楊佳，馮陽春，黃艷春

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 檢驗(yàn)科，新疆 烏魯木齊 830011)

·論 著·

抗原致敏DC與CIK共培養(yǎng)體外抗小細(xì)胞肺癌的研究

楊佳，馮陽春，黃艷春

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 檢驗(yàn)科，新疆 烏魯木齊 830011)

目的：觀察小細(xì)胞肺癌NCI- H209細(xì)胞株抗原致敏樹突細(xì)胞(DC)與同源細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷(CIK)細(xì)胞共培養(yǎng)后的DC- CIK細(xì)胞體外對(duì)小細(xì)胞肺癌NCI- H209的殺傷活性，為小細(xì)胞肺癌的特異性細(xì)胞免疫治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：將健康成人外周血單個(gè)核細(xì)胞來源的DC經(jīng)NCI- H209細(xì)胞株抗原致敏后與同源CIK細(xì)胞共培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)分3組：NCI- H209抗原致敏DC與CIK共培養(yǎng)組(A組)、未致敏DC與CIK共培養(yǎng)組(B組)和單純CIK組(C組)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC及CIK免疫表型,使用CCK- 8法檢測(cè)3組效應(yīng)細(xì)胞對(duì)NCI- H209細(xì)胞的殺傷活性。結(jié)果：體外誘導(dǎo)培養(yǎng)出的抗原致敏DC和未致敏DC經(jīng)流式檢測(cè)，均高表達(dá)CD80、CD86、CD11c。CIK細(xì)胞隨著培養(yǎng)天數(shù)的延長(zhǎng)主要效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD8+、CD3+CD56+表達(dá)持續(xù)升高，至第14天流式檢測(cè)結(jié)果示：A組和B組CD3+CD8+表型分別為71.8%和65.2%,C組CD3+CD56+達(dá)到31.1%。CCK- 8法檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相同效靶比下A組對(duì)NCI- H209細(xì)胞株的殺傷活性明顯高于B、C組，且隨著效靶比增加,其殺傷效應(yīng)亦顯著增加。效靶比為5∶1時(shí)A組殺傷率為(68.82±2.55)%，B組殺傷率為(56.64±2.06)%，C組殺傷率為(55.98±2.63)%(P=0.007)；效靶比為10∶1時(shí)A組殺傷率為(74.06±2.64)%，B組殺傷率為(60.11±2.74)%，C組殺傷率為(58.34±1.88)%(P=0.005)；效靶比為20∶1時(shí)A組殺傷率為(79.17±3.51)%，B組殺傷率為(65.33±2.48)%，C組殺傷率為(60.47±2.85)%,(P=0.001)。結(jié)論：用NCI- H209細(xì)胞裂解物分離的混合蛋白致敏DC可以提高CIK細(xì)胞殺傷NCI- H209細(xì)胞效應(yīng),為小細(xì)胞肺癌的綜合治療提供新的策略。

小細(xì)胞肺癌； 樹突狀細(xì)胞- 細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞； 過繼性細(xì)胞免疫治療

小細(xì)胞肺癌是人類常見的惡性實(shí)體瘤之一，多數(shù)患者確診時(shí)已發(fā)生轉(zhuǎn)移，中位總生存期僅8～11個(gè)月，5年生存率不足5%[1- 3]。雖然一線化療后可得暫時(shí)緩解，但大多數(shù)患者短期內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)后放、化療效果均不理想。傳統(tǒng)的治療手段并未使患者獲得進(jìn)一步的生存受益，小細(xì)胞肺癌的治療已處于瓶頸，迫切需要新的治療策略來提高療效[4- 5]。

近幾年來，過繼性細(xì)胞免疫治療日益受到關(guān)注且發(fā)展前景廣為業(yè)界看好，特別是特異性細(xì)胞免疫治療因其強(qiáng)大的抗腫瘤作用和明顯的療效已成為國(guó)際研究的熱點(diǎn)，但目前針對(duì)小細(xì)胞肺癌的特異性細(xì)胞免疫治療尚未見報(bào)道。由于絕大多數(shù)小細(xì)胞肺癌患者因沒有手術(shù)機(jī)會(huì)而無法得到大量自身腫瘤組織作為抗原，因此，本研究嘗試采用小細(xì)胞肺癌株NCI- H209細(xì)胞裂解物作為抗原致敏樹突細(xì)胞(DC)，再與同源細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷(CIK)細(xì)胞共培養(yǎng)，通過體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)致敏后的DC- CIK細(xì)胞對(duì)小細(xì)胞肺癌的殺傷作用，為小細(xì)胞肺癌特異性細(xì)胞免疫治療提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

X- VIVO15無血清培養(yǎng)基購(gòu)自LONZA公司，重組人細(xì)胞因子(rhGM- CSF、rhIL- 4、rhTNF- α、rhIL- 1α)購(gòu)自Peprotech公司，胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Hyclon公司，rhIL-2購(gòu)自北京四環(huán)生物制藥有限公司，anti- CD3McAb購(gòu)自德國(guó)miltenyiBiotec公司，IFN- γ購(gòu)自上海凱茂生物醫(yī)藥有限公司，人外周血淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)自天津市灝洋生物制品科技有限公司，鼠抗人CD3- FITC、CD8- PE、CD56- PE、CD80- PE、CD86- FITC、CD- 11c- FITC均購(gòu)自美國(guó)Beckman公司，CCK- 8試劑盒購(gòu)自日本同仁化學(xué)研究所，外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)分離自健康志愿者外周血，NCI- H209細(xì)胞株和A549細(xì)胞株源自美國(guó)ATCC。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 將效應(yīng)細(xì)胞分為3組：A組為NCI- H209細(xì)胞裂解物分離的混合蛋白致敏的DC與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)，B組為未經(jīng)致敏的DC與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)，C組為單純CIK。

1.2.2 NCI- H209細(xì)胞裂解物分離的混合蛋白抗原的制備 參考劉暢等[6]提取抗原的方法，將小細(xì)胞肺癌NCI- H209細(xì)胞株在含10%胎牛血清的RPMI- 1640中常規(guī)培養(yǎng)傳代，消化收集1×107個(gè)NCI- H209細(xì)胞，生理鹽水洗滌2遍，加入1 ml單純RPMI- 1640放入液氮中，10 min后迅速取出放入37 ℃水浴中，待其完全融化后再次放入液氮中，反復(fù)3次。離心除去細(xì)胞碎片，微孔濾膜過濾，收集濾液于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 DC的誘導(dǎo)培養(yǎng) 取健康成人外周血30 ml經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液密度梯度分離得到PBMC，用X- VIVO15無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并平均分至2個(gè)25 cm2培養(yǎng)瓶中，37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱靜置4 h后收集非貼壁細(xì)胞(用于CIK細(xì)胞培養(yǎng))，貼壁細(xì)胞加入含rhGM- CSF 1×106U·L-1、rhIL- 45×105U·L-1的X- VIVO15無血清培養(yǎng)基。隔天半量換液、補(bǔ)充細(xì)胞因子，第7天每瓶加入rhTNF- α 100 μg·L-1(2×106U·L-1)，倒置相差顯微鏡及電鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)。

1.2.4 CIK細(xì)胞的培養(yǎng)擴(kuò)增 收集步驟1的非貼壁細(xì)胞，調(diào)整密度為(3～5)×106ml-1，懸于含IFN- γ 1 000 U·ml-1的X- VIVO15無血清培養(yǎng)基中，放置37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第2天加入細(xì)胞因子rhIL- 1α 1 ng·ml-1、anti- CD3McAb 100 ng·ml-1和rhIL- 2 1 000 U·ml-1。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況適時(shí)補(bǔ)充培養(yǎng)基。

1.2.5 小細(xì)胞肺癌抗原致敏DC DC誘導(dǎo)培養(yǎng)的第6天加入腫瘤凍融抗原100 μl，混勻，繼續(xù)于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第7天常規(guī)加入rhTNF- α 2×106U·L-1，第8天收獲成熟的DC。

1.2.6 DC與CIK細(xì)胞共培養(yǎng) 培養(yǎng)第8天，收集NCI- H209細(xì)胞凍融抗原致敏過的DC、未致敏的DC、CIK，分別計(jì)數(shù)，按DC∶CIK=1∶50～100比例將DC按實(shí)驗(yàn)分組分別與CIK細(xì)胞混合共培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含rhIL- 2 1 000U·ml-1的X-VIVO15無血清培養(yǎng)基，觀察DC與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后的增殖情況。

1.2.7 免疫表型的檢測(cè) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC(第0、8天)的免疫表型CD80、CD86、及CD11c。檢測(cè)CIK細(xì)胞(第0、14天)的免疫表型CD3、CD4、CD8、CD56。步驟：收獲DC及CIK細(xì)胞，PBS洗滌重懸，調(diào)密度為2×109L-1，取細(xì)胞懸液50μl加入Ep管內(nèi)，加入FITC標(biāo)記的上述鼠抗人單抗，混勻，4 ℃避光孵育30min，PBS洗滌2次，PBS重懸，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，分析軟件為Cellquse。

1.2.8 殺傷活性的檢測(cè) 以CCK- 8比色法檢測(cè)3組不同的效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷活性，靶細(xì)胞分別為NCI-H209細(xì)胞(小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)、A549細(xì)胞(肺腺癌細(xì)胞)。將靶細(xì)胞濃度調(diào)整至5×105個(gè)·ml-1后接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔加入靶細(xì)胞100μl(5×104個(gè)細(xì)胞·孔-1)，實(shí)驗(yàn)孔按效靶比分別為5∶1、10∶1、20 ∶1加入效應(yīng)細(xì)胞，同時(shí)設(shè)效應(yīng)細(xì)胞對(duì)照孔，相同條件設(shè)5個(gè)復(fù)孔，37 ℃、5%CO2條件下混合培養(yǎng)24h，然后向每孔加入10μlCCK- 8溶液，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育4h，酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下讀取各孔吸光度值。殺傷活性(%)=[1- (實(shí)驗(yàn)孔OD值- 效應(yīng)細(xì)胞對(duì)照組OD值)/靶細(xì)胞對(duì)照組OD值]×100%

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)胞形態(tài)觀察

DC：從外周血分離的PBMC在培養(yǎng)瓶中靜置4 h 后鏡下見貼壁細(xì)胞為體積較小的單個(gè)圓形細(xì)胞，經(jīng)rhGM- CSF、rhIL- 4誘導(dǎo)后可見部分細(xì)胞體積不斷增大，且形態(tài)不規(guī)則。第7天加入rhTNF- α誘導(dǎo)成熟后大部分細(xì)胞半懸浮，表面出現(xiàn)樹突狀突起，呈典型DC形態(tài)。致敏DC和未致敏DC經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，結(jié)果顯示均高表達(dá)CD80、DC86、CD11c。見表1、圖1。

表1 第8天兩組DC流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果 %

圖1 Ag- DC高表達(dá)CD80、CD86、CD11c

CIK細(xì)胞：未貼壁PBMC經(jīng)IFN- γ、anti- CD3 McAb、IL- 1α、rhIL- 2誘導(dǎo)至第3天細(xì)胞開始聚集成團(tuán)，細(xì)胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則、胞體透亮，似葡萄串，隨著細(xì)胞培養(yǎng)天數(shù)的延長(zhǎng)細(xì)胞數(shù)量急劇增加，細(xì)胞團(tuán)越來越大，主要效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD8+、CD3+CD56+表達(dá)持續(xù)升高，至第14天3組細(xì)胞數(shù)量均超過3×109個(gè)，臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活率都在98%以上。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果示：A組和B組CD3+CD8+表型分別為71.8%和65.2%，C組CD3+CD56+達(dá)到31.1%。見表2，圖2、3。

表2 第14天各組細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果 %

圖2 Ag- DC- CIK高表達(dá)CD3+CD8+

圖3 CIK高表達(dá)CD3+CD56+

2.2 對(duì)NCI- H209細(xì)胞殺傷活力的體外測(cè)定

3組效應(yīng)細(xì)胞都在培養(yǎng)至第14天時(shí)進(jìn)行了對(duì)NCI- H209細(xì)胞殺傷作用的檢測(cè)，另外作為對(duì)照的A組還對(duì)A549細(xì)胞進(jìn)行殺傷作用檢測(cè)。結(jié)果顯示，各組效應(yīng)細(xì)胞都隨著效靶比的增高殺傷力增強(qiáng)，A組效應(yīng)細(xì)胞在不同效靶比時(shí)較B組和C組效應(yīng)細(xì)胞都具有較強(qiáng)的殺傷能力，B組效應(yīng)細(xì)胞在效靶比達(dá)到20∶1時(shí)殺傷作用較CIK細(xì)胞明顯增強(qiáng)(65.33±2.48vs60.47±2.85,P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。當(dāng)抗原致敏DC- CIK效應(yīng)細(xì)胞殺傷A549細(xì)胞時(shí)，殺傷作用一般，僅效靶比達(dá)到20∶1時(shí)作用較C組明顯增強(qiáng)，與B組表現(xiàn)出相似的殺傷作用。見表3。

表3 各組細(xì)胞殺傷活性比較%

a 與CIKvsNCI- H209組比，P<0.05; b 與DC- CIKvsNCI- H209組比，P<0.05

3 結(jié) 論

近年來腫瘤免疫治療取得顯著的進(jìn)步，其中對(duì)DC瘤苗和CIK細(xì)胞的研究最為常見。DC作為機(jī)體內(nèi)專職的抗原提呈細(xì)胞,在攝取、提呈抗原及激發(fā)后續(xù)特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)中發(fā)揮著不可替代的作用。在DC處理提呈抗原過程中,其表面分子CD80、CD86、HLA- DR的表達(dá)水平又起到重要的制約作用,直接關(guān)系到DC免疫激發(fā)的功能狀態(tài)。其中CD80、CD86作為DC激活T淋巴細(xì)胞過程中的重要共刺激分子作用尤為重要,其表達(dá)水平標(biāo)志著DC免疫激活能力的高低[7- 8]。

CIK細(xì)胞主要通過NKG2D受體途徑發(fā)揮溶解細(xì)胞效應(yīng)，清除腫瘤患者殘存的腫瘤細(xì)胞或腫瘤微病灶，可有效防止復(fù)發(fā)，是治療晚期惡性腫瘤又一重要選擇[9- 12]。DC負(fù)載自體腫瘤抗原后可誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性CIK細(xì)胞，發(fā)揮特異性抗腫瘤免疫效應(yīng)，目前在治療腎癌、卵巢癌、肺腺癌等臨床試驗(yàn)中均取得了較好的療效[13-15]。

負(fù)載特異性抗原的DC疫苗結(jié)合過繼細(xì)胞治療在科研和臨床的應(yīng)用具有巨大的潛力和良好的效果，但是小細(xì)胞肺癌沒有區(qū)別于正常組織的腫瘤特異性蛋白作為腫瘤抗原，并且絕大多數(shù)小細(xì)胞肺癌患者因沒有手術(shù)機(jī)會(huì)而無法得到大量的自身腫瘤組織來制備全細(xì)胞腫瘤抗原。因此，本實(shí)驗(yàn)采用小細(xì)胞肺癌株NCI- H209的細(xì)胞裂解物分離出的混合蛋白用來致敏DC，同時(shí)將抗原致敏的DC與同源的CIK細(xì)胞共培養(yǎng)，在體外的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證致敏DC- CIK細(xì)胞對(duì)NCI- H209的特異性應(yīng)答和殺傷NCI- H209能力。應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定免疫細(xì)胞表型的結(jié)果可以看出，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)具有殺傷活性的CD3+CD8+、CD3+CD56+免疫細(xì)胞明顯增加，且A組和B組的CD3+CD8+細(xì)胞占比較高，而C組CD3+CD56+免疫細(xì)胞占比較高，這可能與DC釋放IL- 2、IFN- γ、IL- 12等多種細(xì)胞因子促進(jìn)了CD3+CD8+細(xì)胞的增殖有關(guān)。體外殺傷試驗(yàn)結(jié)果在5∶1～20∶1的效靶比范圍內(nèi)A、B、C3組效應(yīng)細(xì)胞對(duì)NCI-H209均有殺傷作用，這種殺傷作用隨效靶比的增高而增強(qiáng)，而且A組殺傷率高于B、C組，證實(shí)用NCI-H209細(xì)胞裂解物分離的混合蛋白致敏DC可以提高CIK細(xì)胞的殺瘤效應(yīng)。

本研究初步探索了一種更為有效的治療小細(xì)胞肺癌的體細(xì)胞免疫治療方法，所獲得的抗原致敏DC-CIK細(xì)胞具有較強(qiáng)的抗腫瘤特異性和殺傷作用，為小細(xì)胞肺癌的綜合治療提供了新的策略。

[1]KRISTJANSENPE,HANSENHH.Managementofsmallcelllungcancer:asummaryoftheThirdInternationalAssociationfortheStudyofLungCancerWorkshoponSmallCellLungCancer[J].NatlCancerInst,1990,82(4):263- 266.

[2]MOSSAC,JACOBSONGM,WALKERLE,etal.SCG3transcriptinperipheralbloodisaprognosticbiomarkerforREST-deficientsmallcelllungcancer[J].ClinCancerRes,2009,15(1):274- 283.

[3]PEDERSENN,MORTENSENS,SORENSENSB,etal.Transcriptionalgeneexpressionprofilingofsmallcelllungcancercells[J].CancerRes,2003,63(8):1943- 1953.

[4]CLARKR，IHDEDC．Small-celllungcancer：treatmentprogressandprospects[J]．Oncology(WillistonPark)，1998，12(5)：647- 658．

[5]HURWITZJL，MCCOYF，SCULLINP，etal．Newadvancesinthesecond-linetreatmentofsmallcelllungcancer[J].Oncologis,2009,14(10):986- 994.

[6] 劉暢,王士勇,焦雪,等.抗原致敏的DC-CIK對(duì)前列腺癌細(xì)胞DU145殺傷的作用[J].解剖科學(xué)進(jìn)展,2012,3:222- 226.

[7]HOWARDCJ,HOPEJC,STEPHENSSA,etal.Co-stimulationandmod-ulationoftheensuingimmuneresponse[J].VetImmunolImmunopathol,2002,87(3- 4):123- 130.

[8]ASHIKAGAT,HOYAM,ITAGAKIH,etal.EvaluationofCD86expressionandMHCclassⅡmoleculeinternalizationinTHP- 1humanmonocytecellsaspredictiveendpointsforcontactsensitizers[J].ToxicolInVitro,2002,16(6):711- 716.

[9] YUANYING Y,LIZHI N,FENG M,et al.Therapeutic outcomes of combining cryotherapy,chemotherapy and DC- CIK immunotherapy in the treatment of metastatic non- small cell lung cancer[J].Cryobiology,2013,67(2):235- 240.

[10] RAJBHANDARY S,ZHAO M F,ZHAO N,et al.Multiple cytotoxic factors involved in IL- 21 enhanced antitumor function of CIK cells signaled through STAT- 3 and STAT5b pathways[J].Asian Pac J Cancer Prev,2013,14(10):5825- 5831．

[11] YANG B,WANG J,CAI L L,et al.Treatment of multiple solitary plasmacytomas with cytokine- induced killer cells[J].Cytotherapy,2014,16(2):278- 284.

[12] 李曼,孫載陽,陳寶安.細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué),2004,32(2):132- 135.

[13] ZHAN H L,GAO X,PU X Y,et al.A randomized controlled trial of postoperative tumor lysate- pulsed dendritic cells and cytokine- induced killer cells immunotherapy in patients with localized and locally advanced renal cell carcinoma[J].Chin Med J(Engl),2012,125(21):3771- 3777．

[14] KANDALAFT L E,CHIANG C L,TANYI J,et al.A Phase Ⅰ vaccine trial using dendritic cells pulsed with autologous oxidized lysate for recurrent ovarian cancer[J].J Transl Med,2013,11:149.

[15] 楊佳,顧國(guó)民,王秀麗,等.自體腫瘤抗原致敏DC- CIK聯(lián)合化療治療晚期肺腺癌的療效[J].中國(guó)腫瘤生物治療雜志,2016(1):83- 88.

(本文編輯：周蘭波)

Study on the co- culture of DC and CIKinvitroagainst small cell lung cancer

YANG Jia，F(xiàn)ENG Yang- chun，HUANG Yan- chun

(DepartmentofClinicalLaboratory，theAffiliatedTumorHospitalofXinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011,China)

Objective: To observe the dendritic cells(DC)- homologous cytokine induced killer(CIK) cellsinvitrokilling activity of small cell lung cancer NCI- H209 after the co- culture of the sensitized DC by the small cell lung cancer NCI- H209 cells antigen and CIK cells, provide the experimental basis for the treatment of small cell lung cancer of specific cellular immunity. Methods: The DC cells from healthy adult human peripheral blood mononuclear cells were sensitized by NCI- H209 cell line and co- cultured with CIK cells, the effector cells were divided into three groups: the sensitized DC by NCI- H209 antigen and CIK cells co- culture group(group A), the unsensitized DC and CIK cells co- culture group(group B), simple CIK group(group C). DC and CIK cells were detected by flow cytometry, and the cytotoxicity of three groups of effector cells to NCI- H209 cells was detected by CCK- 8 assay. Results:Invitroculture of antigen- sensitized DC and unsensitized DC were detected by flow cytometry, high expressions of CD80, CD86, CD11c were found. CIK cells with prolongation of culture days, CD3+CD8+, CD3+CD56+expressions of the main effector cells remained elevated, on the 14th day flow detection showed that CD3+CD8+phenotypes in the group A and group B were 71.8% and 65.2%, CD3+CD56+in the group C was 31.1%. By CCK- 8 method, the results showed that group A was significantly higher than that of the group B and group C, and the killing effect of the group A was also significantly increased with the increase of the target ratio. When the effect target ratio was 5∶1,thekillingratewas(68.82±2.55)%inthegroupA, (56.64±2.06)%inthegroupB, (55.98±2.63)%inthegroupC(P=0.007); when the effect target ratio was 10∶1,thekillingratewas(74.06±2.64)%inthegroupA, (60.11±2.74)%inthegroupB, (58.34±1.88)%inthegroupC(P=0.005); when the effect target ratio was 20∶1,thekillingrateinthegroupAwas(79.17±3.51) %, (65.33±2.48)%inthegroupB, (60.47±2.85)%inthegroupC(P=0.001). Conclusion: The sensitized DC by NCI- H209 can improve the killing effect of CIK cells, and provide a new strategy for the comprehensive treatment of small cell lung cancer.

small cell lung caner； dendritic cells- cytokine induced killer cells； adoptive cellular immunotherapy

2016- 09- 19

2016- 12- 09

新疆醫(yī)科大學(xué)科研創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目(No. XYDCX201485)

楊佳(1982-)，女，新疆烏魯木齊人，主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士。E- mail:16558290@qq.com

黃艷春 E- mail:huangyanchun0619@sohu.com

楊佳,馮陽春,黃艷春.抗原致敏DC與CIK共培養(yǎng)體外抗小細(xì)胞肺癌的研究[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2017,36(2):225- 229.

R- 33; R734.2

A

1671- 6264(2017)02- 0225- 05

10.3969/j.issn.1671- 6264.2017.02.019