 0.3 g/ml compared with Sodium Chloride Injection of 0.9% （P<0.05）.When the concentration was 0.12，0.18，0.24，0.3 g/ml，there was a statistical difference of hemolysis rate between Shuanghuanglian Injection and Shuanghuanglian Lyophilized Power Injection （P<0.05）.Conclusion The influence of Shuanghuanglian Lyophilized Power Injection on hemolytic effect is small compared with Shuanghuanglian Injection.

[Key words]Shuanghuanglian Injection；Shuanghuanglian Lyophilized Powder Injection；Hemolysis test

雙黃連注射液和雙黃連凍干粉針劑是中藥金銀花、黃芩、連翹等藥物的提取物制劑，具有清熱解毒、抑菌、抗炎、抗病毒、增強機體免疫功能等藥理作用，對流行性感冒病毒、呼吸道合胞病毒等感染具有良好作用。因此，在臨床上常用于外感風(fēng)熱所引發(fā)的發(fā)熱、咳嗽、咽喉腫痛、上呼吸道感染、輕型肺炎、急性腭扁桃體炎等疾病的治療。近年，不同注射劑型雙黃連在臨床被廣泛應(yīng)用，隨著用藥人群的增加，其不良反應(yīng)報道也日益增多，主要表現(xiàn)在過敏反應(yīng)、消化系統(tǒng)反應(yīng)和靜脈炎等。本文旨在通過對雙黃連注射液和雙黃連凍干粉針劑體外溶血性實驗的觀察，從而為其臨床安全應(yīng)用奠定實驗基礎(chǔ)[1-6]。

1材料與方法

1.1 藥品與試劑

雙黃連注射液（山西省芮城科龍藥業(yè)有限公司，10 ml∶15 g，040196120）；雙黃連凍干粉針劑（哈藥集團中藥二廠，600 mg∶10 g，Z10940044）；0.9%氯化鈉注射液（山東齊都藥業(yè)有限公司，H37020766）。

1.2 實驗動物

家兔36只，體重（2.0±0.5）kg，雌雄不限，由河南省實驗動物中心提供（合格證號42010000001806）。

1.3 實驗儀器

721分光光度計，離心機，顯微鏡等。

1.4 2%紅細胞混懸液的制備

健康家兔36只，每只均采用心臟穿刺取血10～20 ml，將血置于三角瓶中，用玻璃棒攪拌10 min，除去纖維蛋白原，使之成為脫纖血液。然后將脫纖血液移入離心管內(nèi)，并向其中加入約10倍量的0.9%氯化鈉注射液，混勻，用離心機以1200 r/min離心15 min，棄上清液，取沉淀的紅細胞用0.9% 氯化鈉注射液反復(fù)洗滌，再次經(jīng)離心機以1200 r/min離心15 min，離心3次。至上清液無色后，取2 ml紅細胞，加入0.9%氯化鈉注射液至100 ml，制成2%紅細胞混懸液[7-16]。

1.5 溶血試驗的方法

取無菌潔凈干燥試管7支，置于試管架上并編號。1～5號試管為受試藥物管，分別加入濃度為1.5 g/ml雙黃連注射液或雙黃連凍干粉針劑0.1～0.5 ml；6號試管為陰性對照管，不加藥液，加入0.9% 氯化鈉注射液，7號試管為陽性對照管，加入蒸餾水（表1）。按表1所示，依次加入0.9% 氯化鈉注射液或蒸餾水，雙黃連注射液或雙黃連凍干粉針劑，2%紅細胞混懸液。輕輕混勻，置于恒溫水浴箱中溫育，溫度（37±0.5）℃，分別于0、15、30、60、120、180 min，觀察各試管是否存在溶血和凝聚現(xiàn)象。

1.6 觀測指標

1.6.1 肉眼觀察 試管中的溶液呈澄清紅色，表明有溶血發(fā)生；若紅細胞全部下沉，上清液無色澄清，表明無溶血發(fā)生；若溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀，振搖后不分散，表明有紅細胞凝聚發(fā)生。

1.6.2 分光光度法 測定各試管溶液的吸光度并計算溶血率，根據(jù)紅細胞破裂釋放出的血紅素在575 nm波長處有最大吸收，取所有各管的上清液置于比色器中，測定各管吸光度并計算溶血率。溶血率>5%表明有溶血發(fā)生。計算方法：樣品吸光度=試樣管液吸光度-底色管液吸光度。溶血率=（樣品吸光度-陰性對照液吸光度）/（陽性對照液吸光度-陰性對照液吸光度）×100%。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 12.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，組內(nèi)比較采用One-Way ANOVA分析，組間比較采用配對樣本t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肉眼觀察結(jié)果

雙黃連注射液和雙黃連凍干粉針劑各試管內(nèi)溶液在2 h內(nèi)上清液均為無色澄清，3 h后觀察發(fā)現(xiàn)雙黃連注射液的2～5試管內(nèi)溶液，上層澄清紅色，下層有少許沉淀。而雙黃連凍干粉針劑在3 h后各試管內(nèi)溶液上清液依然為無色澄清。6號陰性對照管內(nèi)溶液3小時上清液均為無色澄清。7號陽性對照管各時間內(nèi)上清液均為澄清紅色，完全溶血。

2.2 分光光度法測定的溶血率結(jié)果

從表2可以看出，雙黃連注射液和雙黃連凍干粉針劑的溶血率均呈濃度依賴性的升高。雙黃連注射液在濃度為0.06、0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml時，均引起離體家兔紅細胞溶血，溶血率>5%，其中濃度為0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml時，其溶血率與陰性對照組的溶血率相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

雙黃連凍干粉針劑在濃度為0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml時，均引起離體家兔紅細胞溶血，溶血率>5%，其中濃度為0.3 g/ml時其溶血液與陰性對照組的溶血率相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

在濃度為0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml時，雙黃連注射液與雙黃連凍干粉針劑相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

雙黃連注射液和雙黃連凍干粉針劑具有清熱解毒、抑菌、抗炎、抗病毒、增強機體免疫功能等藥理作用，因此，在臨床上廣泛用于由流行性感冒、呼吸道合胞病毒等感染所引起的發(fā)熱、咳嗽、咽喉腫痛等癥狀的治療。但有關(guān)這兩種藥物的安全性報道卻較少。

通過試管法，肉眼觀察有無溶血時發(fā)現(xiàn)，濃度為0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml的雙黃連注射液在3 h后出現(xiàn)了溶血和（或）凝聚現(xiàn)象，而濃度為0.06、0.12、0.18、0.24 g/ml的雙黃連凍干粉針劑在3 h后未發(fā)生溶血和凝聚現(xiàn)象。通過分光光度法測定各試管液的吸光度值，計算雙黃連注射液和雙黃連凍干粉針劑的溶血率，結(jié)果顯示兩者的溶血率均呈濃度依賴性升高。雙黃連注射液的溶血率在濃度為0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml時與陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），致家兔離體紅細胞破裂溶血；而雙黃連凍干粉針劑的溶血率在濃度為0.3 g/ml時與陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），也致離體家兔紅細胞破裂溶血，但雙黃連凍干粉針劑的溶血率均未超過20%。雙黃連注射液與雙黃連凍干粉針劑在濃度為0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml時的溶血率相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），因此，依據(jù)《藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[6]中分光光度法測定溶血試驗的參考標準，當溶血率>5%時，不宜用于靜脈注射，由實驗結(jié)果可看出雙黃連注射液可引起紅細胞破裂溶血，故在臨床中治療疾病時不建議采用血管內(nèi)給藥，而雙黃連凍干粉針劑未見明顯紅細胞破裂溶血，故在臨床中治療疾病時可采用血管內(nèi)給藥。但本實驗只觀察了雙黃連的這兩種注射劑型的溶血性實驗，而未對其過敏性、血管刺激性等其他指標進行觀測，故其安全性還需要進一步評價。

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（收稿日期：2017-01-05 本文編輯：許俊琴）