翟軍厚　陳鳳軍

[摘要] 目的 探討化療與生物免疫療法治療胃癌的療效及對循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）的影響。 方法 將80例胃癌患者分為對照組與觀察組，對照組僅采用化療，觀察組聯(lián)合DC-CIK生物免疫療法進(jìn)行治療。比較兩組的療效及兩組治療前后的CTC水平。 結(jié)果 （1）觀察組治療后的臨床總緩解率顯著高于對照組（P<0.05）；（2）觀察組治療后的CTC檢出率均顯著低于治療前及對照組（P<0.05）。 結(jié)論 化療聯(lián)合生物免疫治療胃癌臨床療效顯著，可有效降低CTC水平，值得臨床推廣和應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞] 胃癌；化療；DC-CIK細(xì)胞；循環(huán)腫瘤細(xì)胞

[中圖分類號] R735 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2017）12-0025-03

[Abstract] Objective To investigate the effect of chemotherapy and bioimmune therapy on gastric cancer and its effect on circulating tumor cells（CTC）. Methods Eighty patients with gastric cancer diagnosed by postoperative pathology were divided into control group and observation group. The control group was treated with chemotherapy only. The observation group was treated with DC-CIK biological immunotherapy. The effect and the CTC levels of two groups before and after treatment were compared. Results （1）The total clinical remission rate in the observation group was significantly higher than that in the control group（P<0.05）； （2）The detection rate of CTC in the observation group was significantly lower than that before treatment and the control group（P<0.05）. Conclusion The clinical effect of chemotherapy combined with biological immunotherapy for gastric cancer is significant， can reduce the CTC level， and should be popularized in clinical practice.

[Key words] Gastric cancer； Chemotherapy； DC-CIK cells； Circulating tumor cells

胃癌早期臨床診斷率較低，常無任何癥狀或癥狀輕微，確診時多為晚期[1]?；煘槌Ｓ弥委熚赴┑姆椒ㄖ唬梢燥@著改善患者的預(yù)后[2]。近年來，生物免疫治療已經(jīng)逐漸發(fā)展成為臨床治療惡性腫瘤的主要方法之一，研究證實，生物免疫療法能夠顯著增強患者的機體免疫力及抑制腫瘤細(xì)胞的繁殖，降低化療毒副反應(yīng)的發(fā)生率[3]。本研究主要采用化療聯(lián)合生物免疫治療方法即樹突狀細(xì)胞（DC）、細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞（CIK）治療胃癌，探討該方案治療的療效及其對CTC水平的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2012年1月～2016年12月期間入住本院的80例胃癌患者隨機分為對照組與觀察組，每組各40例。對照組：男23例，女17例；年齡54～79歲，平均（67.92±10.21）歲；TNM分期：Ⅲ B期25例，Ⅳ期15例；病理類型：低分化腺癌、管狀腺癌、黏液腺癌及印戒細(xì)胞癌分別為12例、9例、11例及8例。觀察組：男25例，女15例；年齡56～78歲，平均（67.10±10.18）歲；TNM分期：ⅢB期27例，Ⅳ期13例；病理類型：低分化腺癌、管狀腺癌、黏液腺癌及印戒細(xì)胞癌分別為11例、11例、10例及8例。兩組患者的性別、年齡、TNM分期及病理類型等基線資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 治療方法

兩組患者均實施常規(guī)手術(shù)治療。術(shù)后第3周，對照組采用奧沙利鉑（L-OHP）+亞葉酸鈣A及氟尿嘧啶（5-FU）組成的FOLFOX化療方案。觀察組患者在上述治療基礎(chǔ)上聯(lián)合生物免疫療法進(jìn)行治療：采血分離，抽血前皮下注射150 μg的GM-CSF，將PBMC與GM-CSF、IL-4混合置于溫度條件為37℃的恒溫箱之中培育，3 d后完成抗原沖擊培育，2 d后生成成熟的致敏DC，經(jīng)2周后再將其回輸；在外周血液之中將單個核細(xì)胞分離之后，對CIK細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)培育，1周后再經(jīng)細(xì)胞培育呈陰性，再使用0.9%的NaCl溶液洗滌2～3次，同rhIL-2一起加入自身血漿之中，于2 h以內(nèi)進(jìn)行回輸。上述生物制劑每個療程回輸2次，每隔5天后進(jìn)行化療。

1.3 臨床療效評價

參考世界衛(wèi)生組織關(guān)于癌癥患者臨床療效評價標(biāo)準(zhǔn)，主要分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、無變化（NC）及進(jìn)展（PD）。臨床總緩解率（%）=（CR例數(shù)+PR例數(shù)）/總例數(shù)×100%[4]。

1.4 CTC檢測

（1）主要材料 激光共聚焦掃描顯微鏡（Laser scanning confocal microscope，LSC）（美國CompuCyte公司），濾器（德國SARTORIUS公司），8 μm孔徑的聚碳酸酯濾膜（英國Whatman公司），異硫氰酸熒光素-兔抗人細(xì)胞角蛋白抗體（英國Abcam公司）、藻紅蛋白（PE）-鼠抗人CD45抗體（美國e-Bioscience公司），CK8抗體（上海瑞齊生物科技有限公司）；4，6-二米基苯基吲哚（DAPI），MCF-7胃癌細(xì)胞株（中科院上海細(xì)胞研究所）。

（2）標(biāo)本采集 首先將標(biāo)本采集裝置進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理，使用真空采血針采集受檢者肘靜脈血10 mL，將穿刺后的2 mL肘靜脈血棄去。肝素抗凝，4℃中保存，待檢。選擇SGC-7901人胃癌細(xì)胞株構(gòu)建模擬胃癌患者血樣，這樣做的目的就是為了與上述采集標(biāo)本進(jìn)行對照，使用膜濾過的方法對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行富集。

（3）LSC自動掃描和形態(tài)學(xué)觀察 以CK8抗體（上海瑞齊生物科技有限公司）和CD45分別對SGC-7901進(jìn)行篩選，陽性細(xì)胞為CK8（+）CD45（-）。經(jīng)LSC掃描計數(shù)腫瘤細(xì)胞水平。

（4）典型CTC判定標(biāo)準(zhǔn) ①CTC細(xì)胞體積比周圍白細(xì)胞大；②CTC細(xì)胞核經(jīng)DAPI染色，比較明亮，細(xì)胞核較大，核漿所占比例較大，核分裂程度較大，且呈病理性核分裂；③經(jīng)標(biāo)志物熒光染色，胞漿抗CK19（+）與CD45（-），顯示存在較為明顯的細(xì)胞形態(tài)，且具有較為清楚的細(xì)胞界限；④細(xì)胞核面積與相應(yīng)胞漿抗原染色部位面積接近。本研究中，將CK19（+）以及細(xì)胞數(shù)大于1個視為CTC陽性[5]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床療效比較

經(jīng)治療后，觀察組CR、PR、NC及PD例數(shù)分別為5例、13例、15例及7例，臨床總緩解率為45.00%（18/40）；對照組分別為1例、10例、12例及17例，臨床總緩解率為27.50%（11/40）。觀察組臨床總緩解率顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 兩組患者治療前后CTC檢測結(jié)果比較

觀察組治療后CTC檢出率顯著低于治療前及對照組治療后，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

胃癌是我國最為常見的一種惡性腫瘤，早期診斷率非常低，大部分患者確診時已為晚期，失去了手術(shù)根治的良好機會，即使可以采取手術(shù)治療，但是其術(shù)后復(fù)發(fā)率也非常高[6-8]。因此，對于晚期胃癌患者而言，選擇藥物治療非常關(guān)鍵。臨床治療胃癌的主要方法有外科手術(shù)、放化療等，但是上述幾種常見治療方法療效并不十分理想。隨著臨床治療胃癌的技術(shù)手段的不斷更新與變革，生物免疫治療技術(shù)越來越多地應(yīng)用于臨床疾病的治療之中，取得了非常理想的效果[9-10]。對于腫瘤的治療而言，近年來也開始越來越多地將該新型技術(shù)用于臨床治療各種類型的腫瘤，該方法治療腫瘤的重要原理為對機體免疫功能加以調(diào)節(jié)，不斷增強患者機體免疫力，從而殺死腫瘤細(xì)胞。

目前，臨床上常采用化療方法對胃癌患者進(jìn)行治療，然而化療治療存在著諸多缺陷，如患者耐受度差、不良反應(yīng)發(fā)生率高以及終止治療率較高等方面的缺點，對臨床療效產(chǎn)生極大的影響。此外，化療在遏制腫瘤細(xì)胞生長的情況下，會對機體的免疫功能產(chǎn)生抑制性作用，降低機體自身對腫瘤細(xì)胞的殺傷力，同時普通化療方案只對部分腫瘤細(xì)胞具有殺傷性作用，對微小病灶的殺傷，卻需要機體自身免疫力來完成。對此，僅憑單純的化療方案對胃癌患者實施治療，其療效無法達(dá)到滿意程度。本研究觀察組在化療的基礎(chǔ)上采用生物免疫治療[11-13]。在生物免疫治療方案中，DC細(xì)胞是目前已知的抗原提呈細(xì)胞中功能最強大，且能夠激活處于靜止?fàn)顟B(tài)的T淋巴細(xì)胞，并促使免疫應(yīng)答反應(yīng)得以最大程度啟動，其在機體免疫反應(yīng)之中具有非常明顯的調(diào)節(jié)效果。通過將DC對抗原的攝取能力制作疫苗在體外負(fù)載腫瘤相關(guān)抗原，疫苗回輸時可將腫瘤抗原帶回至機體之中，從而激活自身的免疫系統(tǒng)，從而有效提高了抗腫瘤及提高免疫水平的作用。近年來，DC細(xì)胞生物治療已在臨床腫瘤治療中得到了較為廣泛的應(yīng)用，然而也存在著一定的問題，如具體的培養(yǎng)過程、培養(yǎng)劑量、接種方法以及疫苗培養(yǎng)時機等方面，均存在較大的爭議。CIK細(xì)胞屬于一種全新的非主要組織相容性復(fù)合物免疫活性細(xì)胞，其繁殖能力以及細(xì)胞殺傷活性水平均較高，是該細(xì)胞與諸多細(xì)胞因子共同在機體之外進(jìn)行培養(yǎng)而獲取的異質(zhì)性細(xì)胞，不會被T細(xì)胞受體所限制，所以其臨床抗腫瘤的優(yōu)點十分顯著[14]。本研究觀察組采用DC-CIK生物免疫治療方案對患者進(jìn)行治療，效果十分明顯，觀察組的臨床總緩解率顯著高于對照組（P<0.05）；觀察組治療后CTC檢出率均顯著低于治療前及對照組（P<0.05）。

CTC檢測是臨床上一項較為先進(jìn)的檢驗技術(shù)，其優(yōu)勢主要表現(xiàn)在僅需要通過抽取患者靜脈血，便能夠?qū)颊唧w內(nèi)的CTC的變化情況進(jìn)行監(jiān)測。而且通過多年實驗室以及臨床實踐研究表明，學(xué)術(shù)界對于CTC在與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移等存在的聯(lián)系，以及CTC在預(yù)測預(yù)后、指導(dǎo)個體化治療方面的作用等方面均得到了認(rèn)可[15]。很長一段時間以來，由于實驗技術(shù)存在一定的局限性，臨床上對CTC的檢測一直無合適的檢測方法，這在很大程度上限制了CTC研究的深入。近年來隨著臨床檢驗技術(shù)的快速發(fā)展，某些CTC檢測方法已獲得了穩(wěn)定性、敏感性以及特異性均處于較高水平的結(jié)果。目前用于檢測CTC的方法有IMS法、密度梯度離心法以及ISET檢測法等，有關(guān)CTC臨床價值的研究也取得了令人鼓舞的結(jié)果。由此可以得知，CTC可作為臨床判定胃癌患病程度的一個重要指標(biāo)。

綜上所述，化療聯(lián)合生物免疫治療胃癌的臨床療效顯著，可有效降低CTC水平，應(yīng)在臨床中進(jìn)行推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陳環(huán)球，文旭，顧榮民，等.自體DC細(xì)胞疫苗對進(jìn)展期胃癌術(shù)后同步化療患者免疫功能的影響[J].江蘇醫(yī)藥，2011，37（6）：668-670.

[2] 王立媛，馬雪梅，王婷婷，等.胃癌患者血清胸苷磷酸化酶表達(dá)與臨床病理特征、化療療效及預(yù)后關(guān)系的研究[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2012，13（3）：1524-1525.

[3] 李井泉，梁杰雄.全身化療聯(lián)合 DC-CIK 過繼免疫治療中晚期胃癌的臨床研究[J].河北醫(yī)藥，2015，15（10）：1498-1502.