陳新新，蘆 晶，劉 鷺，逄曉陽(yáng)，張書文，李 誠(chéng)，呂加平

基于2 種衍生化方法對(duì)牛乳中寡糖的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析

陳新新1,2，蘆 晶2，劉 鷺2，逄曉陽(yáng)2，張書文2，李 誠(chéng)1,*，呂加平2

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川 雅安 625014；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，北京 100193）

利用Sep-Pak C18柱和石墨化碳柱對(duì)已脫脂和除去蛋白質(zhì)的牛乳進(jìn)行分離純化，并采用1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮（3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one，PMP）和2-氨基吖啶酮（2-aminoacridone，AMAC），2 種衍生化試劑對(duì)其進(jìn)行衍生化處理，通過(guò)高效液相色譜進(jìn)行優(yōu)化，AMAC衍生化的結(jié)果（約有67 個(gè)峰）明顯優(yōu)于PMP衍生化的結(jié)果（約20 個(gè)峰），最終確定AMAC為最佳衍生化試劑，并利用最終優(yōu)化好的高效液相色譜條件，采用高效液相色譜-串聯(lián)離子阱飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)牛乳中寡糖進(jìn)行測(cè)定，最終測(cè)得7 種乳寡糖并獲得該7 種乳寡糖的單糖組成。

牛乳寡糖；1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮；2-氨基吖啶酮；高效液相色譜-串聯(lián)離子阱飛行時(shí)間質(zhì)譜

牛乳中含有4.5%的碳水化合物，其中乳糖的含量超過(guò)80%，寡糖含量約占總糖含量的4%。研究發(fā)現(xiàn)游離寡糖是哺乳動(dòng)物乳汁中除乳糖和脂肪外種類最為豐富的固形化合物[1]。乳寡糖是由3～10個(gè)單糖通過(guò)糖苷鍵共價(jià)連接的碳水化合物聚糖，構(gòu)成牛乳寡糖的單糖包括葡萄糖（glucose，Glc）、半乳糖（galactose，Gal）、N-乙酰葡糖胺（N-acetylglusamine，GlcNAc）、巖藻糖（fucose，F(xiàn)uc）、N-乙酰神經(jīng)氨酸（N-acetylneuraminic acid，NeuAc）和N-羥乙酰神經(jīng)氨酸（N-glycolylneuraminic acid，NeuGc），大多數(shù)的牛乳寡糖都有一個(gè)乳糖核心（Gal（β1-4）Glc）[2-3]。乳制品特別是嬰兒配方奶粉、食品工業(yè)及功能食品制造商確定為牛奶中的低聚糖是一種新穎、有高潛力的生物活性食品配料。研究發(fā)現(xiàn)，乳寡糖作為益生元可以刺激腸道有益細(xì)菌的生長(zhǎng)如新生兒腸道內(nèi)雙歧桿菌，改善微生態(tài)，從而降低嬰幼兒患病風(fēng)險(xiǎn)，如腹瀉，腦膜炎和中耳炎等[4-8]。鑒于乳寡糖特定的生理功能，人們開始關(guān)注乳寡糖的研究。由于牛乳寡糖種類繁多且結(jié)構(gòu)復(fù)雜，目前對(duì)牛乳寡糖結(jié)構(gòu)的解析較少，且國(guó)內(nèi)對(duì)牛乳寡糖的測(cè)定方法鮮有報(bào)道。高效液相色譜、生物質(zhì)譜以及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是目前分析寡糖的有效的工具[9-11]。

寡糖衍生化可有效改善寡糖光學(xué)吸收及質(zhì)譜檢測(cè)的離子化效率，提高其分析的靈敏度[12-14]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)分析牛乳寡糖的衍生化試劑及高效液相色譜分析條件進(jìn)行優(yōu)化，通過(guò)最佳衍生化試劑2-氨基吖啶酮的柱前衍生化法進(jìn)行高效液相色譜-串聯(lián)離子阱飛行時(shí)間質(zhì)譜分析，以期建立牛乳寡糖結(jié)構(gòu)解析及含量測(cè)定的可行方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

牛乳采自北京市某牛場(chǎng)初次泌乳且泌乳4 個(gè)月的荷斯坦牛；乙腈、甲醇（均為色譜純） 美國(guó)Fisher公司；二甲基亞砜（色譜純） 美國(guó)Corning公司；硼氰化鈉（色譜純） 美國(guó)阿拉丁公司；冰醋酸、無(wú)水乙醇、三氟乙酸（trifluoroacetic acid，TFA）等其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Xbridge氨基色譜柱（4.6 mm×150 mm，3.5 μm）、Sep-Pak C18柱（500 mg/4 mL） 美國(guó)Waters公司；石墨碳柱（150 mg/4 mL） 美國(guó)Grace公司；MVS-1渦旋混合器 北京金北德工貿(mào)有限公司；3K15離心機(jī) 美國(guó)Sigma公司；ZLS-4真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 湖南赫西儀器裝備有限公司；20AD高效液相色譜-串聯(lián)離子阱飛行時(shí)間質(zhì)譜儀日本島津公司；ULUP-IV-10T超純水裝置 西安優(yōu)普儀器設(shè)備有限公司；PHS-3C型pH計(jì) 成都世紀(jì)方舟科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 牛乳寡糖的提取

取10 mL牛乳，于10 ℃、105×g超高速離心90 min，除去底部的酪蛋白和上層的脂肪，取5 mL中間水層加入10 mL無(wú)水乙醇，4 ℃放置2 h，于4 ℃、1 503×g離心30 min（重復(fù)2 遍）后取上清液，然后用濃縮儀濃縮干燥，即為牛乳寡糖粗品[4]。

1.3.2 牛乳寡糖的純化及富集

分別采用Sep-Pak C18柱和石墨化柱對(duì)濃縮后的液體進(jìn)行分離純化，具體操作：用5 mL甲醇平衡Sep-Pak C18柱，然后用10 mL 0.1% TFA溶液洗Sep-Pak C18柱[15]。

將干燥的牛乳寡糖粗品溶于200 μL 0.1% TFA溶液，然后上樣到Sep-Pak C18柱。收集過(guò)柱液體，用200 μL 0.1% TFA溶液潤(rùn)洗收集試管，將收集的液體加入Sep-Pak C18中，收集過(guò)柱液體，此步驟重復(fù)2 次。最后用3 mL 0.1% TFA溶液沖洗Sep-Pak C18，收集過(guò)柱液體，所得到收集液體為牛乳寡糖樣品。

牛乳寡糖的除鹽富集采用石墨化柱，除鹽步驟也分為活化、平衡、載樣過(guò)柱、脫鹽、洗脫等，依次用3 倍柱體積的80%乙腈溶液（含0.1% TFA）和純水通過(guò)柱體；將上一步的收集液上樣，控制流速約0.5～1.0 mL/min（重復(fù)此步驟）；用3 倍柱體積的純水通過(guò)柱體，為吸附于柱底PGC填料上的寡糖除鹽；最后用0.5 mL 10%乙腈溶液（含0.1% TFA）、20%乙腈溶液（含0.1% TFA）、40%乙腈溶液（含0.1% TFA）將寡糖分步洗脫，收集洗脫液濃縮凍干用于衍生化。

1.3.3 牛乳寡糖衍生化試劑的選擇及高效液相色譜條件的優(yōu)化

1.3.3.1 牛乳寡糖1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮的衍生化

將上一步干燥后的樣品溶于50 μL氨水，加入50 μL 1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮-甲醇溶液（0.5 mol/L），70 ℃條件下反應(yīng)35 min，反應(yīng)后冷卻到室溫，然后加入1 mL的超純水進(jìn)行真空干燥（此步驟重復(fù)2 次），向干燥的物質(zhì)中分別加入1 mL的超純水和1 mL的氯仿，用渦旋儀充分混合后靜置，除去有機(jī)相（此步驟重復(fù)3 次），將最后得到的水相15 493×g離心2 min，抽取上清液用超純水稀釋10 倍后用于高效液相色譜優(yōu)化分析[17]。

1.3.3.2 牛乳寡糖2-氨基吖啶酮的衍生化

2-氨基吖啶酮是公認(rèn)的熒光疏水性的標(biāo)記分子，被成功地用于衍生和分離各種復(fù)雜的寡糖[16-17]。干燥后的樣品用2-氨基吖啶酮衍生化，即將純化后干燥的牛乳寡糖溶于50 μL 0.1 mol/L 2-氨基吖啶酮（用冰醋酸和二甲基亞砜按3∶17的體積比溶解），2-氨基吖啶酮的氨基與糖的還原端（醛基）發(fā)生親核反應(yīng)，生成Schiff堿，其次加入50 μL新鮮配制的1 mol/L硼氰化鈉溶液，上一步生成的Schiff堿隨即被硼氰化鈉專一地還原成穩(wěn)定的二級(jí)胺。反應(yīng)后經(jīng)11 000×g離心3 min，然后在45 ℃溫度條件下反應(yīng)4 h，最后加入150 μL 50%二甲基亞砜溶液直接用于高效液相色譜優(yōu)化分析[18]。

1.3.3.3 高相液相色譜條件

XBridge氨基柱（250 mm×4.6 mm，3.5 μm）；流動(dòng)相A：乙腈，流動(dòng)相B：10 mmol/L的甲酸銨（pH 4.5）溶液；流速0.5 mL/min；柱溫35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm（采用紫外檢測(cè)器）；梯度洗脫條件為：0～27 min，95%～85% A；27～29 min，85% A；29～31 min，85%～84% A；31～33 min，84% A；33～37 min，84%～83% A；37～48 min，83%～79% A；48～64 min，79%～73% A；64～66 min，73% A；66～74 min，73%～69% A；74～78 min，69%～68% A；78～85 min，68%～65% A。

1.3.3.4 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源，正離子模式；噴霧電壓為4.5 kV；負(fù)離子模式噴霧電壓為－3.5 kV。一級(jí)、二級(jí)離子質(zhì)量掃描設(shè)為m/z 300～1 000和m/z 1 000～2 000。加熱模塊和曲形脫溶劑管溫度均為200 ℃，氮?dú)饬魉贋?.5 L/min，離子累計(jì)時(shí)間為10 ms。高純度氬氣作為碰撞誘導(dǎo)解離及冷卻氣，檢測(cè)器電壓為1.58 kV。離子阱真空度1.1×10－2Pa，飛行時(shí)間真空度1.2×10－4Pa。檢測(cè)模式正、負(fù)離子切換檢測(cè)[19]。

2 結(jié)果與分析

2.1 衍生化產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)

2.1.1 1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮試劑的衍生化

一分子的1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮和糖類物質(zhì)的還原端發(fā)生縮合反應(yīng)，在加熱條件下失水生成不飽和的單分子衍生物，然后繼續(xù)與另一分子的1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮發(fā)生Micheal 1,4加成，最終使糖物質(zhì)加上2分子的1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮，反應(yīng)式如圖1所示[20]。

圖 1 1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮與寡糖的衍生化反應(yīng)原理Fig. 1 Derivatization reaction mechanism of oligosaccharides with PMP

2.1.2 2-氨基吖啶酮試劑的衍生化還原胺化法是在糖鏈的還原端上引入發(fā)色基團(tuán)的最通用方法。先是2-氨基吖啶酮的氨基與糖的還原端發(fā)生親核反應(yīng)，消除一分子水后生成Schiff堿，然后Schiff堿隨即被硼氰化鈉專一地還原成二級(jí)胺，在眾多衍生化方法中，還原胺化法由于產(chǎn)物穩(wěn)定，是常用的衍生化方法之一，該衍生化方法穩(wěn)定、衍生后可提高糖的檢測(cè)靈敏度，反應(yīng)過(guò)程如圖2所示[21]。

圖 2 2-氨基吖啶酮與寡糖的衍生化反應(yīng)原理Fig. 2 Derivatization reaction mechanism of oligosaccharides with 2-AMAC

2.2 衍生化試劑及高效液相色譜條件的確定

圖 3 1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮衍生化（a～c）和2-氨基吖啶酮衍生化（d、e）牛乳寡糖高效液相分離圖譜Fig. 3 HPLC profiles of PMP- (a, b and c) and AMAC- (d and e) derivatized milk oligosaccharides under different conditions

對(duì)牛乳寡糖進(jìn)行1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮衍生化后進(jìn)行高效液相色譜條件的優(yōu)化，根據(jù)XBridge氨基柱的特性，初次設(shè)定流動(dòng)相條件為：梯度洗脫0～40 min，95%～65% A，如圖3a所示。根據(jù)圖3a并參照高效液相色譜分離的原則和XBridge氨基柱的特點(diǎn)進(jìn)行后續(xù)的高效液相色譜條件的優(yōu)化，選取部分優(yōu)化結(jié)果見圖3b，梯度洗脫條件為0～10 min，90%～70% A；20～40 min，70%～60% A，圖3c梯度洗脫條件為20～40 min，70%～65% A。從部分優(yōu)化結(jié)果來(lái)看，圖3a峰形較標(biāo)準(zhǔn)且大小峰有20 個(gè)左右，故將圖3a流動(dòng)相條件設(shè)為最佳色譜條件，即梯度洗脫0～40 min，95%～65% A。

對(duì)牛乳寡糖進(jìn)行2-氨基吖啶酮衍生化后進(jìn)行高效液相色譜條件的優(yōu)化，根據(jù)XBridge氨基柱的特性，初次設(shè)定流動(dòng)相條件為：梯度洗脫0～50 min，95%～65% A，結(jié)果見圖3d。根據(jù)圖3d參照高效液相色譜分離的原則和XBridge氨基柱的特點(diǎn)進(jìn)行后續(xù)的高效液相色譜條件的優(yōu)化，最終獲得最優(yōu)高效液相色譜條件為：梯度洗脫0～27 min，95%～85% A；27～29 min，85% A；29～31 min，85%～84% A；31～33 min，84% A；33～37 min，84%～83% A；37～48 min，83%～79% A；48～64 min，79%～73% A；64～66 min，73% A；66～74 min，73%～69% A；74～78 min，69%～68% A；78～85 min，68%～65% A。由圖3e可知，所得各峰相對(duì)規(guī)則，分離效果較優(yōu)，約有67 個(gè)峰，達(dá)到了盡可能多的鑒定出牛乳寡糖成分的條件。

從2 種衍生化試劑所得的最佳色譜圖譜來(lái)看2-氨基吖啶酮衍生化效果比較好，且1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮在衍生化過(guò)程中反應(yīng)程度難以控制[22]，并沒(méi)有2-氨基吖啶酮衍生化產(chǎn)物穩(wěn)定，故將2-氨基吖啶酮作為本實(shí)驗(yàn)的衍生化試劑。

2.3 質(zhì)譜分析

將衍生化后的牛乳寡糖用優(yōu)化好的流動(dòng)相條件通過(guò)高效液相色譜-串聯(lián)離子阱飛行時(shí)間質(zhì)譜測(cè)定，由于寡糖質(zhì)量掃描范圍為m/z 300～2 000，為獲得更好的精確度，將其分為兩部分進(jìn)行正負(fù)離子模式掃描，分別為質(zhì)量掃描范圍為m/z 300～1 000（圖4a）和m/z 1 000～2 000（圖4b）。

圖 4 不同質(zhì)量掃描范圍高效液相色譜圖Fig. 4 HPLC profiles in different m/z ranges

在質(zhì)量掃描范圍為m/z 300～1 000的質(zhì)譜測(cè)定中共鑒定6 種糖成分，其中4 種為寡糖，其余為單糖和雙糖；質(zhì)量掃描范圍為m/z 1 000～2 000的質(zhì)譜測(cè)定中鑒定出3 種乳寡糖。2個(gè)掃描段共測(cè)定出7 種乳寡糖；本實(shí)驗(yàn)正負(fù)離子模式同時(shí)進(jìn)行，寡糖大部分在負(fù)離子模式下電離出峰，其中正離子模式下共測(cè)到3 種乳寡糖，負(fù)離子模式測(cè)到4 種，寡糖在負(fù)離子模式下測(cè)定結(jié)果相對(duì)較好。實(shí)驗(yàn)所測(cè)得的7 種乳寡糖結(jié)構(gòu)如表1所示。

隨后，通過(guò)電噴霧離子-串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)分析出的寡糖進(jìn)行糖單元組成的確定。構(gòu)成牛乳寡糖的單糖包括Glc、Gal、GlcNAc、Fuc、NeuAc和NeuGc。根據(jù)斷裂碎片的質(zhì)荷比（m/z）可以判斷寡糖的單糖組成[23-25]。用二級(jí)質(zhì)譜分析2-氨基吖啶酮標(biāo)記的牛乳寡糖時(shí)，質(zhì)荷比相差162的碎片表示存在Hex，質(zhì)荷比相差146的碎片表示存在Fuc，質(zhì)荷比相差203和291的碎片表示存在HexNAc和NeuAc[26-27]。6’-NeuGcLacNAc是牛乳中酸性寡糖，圖5a為正離子模式下的6’-NeuGcLacNAc（m/z 885.294 8，保留時(shí)間79.503 min）的一級(jí)圖譜?？梢钥闯銎錅?zhǔn)分子為m/z 885.294 8[M+H]+峰。為確證其結(jié)構(gòu)組成對(duì)其進(jìn)行電噴霧離子-串聯(lián)質(zhì)譜分析，碰撞能量為32 eV，得到的二級(jí)圖譜如圖5b所示。

表 1 7 種牛乳寡糖的結(jié)構(gòu)Table 1 Structural analysis of 7 milk oligosaccharides

圖 5 6’-NeuGcLacNAc（a、b）和α3’-GalNAcL（c、d）在正離子模式下質(zhì)譜圖Fig. 5 Mass spectra in positive ion mode of 6’-NeuGcLacNAc (a and b) and α3’-GalNAcL (c and d)

由圖5 a、b可見，在正離子模式下，6’-NeuGcLacNAc產(chǎn)生2 種碎片離子，分別是m/z 561.197 4和m/z 397.132 5。m/z 561.197 4是由母離子m/z 885.294 8斷裂一分子的NeuGc（質(zhì)量數(shù)324）形成，m/z 397.132 5（一分子的GlcNAc加一分子2-氨基吖啶酮）是離子m/z 561.197 4失去一分子的Gal和2 個(gè)氫離子產(chǎn)生的，由此可知6’-NeuGcLacNAc由一分子的NeuGc、一分子的Gal和一分子的GlcNAc組成（斷裂方式見圖5b）。

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道α3’-GalNAcL存在3 個(gè)同分異構(gòu)體，分別為β3’-GalNAcL、β6’-GalNAcL和β-GlcNAclactose。圖5c為α3’-GalNAcL（β3’-GalNAcL或β6’-GalNAcL或β-GlcNAclactose m/z 742.289 2，保留時(shí)間62.313 min）正離子模式下的一級(jí)圖譜?？梢钥闯銎錅?zhǔn)分子為m/z 742.289 2 [M＋H]＋峰。為確證其結(jié)構(gòu)組成對(duì)其進(jìn)行電噴霧離子-串聯(lián)質(zhì)譜分析，碰撞能量為30 eV，得到的二級(jí)圖譜如圖5d所示。在正離子模式下，α3’-GalNAcL（β3’’-GalNAcL、β6’-GalNAcL和β-GlcNAclactose）產(chǎn)生4 種碎片離子，分別是m/z 580.243 3、562.237 8、415.115 2、235.076 8。m/z 580.243 3是母離子斷裂一分子的Glc產(chǎn)生的，m/z 562.237 8是由m/z 742.289 2失去一分子的Glc和一分子的H2O（質(zhì)量數(shù)162+18）得到的。m/z 415.115 2是一分子的HexNAc加上一分子的2-氨基吖啶酮得到的（即由母離子斷裂2 個(gè)Hex得到）。m/z 235.076 8是由m/z 415.115 2斷裂一分子的Gal產(chǎn)生。由此可以得出α3’-GalNAcL（β3’-GalNAcL、β6’-GalNAcL和β-GlcNAclactose）由一分子的Gal、一分子的Glc和一分子的HexNAc組成，斷裂方式見圖5d，如果需要區(qū)分同分異構(gòu)體需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)確定。采用類似的質(zhì)譜解析技術(shù)，通過(guò)二級(jí)質(zhì)譜分析確定了其余5 種寡糖的結(jié)構(gòu)。由于乳寡糖含量極低使對(duì)其的測(cè)定分析存在極大挑戰(zhàn)。采用該方法可以快速鑒定出牛乳中含量較豐富的寡糖成分，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Dallasd[28]、Sundekilde[29]等實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，為鑒定其他的未知峰以便測(cè)定更多的乳寡糖成分，可以將其他峰分別收集進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸離子化-傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜和高效液相色譜-芯片/四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜分析[2,30]。

3 結(jié) 論

采用分段質(zhì)譜掃描分析可以準(zhǔn)確鑒定牛乳中寡糖成分，并達(dá)到了預(yù)期的測(cè)定結(jié)果。二級(jí)質(zhì)譜的分析也進(jìn)一步確定了寡糖的單糖組成。由于本實(shí)驗(yàn)只做到電噴霧離子-串聯(lián)質(zhì)譜，并不能更好區(qū)分同分異構(gòu)體和獲得寡糖單糖組成的鍵位結(jié)構(gòu)，如需具體的結(jié)構(gòu)信息需要后續(xù)的測(cè)定分析。

綜上所述，通過(guò)對(duì)原料乳脫脂、除蛋白，分離純化后進(jìn)行2-氨基吖啶酮衍生化并采用高效液相色譜技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對(duì)牛乳寡糖的有效分離。采用高效液相色譜-串聯(lián)離子阱飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)牛乳中寡糖進(jìn)行測(cè)定，鑒定了7 種牛乳寡糖并實(shí)現(xiàn)了對(duì)該7 種牛乳寡糖結(jié)構(gòu)組成的分析。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單可行、可用于牛乳寡糖的分離和測(cè)定。

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Comparative Analysis of Oligosaccharides in Milk Based on Two Different Derivatization Methods by HPLC-Tandem Mass Spectrometry

CHEN Xinxin1,2, LU Jing2, LIU Lu2, PANG Xiaoyang2, ZHANG Shuwen2, LI Cheng1,*, Lü Jiaping2
(1. College of Food Science, Sichuan Agricultural University, Yaan 625014, China; 2. Institute of Food Science and Technology, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China)

In the present study, Sep-Pak C18and porous graphitized carbon column chromatographies were sequentially used to separate and purify oligosaccharides f rom defatted and deproteinated milk. After derivatization w ith phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP) or 2-aminoacridone (AMAC), the oligosaccharides were analyzed by high-performance liquid chromatography ion trap time of flight tandem mass spectrometry (HPLC-IT-TOF-MS). AMAC was a better derivatization agent than PMP, since they produced about 67 and 20 chromatographic peaks, respectively. Finally, seven lacto-oligosaccharides were identified under optimized HPLC conditions, and their monosaccharide compositions were determined.

milk oligosaccharides; 3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one; 2-aminoacridone; high-performance liquid chromatography ion trap time of flight tandem mass spectrometry (HPLC-IT-TOF-MS)

10.7506/spkx1002-6630-201710027

O629.1

A

1002-6630（2017）10-0162-06

陳新新, 蘆晶, 劉鷺, 等. 基于2 種衍生化方法對(duì)牛乳中寡糖的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(10): 162-167. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201710027. http://www.spkx.net.cn

CHEN Xinxin, LU Jing, LIU Lu, et al. Comparative analysis of oligosaccharides in milk based on two different derivatization methods by HPLC-tandem mass spectrometry[J]. Food Science, 2017, 38(10): 162-167. (in Chinese with English abstract)

10.7506/spkx1002-6630-201710027.http://www.spkx.net.cn

2016-08-23

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（1401514）；“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2013BAD18B10）；公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201303085）

陳新新（1990—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)。E-mail：xinxin1190@163.com

*通信作者：李誠(chéng)（1964—），男，教授，碩士，研究方向?yàn)樾螽a(chǎn)品加工與質(zhì)量安全控制。E-mail：lichenglcp@163.com