萬(wàn)建青，朱真，楊挺英，黃小潔

(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

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《中華人民共和國(guó)獸藥典》2015年版三部培養(yǎng)基部分增修訂概況

萬(wàn)建青，朱真，楊挺英，黃小潔

(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

解讀《中華人民共和國(guó)獸藥典》2015年版三部培養(yǎng)基質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的增修訂內(nèi)容和特點(diǎn)，以便廣大使用者了解和掌握培養(yǎng)基質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的變化，并為《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020年版的編制提供建議。

《中華人民共和國(guó)獸藥典》2015年版三部；培養(yǎng)基；標(biāo)準(zhǔn)；增修訂

《中華人民共和國(guó)獸藥典》(以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)獸藥典》或獸藥典)作為國(guó)家獸藥技術(shù)法典，是國(guó)家獸藥標(biāo)準(zhǔn)體系的核心，也是獸藥研究、生產(chǎn)、檢驗(yàn)、經(jīng)營(yíng)、使用以及監(jiān)督管理等環(huán)節(jié)必須共同遵守、具有強(qiáng)制性的技術(shù)準(zhǔn)則和法定依據(jù)。《中國(guó)獸藥典》2015年版[1]已于2016年8月23日由農(nóng)業(yè)部公告第2438號(hào)正式頒布，自2016年11月15日起實(shí)施。本文重點(diǎn)就培養(yǎng)基相關(guān)增修訂概況進(jìn)行介紹，為新版獸藥典的有效順暢實(shí)施提供參考。

1 增修訂概況

2005年版獸藥典收錄了《中華人民共和國(guó)獸用生物制品規(guī)程》的主要內(nèi)容，將其作為《中國(guó)獸藥典》三部，使我國(guó)獸用生物制品首次有了獨(dú)立法典。培養(yǎng)基作為一種重要的原輔材料，也因此首次出現(xiàn)在獸藥典中，該部獸藥典當(dāng)時(shí)收錄了13種培養(yǎng)基。2010年版獸藥典三部[2]在2005年版獸藥典基礎(chǔ)上，將培養(yǎng)基的品種增加至15種，增加了酪胨瓊脂培養(yǎng)基(GA)和無(wú)血清支原體培養(yǎng)基。在《中國(guó)獸藥典》2015年版三部編撰過(guò)程中，結(jié)合工作實(shí)際，并借鑒國(guó)內(nèi)外藥典標(biāo)準(zhǔn)的一些先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)，對(duì)培養(yǎng)基部分進(jìn)行了較大的修改，包括培養(yǎng)基的品種、配方、配制方法、檢驗(yàn)方法等。與2010年版獸藥典相比，《中國(guó)獸藥典》2015年版三部收錄了22種培養(yǎng)基，其中新增10種、修訂12種、刪除3種，增修訂概況見表1。

表1 《中國(guó)獸藥典》2015年版三部培養(yǎng)基品種增修訂概況Tab 1 Revisions of medium classes including in Chinese Veterinary Pharmacopoeia (volume III, 2015 edition)

2 主要變化及特點(diǎn)

2.1 編寫體例更加科學(xué) 在編寫體例上，借鑒美國(guó)藥典[3]、歐洲藥典[4]、英國(guó)藥典[5]、日本藥局方[6](以下簡(jiǎn)稱國(guó)際藥典)和中國(guó)藥典[5]關(guān)于無(wú)菌檢驗(yàn)法和支原體檢驗(yàn)法的做法，對(duì)《中國(guó)獸藥典》2015年版三部的檢驗(yàn)用培養(yǎng)基實(shí)行分類收載，將無(wú)菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)培養(yǎng)基單獨(dú)列出，融入相應(yīng)方法中，如無(wú)菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基收錄至“附錄3306無(wú)菌檢驗(yàn)或純粹檢驗(yàn)法”，支原體檢驗(yàn)培養(yǎng)基收錄至“附錄3308支原體檢驗(yàn)法”中，其他檢驗(yàn)培養(yǎng)基一并收錄至“附錄3704檢驗(yàn)用培養(yǎng)基配制法”，具體見表2。通過(guò)分類收錄，調(diào)整了培養(yǎng)基相關(guān)內(nèi)容在《中國(guó)獸藥典》2015年版三部中的內(nèi)容分布，其編寫體例與國(guó)際要求相統(tǒng)一，提高了科學(xué)性和規(guī)范性。

表2 各類培養(yǎng)基收錄情況Tab 2 The inclusion of media

2.2 編寫內(nèi)容更加合理 對(duì)檢驗(yàn)用培養(yǎng)基，借鑒國(guó)際藥典的做法，對(duì)一些復(fù)雜配方的培養(yǎng)基，主要是新鮮培養(yǎng)基，采用二級(jí)結(jié)構(gòu)的形式給出明確的配方。這種二級(jí)結(jié)構(gòu)形成的配方稱為基礎(chǔ)培養(yǎng)基。在新版獸藥典中，新增了牛肉湯和豬胃消化液兩種常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并以附注1、附注2的形式收錄，它們是普通肉湯、馬丁肉湯、明膠培養(yǎng)基等多種培養(yǎng)基的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。通過(guò)收錄基礎(chǔ)培養(yǎng)基，使檢驗(yàn)用培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)成分的含量相對(duì)準(zhǔn)確，對(duì)全面提升檢驗(yàn)用培養(yǎng)基質(zhì)量具有重要意義。

對(duì)無(wú)菌檢驗(yàn)和支原體檢驗(yàn)培養(yǎng)基，分別從培養(yǎng)基及配方和培養(yǎng)基的質(zhì)量控制兩部分進(jìn)行闡述。同時(shí)，增加了前言部分，首次明確各培養(yǎng)基對(duì)質(zhì)控菌的適用范圍，使標(biāo)準(zhǔn)編寫更加規(guī)范，提高了內(nèi)容的整體性和邏輯性。

對(duì)編寫細(xì)節(jié)的處理更加嚴(yán)謹(jǐn)，比如將溫度設(shè)為一個(gè)范圍，而不是一個(gè)點(diǎn)，如將金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)溫度設(shè)為“35～37 ℃”，替代原有的“37 ℃”。又如，根據(jù)中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心對(duì)菌種名稱的最新規(guī)定，將“白色念珠菌”和“黑曲霉”的名稱分別修訂為“白假絲酵母”、“巴西曲霉”，同時(shí)保留了原有名稱作為新舊名稱銜接的依據(jù)，提高了編寫的科學(xué)性和嚴(yán)謹(jǐn)性。

2.3 檢驗(yàn)用培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)體系更加嚴(yán)謹(jǐn) 檢驗(yàn)方法與檢驗(yàn)用培養(yǎng)基有效銜接，通過(guò)整理獸藥典檢驗(yàn)方法中所涉及的培養(yǎng)基種類，新增7種制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中提到但未收錄的培養(yǎng)基，刪除1種與獸藥典收載的檢驗(yàn)項(xiàng)目無(wú)關(guān)的培養(yǎng)基，提高了新版獸藥典檢驗(yàn)方法與檢驗(yàn)用培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)之間的銜接，加強(qiáng)了制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的原輔材料控制，豐富了檢驗(yàn)用培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)涵。

增加了檢驗(yàn)培養(yǎng)基的適用范圍，提高了可追溯性。同時(shí)，根據(jù)實(shí)際工作，對(duì)個(gè)別培養(yǎng)基配制進(jìn)行修訂，提高了標(biāo)準(zhǔn)的可操作性。

2.4 無(wú)菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)基本與國(guó)際接軌 國(guó)際藥典無(wú)菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基種類、配制方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)于2005年統(tǒng)一，中國(guó)藥典無(wú)菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基種類及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)亦于2015年與國(guó)際通用標(biāo)準(zhǔn)接軌，而2010年版獸藥典無(wú)菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基種類、配方仍沿用1985年版中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)。在參照國(guó)際藥典和中國(guó)藥典的基礎(chǔ)上，《中國(guó)獸藥典》2015年版三部無(wú)菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基部分不斷借鑒和采用國(guó)際先進(jìn)技術(shù)，完善質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

調(diào)整無(wú)菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基種類，在充分驗(yàn)證的基礎(chǔ)上，新增了胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)作為檢驗(yàn)真菌和需氧菌的培養(yǎng)基；優(yōu)化了硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基的配方并更名為硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(TG)；刪除了酪胨瓊脂培養(yǎng)基(GA)和葡萄 糖蛋白胨培養(yǎng)基(GP) 。同時(shí)，參照制品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的編寫體例，對(duì)培養(yǎng)基提出了明確的檢驗(yàn)參數(shù)，如性狀、pH值、無(wú)菌檢驗(yàn)、微生物促生長(zhǎng)試驗(yàn)等，相關(guān)變化見表3、表4。

嚴(yán)格檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，提升檢驗(yàn)質(zhì)量，比如硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的性狀檢驗(yàn)由“淡黃色澄明液體，溶液上層0.5～1.0cm為紅色”修訂為“流體，氧化層的高度(上層粉紅色)不超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/3”。同時(shí)，明確質(zhì)控菌種培養(yǎng)條件，細(xì)化接種步驟，保證了培養(yǎng)基的安全有效、質(zhì)量可控。比如，刪除了酪胨瓊脂培養(yǎng)基(GA)和葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基(GP)，原因是GA主用于純粹檢驗(yàn)，在必要情況下對(duì)TG的補(bǔ)充，且可被其他適宜病原菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)菌所替代；而GP是我們一直沿用中國(guó)藥典的培養(yǎng)基，但2015年版中國(guó)藥典采用了國(guó)際通用的檢驗(yàn)真菌和需氧菌的TSB培養(yǎng)基，且經(jīng)徐偉東等[7]和本實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，二者微生物促生長(zhǎng)能力無(wú)差異，經(jīng)中國(guó)獸藥典委員會(huì)討論，同意刪除GA、GP，同時(shí)用TSB代替GP，用于檢驗(yàn)真菌和需氧菌。

完善質(zhì)控菌種管理，借鑒和采用國(guó)際藥典的先進(jìn)做法，根據(jù)菌種性質(zhì)對(duì)質(zhì)控菌種進(jìn)行了分類，將5種質(zhì)控菌的分為需氧菌、厭氧菌和真菌。增加菌種溯源，或追溯到美國(guó)典型菌種保藏中心ATCC、或追溯到中國(guó)醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心(CMCC)，規(guī)范了質(zhì)控菌種的來(lái)源。

表3 無(wú)菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基變化對(duì)比Tab 3 Comparative change of asepsis medium

表4 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配方及配制方法變化對(duì)比Tab 4 Comparative change in confect and confect methods of fluid thioglycollate medium

修訂后無(wú)菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基種類設(shè)置科學(xué)、檢查項(xiàng)目系統(tǒng)、質(zhì)控菌種規(guī)范，基本實(shí)現(xiàn)了與國(guó)際藥典和中國(guó)藥典同步。

2.5 支原體檢驗(yàn)培養(yǎng)基檢驗(yàn)方法更加完善 整合檢驗(yàn)方法。按照歸類闡述的原則，將5種支原體檢驗(yàn)培養(yǎng)基整合為液體和固體培養(yǎng)基兩類檢驗(yàn)方法，替代了原有5種培養(yǎng)基5個(gè)相似的檢驗(yàn)方法。同時(shí)，刪除不適用質(zhì)控方法，液體培養(yǎng)基僅保留靈敏度測(cè)定；固體培養(yǎng)基僅保留微生物促生長(zhǎng)試驗(yàn)，減少了重復(fù)，提升了檢驗(yàn)的可操作性，為進(jìn)一步建立更加科學(xué)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)。

完善培養(yǎng)基配方。一是規(guī)范了固體培養(yǎng)基基礎(chǔ)成分的名稱，基本培養(yǎng)基成分稱為“固體培養(yǎng)基基礎(chǔ)成分”，輔助液成為“輔助培養(yǎng)基成分”。二是統(tǒng)一了配方中的個(gè)別成分及名稱，用“無(wú)水磷酸二氫鉀”替代“磷酸二氫鉀”；用“葡萄糖(含1個(gè)結(jié)晶水)”替代 “葡萄糖”，用“瓊脂”替代“瓊脂粉”。

新增質(zhì)控菌種溯源，或追溯到美國(guó)典型菌種保藏中心ATCC，或可在獸醫(yī)微生物菌種保存中心查詢到菌種來(lái)源，規(guī)范了質(zhì)控菌種的來(lái)源。

3 結(jié) 語(yǔ)

《中國(guó)獸藥典》2015年版三部培養(yǎng)基部分在積極推行檢驗(yàn)檢測(cè)新技術(shù)、提供質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)方面取得了很大進(jìn)步，但仍存在一些不足，比如培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)化研究不夠深入，新鮮培養(yǎng)基替代方法研究基礎(chǔ)薄弱等，這些問(wèn)題在今后的研發(fā)工作中需進(jìn)一步加強(qiáng)。

總之，《中國(guó)獸藥典》2015年版三部不僅擴(kuò)大了培養(yǎng)基品種的收載，也擴(kuò)大了對(duì)培養(yǎng)基新技術(shù)新方法的收載和應(yīng)用，加強(qiáng)了培養(yǎng)基對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性，在檢驗(yàn)方法和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)上更加細(xì)化、科學(xué)，對(duì)進(jìn)一步建立嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，豐富培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)涵，全面提升培養(yǎng)基對(duì)獸用生物制品的技術(shù)支撐作用具有重要意義。

[1] 中國(guó)獸藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)獸藥典2015年版三部[S].

Commission of Chinese Veterinary Pharmacopeia. Veterinary Pharmacopoeia of the People’s Republic of China volumeⅢ 2015 edition[S].

[2] 中國(guó)獸藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)獸藥典2010年版三部[S].

Commission of Chinese Veterinary Pharmacopeia. Veterinary Pharmacopoeia of the People’s Republic of China volumeⅢ 2010 edition[S].

[3] 美國(guó)藥典[S]. 35:71.

USP[S]. 35:71.

[4] 歐洲藥典[S].7.0:151.

EP[S].7.0:151.

[5] 英國(guó)藥典[S].2011:A407.

BP[S].2011:A407.

[6] 日本藥局方[S].16:114.

JP[S].16:114.

[7] 許偉東，徐華玉. 胰酪胨大豆培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基的微生物促生長(zhǎng)能力考察[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2013,14(4):271.

XU W D, XU H Y. Microbial growth promotion evaluation of tryptic soybean medium and modified matin medium[J]. Drug Standards of China 2013, 14(4):271.

(編輯：陳希)

Revisions of Medium Including in the Veterinary Pharmacopoeia of the People's Republic of China(Volume III, 2015 Edition)

WAN Jian-qing，ZHU Zhen，YANG Ting-ying，HUANG Xiao-jie

(China Institute of Veterinary Drug Control, Beijing 100081 ,China)

The article described the supplement and revision of medium including in the Veterinary Pharmacopoeia of the People's Republic of China(volume III, 2015 edition),which would help users to understand and master the differences between the two Veterinary Pharmacopoeia of 2015 edition and 2010 edition. The article also gave some advices for Veterinary Pharmacopoeia of the People's Republic of China(2020 edition)

Veterinary Pharmacopoeia of the People's Republic of China(2015 edition); medium; standards; revisions

10.11751/ISSN.1002-1280.2017.5.14

萬(wàn)建青，副研究員，從事培養(yǎng)基等原材料檢驗(yàn)研究與管理工作。E-mail:wanjianqing@ivdc.org.cn

2017-02-15

A

1002-1280 (2017) 05-0068-05

S851.66