姚伯昕

[摘要] 目的 分析高同型半胱氨酸血癥對(duì)大鼠腦內(nèi)NMDA受體亞單位蛋白表達(dá)的影響。方法 研究時(shí)間2015年7月—2016年4月，將36只SD大鼠隨機(jī)分為模型組（皮下注射用生理鹽水配成的蛋氨酸溶液）和對(duì)照組（相應(yīng)體積的生理鹽水），檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)大鼠血漿同型半胱氨酸含量及腦內(nèi)NMDA受體亞單位（NR1、NR2A、NR2B）的蛋白含量。結(jié)果 模型組中第3小組大鼠的Hcy、腦內(nèi)NMDA受體NR1、NR2A、NR2B分別為（21.46±1.37）、（0.99±0.13）、（0.95±0.18）、（1.47±0.25），均高于第2小組和第1小組（P<0.05），第1小組大鼠上述指標(biāo)含量均為最低，分別為（10.14±1.13）、（0.74±0.11）、（0.70±0.23）、（0.68±0.13）。模型組3個(gè)小組大鼠的腦內(nèi)NMDA受體NR1、NR2A、NR2B含量均高于對(duì)照組中對(duì)應(yīng)小組大鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 高同型半胱氨酸血癥會(huì)導(dǎo)致大鼠腦內(nèi)NMDA受體亞單位的蛋白表達(dá)上升，加重大鼠腦神經(jīng)損傷。

[關(guān)鍵詞] 高同型半胱氨酸血癥；NMDA受體亞單位；蛋白；表達(dá)；影響

[中圖分類號(hào)] R44 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2016）12（b）-0048-03

Effects of Hyperhomocysteinemia on NMDA Receptor Subunit Protein Expression in Rat Brain

YAO Bo-xin

Department of Neurology， the Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University， Quanzhou， Fujian Province， 362000 China

[Abstract] Objective To investigate the effect of hyperhomocysteinemia on the expression of NMDA receptor subunit in rat brain. Methods Study time From July 2015 to April 2016，36 SD rats were randomly divided into a model group （the normal saline solution for subcutaneous injection）and a control group（the corresponding volume of saline），and the rats were sacrificed at different time points The plasma levels of homocysteine and the protein content of NMDA receptor subunits（NR1， NR2A， NR2B）in rats were determined. Results The levels of NMDA receptors NR1，NR2A and NR2B in the model group were （21.46±1.37），（0.99±0.13），（0.95±0.18），（1.47±0.25），（10.14±1.13），（0.74±0.11），（0.70±0.23），（0.68±0.13），respectively（P<0.05）， and there was no significant difference between the group 1 and group 1.The contents of NMDA receptor NR1，NR2A，NR2B in three groups of rats in the model group were higher than those in the control group（P<0.05） the difference was scatistically significant. Conclusion Hyperhomocysteinemia can increase the protein expression of NMDA receptor subunits in the brain of rats and increase the damage of the cranial nerves.

[Key words] Hyperhomocysteinemia； NMDA receptor subunit； Protein； Expression； Effect

高同型半胱氨酸血癥發(fā)病實(shí)質(zhì)是由機(jī)體甲硫氨酸代謝障礙所引起的血漿或血清中游離及與蛋白結(jié)合的同型半胱氨酸、混硫化合物含量增高，目前已被證實(shí)是誘發(fā)心腦血管疾病的重要危險(xiǎn)因素[1-2]。腦卒中是我國(guó)臨床常見(jiàn)的一種急性腦血管疾病，發(fā)生后不僅嚴(yán)重危害患者機(jī)體健康，同時(shí)也會(huì)給患者家庭造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[3]。高同型半胱氨酸血癥作為腦卒中獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)其誘發(fā)腦損害機(jī)制的深入研究，可為臨床制定能夠進(jìn)一步改善腦卒中患者預(yù)后的治療方案提供參考依據(jù)[4]?；谏鲜霈F(xiàn)狀，該院于2015年7月—2016年4月選取36只實(shí)驗(yàn)大鼠開(kāi)展研究，針對(duì)高同型半胱氨酸血癥對(duì)大鼠腦內(nèi)NMDA受體亞單位蛋白表達(dá)的影響進(jìn)行了分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究時(shí)間2015年7月—2016年4月，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，由該院試驗(yàn)動(dòng)物中心提供，3月齡，體重（200±20）g，隨機(jī)分為模型組和對(duì)照組，每組各16只。兩組大鼠的飼養(yǎng)環(huán)境相同，均為每籠4只，飲食飲水自由，光照時(shí)間相同。模型組16只大鼠的平均體重為（210.9±3.5）g，對(duì)照組16只大鼠的平均體重為（210.5±4.1）g，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可以開(kāi)展研究。endprint

1.2 研究方法

分組后每日給予模型組大鼠皮下注射用生理鹽水配成的蛋氨酸溶液，注射劑量為80 mg/（kg·d），每日給予對(duì)照組大鼠皮下注射與模型組大鼠體積相同的生理鹽水。分別于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后第1天、第4、8周處死兩組大鼠，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組各處死6只，按照處死時(shí)間的不同將各組大鼠分為3個(gè)小組。采用高效液相色譜法檢測(cè)模型組大鼠的血漿同型半胱氨酸含量，不同時(shí)間點(diǎn)分離大鼠大腦皮層，使用Bio—Rad Protein Assay Dye Reagent Concerntrate進(jìn)行蛋白定量，采用蛋白印跡法檢測(cè)不同血漿同型半胱氨酸含量大鼠腦組織內(nèi)NMDA受體亞單位體NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量。

1.3 觀察指標(biāo)

該課題研究的觀察模型組中3組大鼠（不同時(shí)期處死）的血漿同型半胱氨酸含量、腦內(nèi)NMDA受體NR1、NR2A、NR2B 3種亞單位的蛋白含量，模型組中3組大鼠腦內(nèi)NMDA受體NR1、NR2A、NR2B 3種亞單位的蛋白含量與對(duì)照組中對(duì)應(yīng)組別小鼠存在的差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

由專業(yè)的數(shù)據(jù)分析處理人員對(duì)該課題研究得到的研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量型指標(biāo)均采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，指標(biāo)差異進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 模型組中3組大鼠的血漿同型半胱氨酸含量、腦內(nèi)NMDA受體亞單位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量比較

統(tǒng)計(jì)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組中第3小組大鼠的血漿同型半胱氨酸含量、腦內(nèi)NMDA受體亞單位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量均高于第2小組和第1小組大鼠，其中NMDA受體亞單位NR2B的蛋白含量升高幅度最高，第1小組大鼠上述指標(biāo)含量均為最低，組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2 模型組、對(duì)照組中3組大鼠的腦內(nèi)NMDA受體亞單位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量比較

模型組3個(gè)小組大鼠的腦內(nèi)NMDA受體亞單位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量均高于對(duì)照組中對(duì)應(yīng)小組大鼠（P<0.05），其中以NR2B的蛋白含量比較存在的差異最大，具體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2、表3、表4所示。

3 討論

NMDA受體是一種谷氨酸受體，廣泛分布于哺乳動(dòng)物的腦組織中，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，在神經(jīng)元的存活、樹(shù)突及觸突結(jié)構(gòu)的發(fā)育、突觸可塑性的維持、神經(jīng)元回路的形成及學(xué)習(xí)、記憶過(guò)程中發(fā)揮重要作用[5]。研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體處于正常生理狀態(tài)時(shí)，谷氨酸對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有快而短暫的興奮作用，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞去極化，產(chǎn)生興奮性突觸后電位，直接參與大腦的學(xué)習(xí)和記憶活動(dòng)。谷氨酸共有4種離子型受體，其中NMDA受體屬配體門控的離子通道，共有3個(gè)亞單位，分別為NR1、NR2A、NR2B。大量研究已經(jīng)證實(shí)[6-7]，同型半胱氨酸通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)NMDA受體上的谷氨酸或甘氨酸結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致鈣離子大量流入細(xì)胞內(nèi)促進(jìn)活性氧的產(chǎn)生和細(xì)胞蛋白酶的釋放，繼而會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性和神經(jīng)毒作用，因此認(rèn)為高同型半胱氨酸血癥會(huì)對(duì)腦組織中NMDA受體亞單位的蛋白表達(dá)產(chǎn)生影響，與腦卒中的發(fā)生存在密切關(guān)系[8]。

該課題研究針對(duì)高同型半胱氨酸血癥對(duì)大鼠腦內(nèi)NMDA受體亞單位蛋白表達(dá)的影響進(jìn)行深入分析。表1數(shù)據(jù)顯示，模型組中第3小組大鼠的血漿同型半胱氨酸含量、腦內(nèi)NMDA受體NR1、NR2A、NR2B 3種亞單位的蛋白含量分別為（21.46±1.37）、（0.99±0.13）、（0.95±0.18）、（1.47±0.25），均高于第2小組和第1小組，第1小組大鼠上述指標(biāo)含量均為最低，分別為（10.14±1.13）、（0.74±0.11）、（0.70±0.23）、（0.68±0.13）。由表1數(shù)據(jù)可知，隨著大鼠血漿同型半胱氨酸含量的升高，大鼠腦內(nèi)NMDA受體亞單位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量也呈現(xiàn)出升高趨勢(shì)，其中以NR2B的升高幅度最明顯。表2數(shù)據(jù)顯示，模型組3個(gè)小組大鼠的腦內(nèi)NMDA受體NR1、NR2A、NR2B、3種亞單位的蛋白含量均高于對(duì)照組中對(duì)應(yīng)小組大鼠。由表2數(shù)據(jù)可知，血漿同型半胱氨酸含量正常的大鼠，其腦內(nèi)NMDA受體亞單位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量不會(huì)隨時(shí)間發(fā)生明顯變化，而高同型半胱氨酸血癥大鼠腦內(nèi)NMDA受體亞單位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量則處于較高水平。該課題研究結(jié)果與徐斌等[8]的研究結(jié)果具有一致性。

綜上所述，該院認(rèn)為高同型半胱氨酸血癥會(huì)導(dǎo)致大鼠腦內(nèi)NMDA受體亞單位的蛋白表達(dá)上升，加重大鼠腦神經(jīng)損傷，提示臨床可從降低同型半胱氨酸含量方面來(lái)探索能夠進(jìn)一步改善腦卒中患者預(yù)后的治療方案。

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（收稿日期：2016-09-17）endprint