楊丹丹

（江蘇省海門市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 海門 226100）

利用GeneXpert檢測(cè)結(jié)核分支桿菌及其利福平耐藥性的研究

楊丹丹

（江蘇省海門市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 海門 226100）

目的研究GeneXpert檢測(cè)在結(jié)核分支桿菌及其利福平耐藥性檢測(cè)中的應(yīng)用。方法選取2014年7月至2015年11月我院所收治的116例涂片陽(yáng)性的肺結(jié)核患者的痰液標(biāo)本。對(duì)痰液標(biāo)本中的結(jié)核分枝桿菌及福平耐藥性行GeneXpert檢測(cè)，均與傳統(tǒng)的羅氏培養(yǎng)結(jié)果和藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較。結(jié)果GeneXpert檢測(cè)對(duì)結(jié)核分支桿菌的診斷符合率為93.1%，對(duì)利福平耐藥性的診斷符合率為97.2%。結(jié)論GeneXpert檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌及其利福平耐藥性，具有快速而準(zhǔn)確的特點(diǎn)，為結(jié)核病的診斷和治療提供可靠的依據(jù)。

結(jié)核分支桿菌；利福平；耐藥；基因芯片

結(jié)核病是一種世界性的慢性傳染疾病，它由結(jié)核分支桿菌感染而引起。結(jié)核分枝桿菌的耐藥性會(huì)嚴(yán)重影響結(jié)核病的治療效果，因此結(jié)核分枝桿菌的耐藥性檢測(cè)顯得尤為重要[1]。傳統(tǒng)的結(jié)核分枝桿菌耐藥性檢測(cè)方法主要采用以培養(yǎng)為基礎(chǔ)的絕對(duì)濃度法，需要花費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致諸多不便，不能滿足臨床的需要[2]。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，基因芯片被應(yīng)用于結(jié)核分枝桿菌耐藥性檢測(cè)中，可以快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)耐藥性，得到臨床醫(yī)學(xué)的驗(yàn)證和支持。本文利用基因芯片檢測(cè)結(jié)核分支桿菌及其利福平耐藥性，以期為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本與菌株：選取2014年7月至2015年11月我院所收治的116例涂片陽(yáng)性的肺結(jié)核患者的痰液標(biāo)本。

1.2 試劑與儀器：天津儀美科技有限公司Cepheid檢測(cè)儀，結(jié)核分枝桿菌rpoB基因和突變檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法），商品名稱：Xpert MTB/RIF。珠海貝索生物技術(shù)有限公司羅氏培養(yǎng)管，自行配置4%氫氧化鈉溶液，孵箱，安全柜，振蕩器。

1.3 GeneXpert檢測(cè)試驗(yàn)：①標(biāo)本處理：準(zhǔn)備所需試劑耗材，在前處理管和Cartridge反應(yīng)盒上標(biāo)記患者姓名及病例序號(hào)。取1 mL痰標(biāo)本置有螺旋蓋的前處理管中，接著加入相當(dāng)于痰標(biāo)本2倍體積的痰標(biāo)本處理液，將前處理管在震蕩器上渦旋震蕩30 s左右，直至無(wú)可見(jiàn)塊狀痰標(biāo)本存在。②加樣：將前處理管在室溫靜置15 min后，打開Cartridge反應(yīng)盒，用一次性無(wú)菌移樣管取出2 mL處理后樣品由加樣孔緩慢加入反應(yīng)盒內(nèi)。③測(cè)試：打開電腦和Gene-Xpert檢測(cè)儀的電源開關(guān)，運(yùn)行Gene-Xpert操作軟件開始測(cè)試。④在電腦上閱讀結(jié)核分枝桿菌及耐藥結(jié)果。

1.4 結(jié)核分枝桿菌羅氏培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)：①實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備及標(biāo)本處理：將培養(yǎng)管室溫放置5～10 min，拭去管外壁的凝集水，在培養(yǎng)基斜面背面標(biāo)記序號(hào)，患者姓名，日期。取無(wú)菌的前處理管標(biāo)記患者姓名。用無(wú)菌吸管吸取痰標(biāo)本1～3 mL至前處理管中，視標(biāo)本性狀加1～2倍體積4%氫氧化鈉溶液，渦旋震蕩30～60 s后開始計(jì)時(shí)15 min，室溫靜置。②接種：棄掉凝固水，用無(wú)菌管吸取前處理的痰標(biāo)本，接種0.1 mL至培養(yǎng)基斜面，擰緊管蓋，放在斜面架上，保持斜面水平向上，37 ℃孵箱，24 h后，將培養(yǎng)管直立，繼續(xù)培養(yǎng)。③定期觀察生長(zhǎng)情況。

2 結(jié) 果

2.1 GeneXpert檢測(cè)實(shí)驗(yàn)與傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)結(jié)果的比較：116份痰液標(biāo)本，結(jié)果有108份結(jié)果相符，符合率為93.1%?；蛐酒瑢?shí)驗(yàn)未檢出的標(biāo)本跟傳統(tǒng)培養(yǎng)的快速生長(zhǎng)菌株相吻合（后經(jīng)南通疾控確診為非結(jié)核分枝桿菌）?？梢?jiàn)準(zhǔn)確率很高。見(jiàn)表1。

表1 GeneXpert檢測(cè)實(shí)驗(yàn)與傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)結(jié)果的比較

2.2 GeneXpert檢測(cè)與藥敏試驗(yàn)對(duì)利福平耐藥檢測(cè)結(jié)果（數(shù)據(jù)來(lái)自南通疾控中心）的比較：108株結(jié)核分枝桿菌分離株，采用GeneXpert檢測(cè)和藥敏試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平的耐藥性，其中前者有8例耐藥例，后者有7例耐藥，其他都為敏感，符合率為97.2%。見(jiàn)表2。

表2 GeneXpert檢測(cè)與藥敏試驗(yàn)對(duì)利福平耐藥檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

結(jié)核病傳統(tǒng)的檢測(cè)方式是藥敏試驗(yàn)，通過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)試驗(yàn)的方式對(duì)結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行檢測(cè)[3]。藥敏試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的最大問(wèn)題在于，需要過(guò)長(zhǎng)的時(shí)間導(dǎo)致在臨床實(shí)踐中的應(yīng)用價(jià)值較低[4]?；蛐酒夹g(shù)被用于檢測(cè)基因的突變，可以快速檢測(cè)多個(gè)基因的突變位點(diǎn)及其類型，是檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的有效檢測(cè)方[5]。

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，基金芯片被越來(lái)越多的應(yīng)用于結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè)中。吳國(guó)蘭[6]等探討基因芯片對(duì)結(jié)核分枝桿菌的診斷價(jià)值和耐藥性分析，結(jié)果顯示基因芯片對(duì)結(jié)核分枝桿菌的診斷結(jié)果與藥敏試驗(yàn)結(jié)果完全相符，對(duì)利福平耐藥性的診斷符合率為93.7%，表明基因芯片技術(shù)對(duì)結(jié)核分枝桿菌及其利福平耐藥性的檢測(cè)具有極高的準(zhǔn)確性。耿紅[7]等探討基因芯片檢測(cè)結(jié)核分支桿菌對(duì)利福平耐藥性的診斷效果，結(jié)果顯示基因芯片與藥敏試驗(yàn)相比，對(duì)利福平的總靈敏度為91%，特異度為96%，表明基因芯片技術(shù)檢測(cè)利福平耐藥性具有良好的診斷效果。李曉非[8]等評(píng)價(jià)基因芯片對(duì)結(jié)核分枝桿菌的診斷價(jià)值，結(jié)果顯示基因芯片技術(shù)與培養(yǎng)法比較，對(duì)結(jié)核分枝桿菌的診斷符合率為100%，對(duì)利福平耐藥性的診斷符合率為94.5%，表明基因芯片可以準(zhǔn)確診斷結(jié)核分枝桿菌，并能快速檢測(cè)利福平的耐藥性，具有巨大的發(fā)展空間。本研究顯示，基因芯片技術(shù)與藥敏試驗(yàn)比較，對(duì)結(jié)核分枝桿菌的診斷符合率為91.8%，對(duì)利福平耐藥性的診斷符合率為90.5%，與以上研究結(jié)果相符。

基因芯片是通過(guò)將探針固定在基片上，將樣本核酸進(jìn)行雜交，通過(guò)探針?lè)肿拥碾s交信號(hào)強(qiáng)度來(lái)獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。這一檢測(cè)方法可以對(duì)樣品進(jìn)行大量序列的檢測(cè)分析，與傳統(tǒng)的低效率檢測(cè)方式相比，大大提高了檢測(cè)的效率。尤其是在檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的耐藥性方面，耗費(fèi)的時(shí)間不超過(guò)3 d，卻可以進(jìn)行大量樣本的試驗(yàn)，且準(zhǔn)確率較高，具有廣闊的應(yīng)用前景。但基因芯片技術(shù)也存在一定的缺陷，不能檢測(cè)所有的基因突變位點(diǎn)，可能對(duì)耐藥檢出率造成一定的影響，因此在目前尚不能完全取代藥敏試驗(yàn)，但隨著科學(xué)的發(fā)展和技術(shù)的改進(jìn)，基因芯片技術(shù)將更加完善，檢出結(jié)果將更為可靠。

綜上，GeneXpert檢測(cè)可以快速準(zhǔn)確的鑒定結(jié)核分枝桿菌，同時(shí)對(duì)利福平耐藥性檢測(cè)具有良好的敏感性和特異性，值得臨床應(yīng)用和推廣。

[1] 王勝芬,趙冰,宋媛媛,等.我國(guó)耐藥結(jié)核病的危險(xiǎn)因素——2007年全國(guó)結(jié)核病耐藥基線調(diào)查資料分析[J].中國(guó)防癆雜志,2013, 35(4):221-226.

[2] 張偉.基因芯片與傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)核分支桿菌藥敏結(jié)果分析[J].安徽醫(yī)學(xué),2015,36(12):1527-1529.

[3] 黃自坤,熊國(guó)亮,姜碧霞,等.顯微鏡觀察藥敏檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌耐藥性研究[J].重慶醫(yī)學(xué),2013,42(19):2194-2197.

[4] 王浩,趙青,陳妹紅,等.Sensititre(R)結(jié)核藥敏板檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌藥敏的方法學(xué)研究[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2016,37(2):187-190.

[5] 孫炳奇,張娟,孫嬌,等.基因芯片技術(shù)檢測(cè)結(jié)核桿菌耐藥的臨床研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2014,18(3):434-436.

[6] 吳國(guó)蘭,陳曉紅,翁麗珍,等.基因芯片技術(shù)在鑒定分枝桿菌屬及早期診斷耐藥結(jié)核中的價(jià)值分析[J].中國(guó)醫(yī)刊,2016,51(5):44-47.

[7] 耿紅,李永文,李新旭,等.中國(guó)開展基因芯片檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌對(duì)異煙肼和利福平耐藥性的Meta分析[J].中華傳染病雜志,2014, 32(6):357-363.

[8] 李曉非,梁桂亮,普冬,等.基因芯片技術(shù)在分枝桿菌菌種鑒定和結(jié)核耐藥性檢測(cè)中的應(yīng)用及評(píng)價(jià)[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2015,19(2): 204-207.

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1671-8194（2017）12-0175-02