張婷婷，蔣希成，吳鑫宇，陸雪健，滕堯，張樹峰

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2.寧波大榭開發(fā)區(qū)醫(yī)院，浙江 寧波 315800；3.承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000)

澤瀉湯加味方對(duì)高鹽條件下Dahl大鼠高血壓調(diào)節(jié)及腎功能的保護(hù)作用

張婷婷1，蔣希成1，吳鑫宇1，陸雪健1，滕堯2，張樹峰3*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2.寧波大榭開發(fā)區(qū)醫(yī)院，浙江 寧波 315800；3.承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000)

目的：探討澤瀉湯加味方對(duì)高鹽條件喂養(yǎng)下Dahl大鼠血壓調(diào)節(jié)及腎保護(hù)作用研究。方法：60只Dahl大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、纈沙坦組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組，每組10只。采用8%NaCl高鹽飼料自然喂養(yǎng)鹽敏感性大鼠(Dahl salt-sensitive rat)，給予高鹽飲食4周，正常組給予常規(guī)飼料。測定血壓，藥物干預(yù)4 周后，全自動(dòng)生化儀檢測血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)的變化。結(jié)果：用藥4周后，與模型組相比較，其余各組血壓均有明顯下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。與空白對(duì)照組相比，模型組、中藥中劑量、中藥高劑量組的BUN升高(P<0.01或P<0.05)；同空白對(duì)照組比較，中藥中劑量組Scr降低(P<0.05),其余組無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論:澤瀉湯加味方對(duì)高鹽條件喂養(yǎng)下的Dahl大鼠具有一定的降壓作用，且對(duì)其腎功能有間接保護(hù)作用。

Dahl大鼠;高鹽條件喂養(yǎng);鹽敏感性高血壓;澤瀉湯加味方

高血壓是一種全球性的常見病、多發(fā)病，嚴(yán)重威脅著人類健康，世界各國的高血壓患病率高達(dá)10%～20%?！吨袊哐獕悍乐沃改稀?第3版)提出食鹽攝入量與高血壓發(fā)生密切相關(guān)，鹽敏感性高血壓高達(dá)60%[1]。澤瀉湯加味方由漢代·張仲景《金匱要略》澤瀉湯加澤蘭、石菖蒲組成，具有利水泄?jié)帷⒔∑⒒?、活血化瘀之功效。前期臨床研究證實(shí)，澤瀉湯加味方在臨床上治療鹽敏感性高血壓作用效果顯著[2]。本文通過研究具有鹽敏感的高血壓遺傳性的Dahl大鼠作為動(dòng)物模型，探討澤瀉湯加味方的調(diào)節(jié)血壓及對(duì)血清中BUN、Scr的作用，進(jìn)而闡述其降壓及腎保護(hù)的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥物

澤瀉湯加味方購自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，處方由澤瀉、白術(shù)、澤蘭、石菖蒲四味藥物組成。上四味加8倍量水浸泡4 h，加熱煎煮0.5 h，過濾，藥渣再加4倍水，煎煮0.5 h，過濾，2次過濾藥液合并，濃縮制成濃度為1∶1(即1 ml水煎劑含1 g生藥)的水煎劑備用。置于-40℃凍室中冰凍保存。代文(纈沙坦)片，諾華制藥有限公司，實(shí)驗(yàn)時(shí)研成細(xì)粉用含5%的羧甲基纖維素鈉蒸餾水配置成所需濃度的混懸液。含5%的羧甲基纖維素鈉蒸餾水溶液。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

3周齡Dahl雄性大鼠，體質(zhì)量80～100 g，SPF級(jí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(津)2012-0001。飼養(yǎng)于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全評(píng)價(jià)中心的屏障系統(tǒng)中。

1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器

BP-6動(dòng)物無創(chuàng)血壓測試儀(成都泰盟科技有限公司)。

1.1.4 動(dòng)物飼料

8% NaCl高鹽純化飼料購于開源動(dòng)物飼料(常州)有限公司，批號(hào)16030601(A2)。正常飼料購于北京科奧協(xié)力飼料有限公司，SPF級(jí)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組及造模

60只Dahl大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只。即空白對(duì)照組、模型組、纈沙坦組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組。除空白對(duì)照組給予正常飼料外，其余五組均給予8% NaCl高鹽純化飼料，喂養(yǎng)4周。第5周開始，分別給于藥物干預(yù)，并全部給予正常飼料直至第8周。

1.2.2 給藥方法

造模4周后給藥干預(yù)，空白對(duì)照組及模型組給予等體積的含5%羧甲基纖維素鈉蒸餾水灌胃，纈沙坦組給予纈沙坦7.2 mg/(kg·d)灌胃(研磨，含5%羧甲基纖維素鈉的蒸餾水溶解)，中藥低劑量組5.4 g/(kg·d)灌胃，中藥中劑量組10.8 g/(kg·d)灌胃，中藥高劑量組21.6 g/(kg·d)灌胃。

1.2.3 血壓測量

采用無創(chuàng)尾套法測定清醒大鼠收縮壓(SBP)，每次測量時(shí)記錄3次取平均值。給藥前、給藥2周、給藥4周末各測定一次血壓，每次服藥后2 h開始測量。

1.2.4 BUN、Scr的檢測

給藥4周后，用10%水合氯醛腹腔內(nèi)給藥麻醉，腹主動(dòng)脈取血，離心4 000 r/min，5 min，取血漿，用日立7180全自動(dòng)生化分析儀器檢測BUN、Scr。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組Dahl大鼠不同時(shí)間檢測尾動(dòng)脈收縮壓的變化情況比較

如表1所示，給藥前，模型組、纈沙坦組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組大鼠的收縮壓明顯高于空白對(duì)照組(P<0.01)，提示模型成功。用藥2周時(shí)與模型組相比，各用藥組血壓有所下降，纈沙坦組(P<0.05)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各中藥組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。用藥4周時(shí)與模型組比較，各用藥組與模型組比較血壓下降明顯，有顯著性差異(P<0.01)。

表1 各組Dahl大鼠不同時(shí)間收縮壓的變化

注：與空白照組比較，△P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01。

2.2 各組Dahl大鼠干預(yù)4周后BUN、Scr的變化情況比較

如表2所示，與空白對(duì)照組比較，用藥4周后，模型組、中藥中劑量組、中藥高劑量組血清中BUN升高(P<0.01或P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與空白對(duì)照組比較，中藥中劑量組Scr降低(P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他組無顯著性差異。

表2 各組Dahl大鼠藥物干預(yù)4周后BUN、Scr水平比較

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

在日常飼養(yǎng)中我們發(fā)現(xiàn)，通過對(duì)Dahl大鼠的喂養(yǎng)，高鹽喂養(yǎng)的大鼠飲水量明顯高于空白對(duì)照組，且隨著血壓的升高，除空白對(duì)照組正常飲食外，其余各組高鹽飲食大鼠呈現(xiàn)易激惹狀態(tài)。

3 討論

澤瀉湯見于《金匱要略》痰飲咳嗽病脈證并治第十二篇，用于治療痰飲停聚，清陽不升之頭目昏眩。澤瀉湯加味方在澤瀉湯原有藥物澤瀉、白術(shù)的基礎(chǔ)上加澤蘭、石菖蒲。分析以上四味藥物的性、味、歸經(jīng)及化學(xué)成分和現(xiàn)代藥理研究進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)四味藥物均有一定的利水、降壓效果。澤瀉：甘、寒，歸腎、膀胱經(jīng)，能利水滲濕、泄熱。澤瀉的化學(xué)成分主要為三萜類化合物、倍半萜類化合物、二萜類化合物、類脂和糖分等?，F(xiàn)代藥理研究表明澤瀉醇提物、水提物均具有利尿作用，24-乙酰澤瀉醇A為澤瀉的主要利尿成分[3]。白術(shù)：甘、苦、溫，歸脾、胃經(jīng)，能益氣健脾、燥濕利水、止汗、安胎。白術(shù)的主要化學(xué)成分為揮發(fā)油、內(nèi)酯類化合物、多糖、苷類成分、氨基酸及其他類化合物。對(duì)白術(shù)及其分離出來的單體進(jìn)行藥理研究，發(fā)現(xiàn)其具有腎保護(hù)、擴(kuò)張血管等作用[4]。澤蘭：苦、辛、微溫，歸肝、脾經(jīng)，能活血調(diào)經(jīng)、利水消腫。其主要化學(xué)成分為揮發(fā)油、黃酮苷、皂苷、酚類、糖類及鞣質(zhì)等?，F(xiàn)代藥理研究表明澤蘭具有活血化瘀，行水消腫的功效，臨床用于治療月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉、痛經(jīng)、產(chǎn)后瘀血腹痛、水腫等[5]。石菖蒲：辛、苦、溫，歸心、胃經(jīng)，能開竅醒神、化濕和胃、寧神益志。其主要化學(xué)成分為揮發(fā)性成分和非揮發(fā)性成分，現(xiàn)代藥理研究表明，菖蒲揮發(fā)油有短暫的降低血壓作用及抑制單胺氧化酶作用[6]。高血壓病程中普遍存在水濁內(nèi)結(jié)、痰濕阻滯、瘀血阻絡(luò)病因病機(jī)[7-10]，基于以上病因病機(jī)同上述四味藥物的性味歸經(jīng)及功效，澤瀉湯加味方可共奏利水泄?jié)?、祛痰開竅之功效?，F(xiàn)代藥理研究表明利尿劑為治療高血壓的重要藥物，澤瀉湯加味方的降壓作用可能與其利水泄?jié)嶂π芮邢嚓P(guān)。

Dahl大鼠是一種具有高血壓遺傳特性的近交系大鼠，這種品系的大鼠對(duì)鹽負(fù)荷敏感，隨著喂養(yǎng)時(shí)給鹽濃度的增加、隨時(shí)間增長血壓升高。此類動(dòng)物模型能復(fù)制出臨床上對(duì)鹽敏感的患者的情況，臨床上因遺傳和環(huán)境因素的影響，部分患者對(duì)鹽的攝入敏感，隨著鹽攝入量這一環(huán)境因素的增加，高血壓的值可呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷膹?fù)制，在本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中顯示，纈沙坦與中藥澤瀉湯加味方對(duì)具有鹽敏感性的Dahl 動(dòng)大鼠均具有降壓作用，療效相當(dāng)，隨著用藥時(shí)間的持續(xù)而效果明顯?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，腎的水鈉代謝是鹽敏感性高血壓發(fā)生的主要機(jī)制[11]，鹽中的氯化鈉是主要的“環(huán)境因素”。鹽負(fù)荷后細(xì)胞內(nèi)鈉含量增加，體內(nèi)水鈉潴留，尿排鈉反應(yīng)延遲，堆積可造成高血壓的發(fā)病。高血壓可累及身體多個(gè)臟器的損傷，對(duì)于腎功能的影響是明顯的，高血壓可以引起腎功能損傷，尿素氮和血肌酐是反映腎功能的重要的指標(biāo)，高血壓腎損害早期出現(xiàn)腎小動(dòng)脈硬化，因此有效的抑制血壓可以保護(hù)腎功能。本實(shí)驗(yàn)顯示，與空白對(duì)照組相比較模型組、澤瀉湯加味方高劑量組可見BUN的升高，可見高鹽飲食可對(duì)腎功能有一定的影響。因此控制鹽的攝入量對(duì)治療鹽敏感性高血壓具有重要的意義，并且血壓的降低對(duì)腎功能亦有一定的保護(hù)作用。

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河北省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No.09276101D-20)；黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)科研基金面上項(xiàng)目(No.201512)

張婷婷(1988-)，女，助教，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)2014級(jí)中西醫(yī)結(jié)合臨床專業(yè)博士研究生,主要研究方向：中藥治療鹽敏感性高血壓。

張樹峰*(1955-)，男，教授，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)博士研究生導(dǎo)師,主要研究方向：中藥治療急慢性腎小球腎炎、中藥藥理與毒理。

2016-10-20

R285.5

A

1002-2406(2017)03-0044-03

修回日期：2016-11-05