樊紅軍 王 輝* 谷 杰 張 航 楊樹東

（長(zhǎng)春市食品藥品檢驗(yàn)中心，吉林 長(zhǎng)春 130012）

草蓯蓉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

樊紅軍 王 輝* 谷 杰 張 航 楊樹東

（長(zhǎng)春市食品藥品檢驗(yàn)中心，吉林 長(zhǎng)春 130012）

目的建立草蓯蓉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法用薄層色譜（TLC）法鑒別草蓯蓉藥材；以高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定藥材中齊墩果酸的含量。結(jié)果通過TLC，能有效的進(jìn)行區(qū)別，易于識(shí)別。齊墩果酸進(jìn)樣量在0.1～2.5 μg 范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系（r＝1.000）；平均回收率為99.0%，RSD＝1.8%（n＝6）。結(jié)論所建標(biāo)準(zhǔn)可有效控制草蓯蓉的質(zhì)量。

草蓯蓉；齊墩果酸；薄層色譜法；高效液相色譜法

草蓯蓉為列當(dāng)科草蓯蓉屬多年生草蓯蓉的干燥全草[1]，寄生于樺木科赤楊屬Alnus植物的根上草本植物。 長(zhǎng)白山地區(qū)的“地道藥材”和民間藥材，東北三寶之一。別名東北不老草，為國家二級(jí)保護(hù)植物[2]。近年在草蓯蓉中發(fā)現(xiàn)含有多糖、草蓯蓉苷、草蓯蓉環(huán)烯醚萜苷等化學(xué)成分。具有補(bǔ)腎壯陽、腰膝冷痛、腎虛陽萎、滋陰補(bǔ)陽、膀胱炎和潤腸通便等[3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明在提高人體免疫、抗腫瘤[4-5]、抗炎、保護(hù)肝臟[6-10]等方面有療效。目前未對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行收載，本文通過TLC及高效液相色譜法，對(duì)草蓯蓉及其相似品鎖陽、肉蓯蓉進(jìn)行同步考察，建立草蓯蓉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)其質(zhì)量控制有重要意義。

1 儀器、試藥及對(duì)照藥材

1.1 儀器：LC-1100 HPLC高效液相色譜儀；D101-1A干燥箱；GR-202電子分析天平；色譜柱Dima C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；硅膠GF254（生產(chǎn)廠家：青島海洋化工廠，規(guī)格200×200 mm批號(hào)：20140108 ）。

1.2 試藥：甲苯 （天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司，批號(hào)20151120，分析純）；乙酸乙酯（生產(chǎn)廠家：北京化工廠，批號(hào)：20160107，分析純）；醋酸（生產(chǎn)廠家：天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司，批號(hào)20130520，分析純）；甲醇（生產(chǎn)廠家：北京化工廠，批號(hào)：20150514，分析純）；乙腈（生產(chǎn)廠家Bioreacs，LOT：908765，CAS：75-05-8，色譜醇）；磷酸（生產(chǎn)廠家北京化工廠，批號(hào)：20140625，分析純）；水（超純水）。

1.3 對(duì)照品：肉蓯蓉（提供：中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121101-200402）；鎖陽（提供：中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121393-200401）；齊墩果酸（提供：中國藥品生物制品檢定所 批號(hào)：110705-200306，純度為94.9%）。

2 樣品的來源

采集和購買，共收集10批樣品，經(jīng)吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)韓梅教授鑒定，具體來源見表1。

3 草蓯蓉的TLC鑒別

取樣品粉末1 g，加入甲醇100 mL，超聲提取1 h，過濾，濾液濃縮至約2 mL，作為供試品溶液。另取草蓯蓉自采7號(hào)樣品、肉蓯蓉、鎖陽各1 g作為對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2015年版通則0502）試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～10 μL、對(duì)照藥材溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。此方法能區(qū)別草蓯蓉及其類似品鎖陽肉蓯蓉[11]的鑒別。同時(shí)10樣品薄層色譜圖一致，10批樣品紫外檢視后，噴以10%硫酸乙醇試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，薄層色譜圖一致。薄層色譜圖見圖1。結(jié)果此方法能作為草蓯蓉薄層鑒別方法。

表1 10份樣品來源

圖1 TLC色譜圖[A紫外光燈（254 nm）（1為草蓯蓉樣品；2為肉蓯蓉；3為鎖陽）；B紫外光燈（254 nm）。（1～10為1-10號(hào)樣品點(diǎn)樣10 μL；11為1號(hào)樣點(diǎn)樣5 μL；12為1號(hào)樣點(diǎn)樣10 μL；13～15為1號(hào)樣的3次重復(fù)）；C 10%硫酸乙醇試液日光（1～10為1～10號(hào)樣品點(diǎn)樣10 μL；11為1號(hào)樣點(diǎn)樣5μL；12為1號(hào)樣點(diǎn)樣10 μL；13～15為1號(hào)樣的3次重復(fù)）]

表2 樣品回收率

4 含量測(cè)定

4.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：精密稱取齊墩果酸對(duì)照品適量，置100 mL量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。（每1 mL中含齊墩果酸0.0996 mg）。

4.2 供試品溶液的制備：取本品粉末（過二號(hào)篩）約0.5 g，精密稱定，加入甲醇100 mL，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）1 h，冷卻至室溫，搖勻，濾過，用甲醇洗滌提取器，每次20 mL，分3次洗滌，濾過，合并濾液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙夂?，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

4.3 色譜條件。色譜柱：Dima C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.5% 磷酸溶液（85∶15）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；柱溫：室溫 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖（A.溶劑空白；B.齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品；C.草蓯蓉藥材）

4.4 線性關(guān)系考察：分別精密吸取1.0 μL、5.0 μL、10 μL、15 μL、25 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，測(cè)得回歸方程為Y=426.33X+28.531，相關(guān)系數(shù)r=1.000（n=6）。結(jié)果表明，齊墩果酸進(jìn)樣量在0.1～2. μg，具有良好的線性關(guān)系。

4.5 精密度試驗(yàn)：精密吸取同一標(biāo)準(zhǔn)品溶液，注入液相色譜儀，連續(xù)測(cè)定6次，RSD為0.1%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明儀器精密度良好。

4.6 最低檢測(cè)限測(cè)定：按信噪比等于3（S/N=3），作為最低檢測(cè)限，測(cè)得該方法中齊墩果酸的檢測(cè)限為12.5 ng/mL。

4.7 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)的樣品，精密稱定6份，分別依法提取制成供試液。按正文方法測(cè)定其含量。RSD為2.2%，重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表明，本法重復(fù)性良好。

4.8 穩(wěn)定性考察：精密吸取供試品溶液10 μL，每隔2 h進(jìn)樣測(cè)定一次，共測(cè)定24 h，計(jì)算含量，RSD為0.2%，穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果，供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

4.9 加樣回收率試驗(yàn)：稱取已知含量0.14 mg/g）的樣品6份，每份約0.5 g，分別精密加入對(duì)照品貯備液（約0.1 mg/mL）3.0 mL按正文方法制備及測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，測(cè)得6次平均回收率為99.0%，RSD為1.8%，試驗(yàn)結(jié)果表明：供試品回收率較高，RSD在規(guī)定范圍內(nèi)，結(jié)果見表2。

4.10 樣品含量測(cè)定：按照上述色譜條件及方法，測(cè)定10個(gè)不同產(chǎn)地草蓯蓉藥材的含量，產(chǎn)地見表1，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果

5 討 論

在TLC鑒別項(xiàng)下的供試品展開條件試驗(yàn)中，筆者曾分別用甲醇∶醋酸∶水（2∶1∶7）和甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸（20∶4∶0.5）展開劑分別在硅膠G板和硅膠GF254板展開，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸（20∶4∶0.5）分離點(diǎn)多，分離效果好。硅膠G板展開發(fā)現(xiàn)，草蓯蓉與偽品鑒別不明顯，而在硅膠GF254展開能有效鑒別草蓯蓉及其相似品鑒別明顯，同時(shí)斑點(diǎn)穩(wěn)定，不同產(chǎn)地斑點(diǎn)一致，可作為草蓯蓉薄層色譜質(zhì)量控制方法，同時(shí)能有效區(qū)別真?zhèn)巍?/p>

在HPLC含量測(cè)定項(xiàng)下筆者曾考察不同提取溶劑甲醇、60%乙醇和80%乙醇，不同提取方法回流和超聲，通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果選著上述提取方法?？疾觳煌鲃?dòng)相分別為甲醇-0.5% 磷酸溶液（90∶10）、甲醇-0.5% 磷酸溶液（80∶20）、甲醇-水（85∶15）和乙腈-0.5% 磷酸溶液（85∶15），發(fā)現(xiàn)乙腈-0.5% 磷酸溶液（85∶15）沒有干擾，分離效果好?？勺鳛椴萆惾刭|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量控制方法。草蓯蓉不良反應(yīng)小[12]，同時(shí)為鹿鞭回春膠囊的原藥材，通過對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究發(fā)現(xiàn)草蓯蓉同鎖陽及肉蓯蓉的成分有差別，能夠真?zhèn)舞b別。草蓯蓉有不可替代的功效。

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Study on Quality Standard of Bosehniakia rossica

FAN Hong-jun, WANG Hui, GU Jie, ZHANG hang, YANG Shu-dong
(Changchun Institute for Food and Drug Control, Changchun,130012, China)

ObjectiveTo establish the quality standard of Bosehniakia rossica.MethodsIt was identified by TLC, at the same time the content of oleanolic acid in Bosehniakia rossica was determined by HPLC.ResultsThe TLC spots of syringin and echinocystic acid were clear and easy to identify. The linear range of ginsenoside in Bosehniakia rossica were 0.1-2.5 μg(r=1.000)with an average recovery of 99.0%(RSD=1.8%, n=6).ConclusionEstablished quality standard can be used for the quality control of Bosehniakia rossica.

Bosehniakia rossica.; Oleanolic acid; TLC; HPLC

R282.710.3

B

1671-8194（2017）12-0004-02

吉林省中藥材地方標(biāo)準(zhǔn)[吉食藥監(jiān)科[2015]304號(hào)]

*通訊作者:E-mail: wanghui20141111@163.com