顧玉英??

摘要：目的確定皮炎洗劑提取液的抗炎、止癢、抑菌作用。方法觀察皮炎洗劑提取液對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的作用；對大鼠蛋清性足跖腫脹的作用；對大鼠止癢作用的影響；以及采用試管連續(xù)稀釋法對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌、白色念珠菌和枯草桿菌進行皮炎洗劑提取液的體外抑菌試驗。結(jié)果皮炎洗劑提取液對對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹和大鼠蛋清性足跖腫脹具有顯著抑制作用；對大鼠瘙癢模型具有顯著止癢作用；皮炎洗劑提取液對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌、白色念珠菌和枯草桿菌具有不同程度的抑菌，殺菌作用。結(jié)論皮炎洗劑提取液具有抗炎、止癢、抑菌作用。

關(guān)鍵詞：皮炎洗劑；抗炎；止癢；抑菌

中圖分類號：R2855文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2017）05-0075-03

隨著環(huán)境污染與生活方式的改變，皮膚病發(fā)病率越來越高，嚴重影響著人類的生活質(zhì)量。作為有效的治療藥物，激素制劑雖有強大的抗炎、免疫抑制和抗增生作用，但其副作用所引發(fā)的皮膚損害急劇增加。傳統(tǒng)中藥制劑皮炎洗劑是昆山市中醫(yī)醫(yī)院自制制劑，經(jīng)過多年臨床實踐證明安全有效。皮炎洗劑由大黃、黃芩、黃連和苦參四味藥等量組成，具有燥濕止癢的功效，臨床上主要用于治療夏季皮炎、急性濕疹、濕熱、黃水癥等[1]。本實驗通過藥理學實驗，研究皮炎洗劑提取液的抗炎止癢抑菌作用，為皮炎洗劑的劑型改造奠定基礎(chǔ)。

1材料

11動物小鼠（體重20～24 g），SD大鼠（清潔級，體重180～200 g，許可證號：SCX2012-0001），均由浙江省醫(yī)學科學院動物中心提供。[HJ2.5mm]

12藥物與試劑皮炎洗劑提取液：用8倍量濃度為70%乙醇回流提取2次，每次2 h，然后濃縮制備皮炎洗劑提取液高劑量（濃度為02 g/mL），中劑量（01 g/mL），低劑量（005 g/mL）；婦膚康噴霧劑（100 mL，每撳01-015 mL，貴州榮發(fā)制藥有限公司，批號20120201）；100%二甲苯（購自杭州華東醫(yī)藥公司，批號20090301）；10%新鮮蛋清（卵白蛋白，Worhtington產(chǎn)品，批號：P2c5516）；磷酸組織胺（上海麗珠東風生物技術(shù)有限公司，批號：0006058）；標準菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、綠膿桿菌ATCC27853、白色念珠菌、枯草桿菌均由昆山市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科提供；培養(yǎng)基：普通肉湯培養(yǎng)基用前分裝于試管中，每管2 mL，115℃滅菌30 min，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、沙氏瓊脂培養(yǎng)基，用前于115℃滅菌30 min。

2實驗方法

21對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的作用[2，3]取小鼠50只，隨機分為5組，每組10只。設(shè)模型對照組，婦膚康噴霧劑陽性對照組，皮炎洗劑提取液高（濃度為02 g/mL）、中（濃度為01 g/mL）、低（濃度為005 g/mL）3個劑量組。實驗當日各組動物雙側(cè)耳廓涂藥1次，每次1 mL，空白對照組涂以蒸餾水005 mL/20 g，1 h后各組以蒸餾水洗去藥液，用棉球擦凈；給小鼠右耳涂二甲苯005 mL/只，左耳作對照。15 min后斷頸處死動物，在每鼠的左右兩耳相同部位分別用打孔器取一耳片進行稱重，計算腫脹度，并求出腫脹抑制率（%）。

22對大鼠蛋清性足跖腫脹的作用[2，4]取SD大鼠50只，隨機分為5組，每組10只。設(shè)空白模型對照組，婦膚康噴霧劑陽性對照組，皮炎洗劑提取液高（濃度為02 g/mL）、中（濃度為01 g/mL）、低（濃度為005 g/mL）3個劑量組，每次1 mL。實驗當日首先用自制容積測定裝置測定各組大鼠右后足正常體積，然后給各組涂藥，對照組涂等量蒸餾水。1 h后，各組右后足皮下注射10%新鮮蛋清005 mL/只。測定注射蛋清后1、2、4、6 h的右后足體積。致炎前后右后足體積的變化值為腫脹度，比較各組腫脹度的差異。

23對大鼠止癢作用的影響[5，6]取SD大鼠50只，隨機分為5組，每組10只。設(shè)模型對照組，婦膚康噴霧劑陽性對照組，皮炎洗劑提取液高（濃度為02 g/mL）、中（濃度為01 g/mL）、低（濃度為005 g/mL）3個劑量組，每次1 mL。實驗前24 h，給各組大鼠右后足背剃毛，涂藥1次，空白對照組涂以蒸餾水。實驗當日，用粗砂紙擦傷右后足剃毛處，面積1 cm2。局部再涂藥1次，10 min后開始在創(chuàng)面處滴001%磷酸組織胺005 mL/只，此后每隔3 min依002%，003%……遞增濃度，每次均為005 mL/只。直至大鼠回頭舔右后足時所給予的磷酸組織胺總量（μg）為致癢閾。記錄并比較各組的致癢閾。

24試管連續(xù)稀釋法體外抑菌試驗[7]金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、枯草桿菌、大腸桿菌均于實驗前從保存菌種斜面上沾取少量菌苔接種于10 mL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)24 h，取出作原菌液，再用無菌生理鹽水稀釋，經(jīng)比濁儀判定菌量，配制成1×106 CFU/mL菌液。白色念珠菌于實驗前從保存菌種斜面上沾取少量菌苔接種于10 mL真菌培養(yǎng)基中，于25℃培養(yǎng)72 h，取出作原菌液，再用無菌生理鹽水稀釋，經(jīng)比濁儀判定菌量，配制成1×105 CFU/ml菌液。

取裝有2 mL普通肉湯培養(yǎng)基12管，排列于試管架上，編號。然后以無菌操作法在第1管中加入皮炎洗劑提取液高劑量（濃度為02 g/mL）溶液2 mL，搖勻，吸取2 mL加入第2管中，搖勻，同法稀釋至第10支試管，棄去2 mL；以上各管均加入備妥的1×106 CFU/ml菌液或1×105 CFU/mL白色念珠菌液01 mL。第11管中只加入01 mL菌液作陽性生長對照管；第12管加入2 mL供試液后混勻，棄去2 mL不加菌液作陰性對照管。將加入金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、枯草桿菌的各管置于37℃培養(yǎng)24 h，將加入白色念珠菌的各管置于25℃培養(yǎng)48 h，觀察結(jié)果，確定最低抑菌濃度（MIC）。經(jīng)培養(yǎng)后無菌生長的各管，用滅菌接種環(huán)沾取少許抹于營養(yǎng)瓊脂或沙氏瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24 h（金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、枯草桿菌）或25℃培養(yǎng)72 h（白色念珠菌），觀察結(jié)果，確定最低殺菌濃度（MBC）。

25數(shù)據(jù)處理藥理實驗數(shù)據(jù)用（x[TX-*3/8]±s）表示，采用Students t-test進行統(tǒng)計學處理。*P<005表示實驗結(jié)果具有顯著性差異，*[KG-*3]*P<001，表示實驗結(jié)果具有極顯著性差異。

3實驗結(jié)果

31對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的作用結(jié)果見表1。實驗結(jié)果表明不同劑量的皮炎洗劑提取液對二甲苯致小鼠耳腫脹均有顯著抑制作用，且隨皮炎洗劑濃度的增加抑制作用也增大（P<005）。

32對大鼠蛋清性足跖腫脹的作用結(jié)果見表2。實驗結(jié)果表明在不同時間段里皮炎洗劑提取液高、中劑量均能有效減輕蛋清所致大鼠足趾腫，以藥后6 h左右作用最強（P<005）。

33對大鼠止癢作用的影響結(jié)果見表3。實驗結(jié)果表明不同劑量的皮炎洗劑提取液對瘙癢模型均有顯著止癢作用（P<001）。

34試管連續(xù)稀釋法體外抑菌試驗結(jié)果見表4。實驗結(jié)果表明皮炎洗劑提取液對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、枯草桿菌、白色念珠菌具有抑殺作用。

4討論

炎癥是機體組織對局部損傷的反應，是人類賴以生存的防御性和保護性反應。在炎癥的早期，炎癥介質(zhì)刺激血管，使血管擴張，血管內(nèi)皮間隙擴大，血管壁通透性增加，血漿內(nèi)的液體、蛋白質(zhì)和白細胞等滲出到組織間隙，隨著滲出的增加，造成組織腫脹[3]。二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗和蛋清致大鼠足跖腫脹試驗是研究藥物抗炎作用的常用試驗方法。不同劑量的皮炎洗劑提取液對二甲苯致小鼠耳腫脹均有顯著抑制作用（P<005）；不同時間段里高、中劑量皮炎洗劑提取液均能有效減輕蛋清所致大鼠足趾腫脹，給藥后6 h左右作用最強（P<005），表明皮炎洗劑提取液對炎癥早期血管通透性增高和水腫有明顯的抑制作用，為臨床應用皮炎洗劑提供了試驗依據(jù)。但其抗炎機制還需進一步研究。

瘙癢是皮膚病中最常見和最痛苦的癥狀之一，組織胺是一種可以引起皮膚瘙癢的最常見介質(zhì)[8]。本研究用外源性組織胺誘導釋放內(nèi)源性組織胺建立動物瘙癢模型。高、中、低劑量組的皮炎洗劑提取液對瘙癢模型均有顯著止癢作用（P<001），表明皮炎洗劑提取液有顯著的抗組織胺作用，為皮炎洗劑臨床治療皮膚病提供了理論基礎(chǔ)。

金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌、白色念珠菌和枯草桿菌是目前常見的4種病原菌。體外抑菌實驗結(jié)果表明皮炎洗劑提取液對這4種病原菌均有較強的抑殺作用，特別是對大腸埃希菌，在較低濃度即有抑殺作用。結(jié)果說明皮炎洗劑提取液對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性、真菌均有抑殺作用，表示皮炎洗劑提取液具有廣譜抗菌作用，可以減少損傷皮膚的感染幾率。

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