李淑榮　王麗　倪淑君

摘要[目的]研究海鮮菇中總糖含量提取的影響因素，為海鮮菇中總糖的利用提供依據(jù)。[方法]分析了海鮮菇中總糖熱水浸提的最佳提取目數(shù)、適合提取原料，在此基礎(chǔ)上研究了提取溫度、提取時間、料液比對海鮮菇中總糖提取效果的影響。[結(jié)果]海鮮菇最佳提取目數(shù)為100目，殘菇為總糖的最佳提取原料。當(dāng)提取溫度為80 ℃、提取時間為20 min、提取料液比為1∶20（g∶mL）時，殘菇中總糖提取率最高為13.63%。[結(jié)論]海鮮菇的殘菇中總糖含量最高，適合作為進(jìn)一步糖類物質(zhì)研究的基礎(chǔ)原料。

關(guān)鍵詞海鮮菇；熱水浸提；總糖

中圖分類號S646文獻(xiàn)標(biāo)識碼

A文章編號0517-6611（2017）30-0096-03

Abstract[Objective]Research on the extraction factor of the total sugar in Hypsizygus marmoreus can provide basis for application of total sugar in Hypsizygus marmoreus.[Method]This paper analyzed the optimum extraction mesh number and material of total sugar in Hypsizygus marmoreus by hot water extraction. In this base， the influence factors of extraction temperature， time， and solidliquid ratio were studied. [Result]The optimum extraction mesh number was 100 and the residual mushroom was the potimal extraction material.When extraction time was 80 ℃， extraction time was 20 min， solidliquid ratio was 1∶20（g∶mL）， the highest total extraction rate was 13.63%. [Conclusion]The residual Hypsizygus marmoreus have the highest total sugar which is a very important material to use in the next step.

Key wordsHypsizygus marmoreus；Hot water extraction；Total sugar

海鮮菇（Hypsizygus marmoreus）又名真姬菇，在日本稱之為“御菇”或“御茸”，是一種珍稀食用菌，被譽為食用菌中的“金枝玉葉”[1-2]。海鮮菇中糖類物質(zhì)含量豐富，不僅含有提高機體免疫力、抗腫瘤、抗衰老等功效的多糖，還有可以提供甜味、香味、呈色的單糖、寡糖[3]。因此，將海鮮菇中的糖類物質(zhì)作為食品、醫(yī)藥行業(yè)的加工產(chǎn)品，可以提高海鮮菇的附加值。

目前關(guān)于海鮮菇多糖的研究較多，如賀江等[4]、劉紅紅[5]、聶瑩等[6]分別研究了多糖的提取方法、分子量分布、組分及抗氧化活性等。而關(guān)于總糖的研究，我國關(guān)于食用菌有一個國家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 15672—2009），該標(biāo)準(zhǔn)中采用酸水解的方法將食用菌中水溶性糖和水不溶性糖水解成還原糖，然后采用苯酚硫酸法測定，該方法可以將食用菌中所有可溶性和不可溶性糖類進(jìn)行測定，包括單糖、寡糖、多糖，但該方法得到的糖類無法進(jìn)行后期單糖、寡糖、多糖的功能特性分析和應(yīng)用。目前關(guān)于茶樹菇[7]、香菇[8]等均有相關(guān)報道優(yōu)化可溶性糖的提取，為后續(xù)的研究提供了一定的基礎(chǔ)保障，而關(guān)于海鮮菇中總糖或可溶性糖的提取研究尚少見報道。筆者以不同目數(shù)、原料、提取時間、提取溫度、料液比5個因素考察熱水浸提法對海鮮菇中總糖的提取效果，為后期糖類的進(jìn)一步純化、活性研究提供一定的基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1原料與試劑。

海鮮菇，購于北京市菌類生產(chǎn)基地。海鮮菇菇根為生長110～120 d正常產(chǎn)品根部；幼菇為生長80～90 d未完全長成熟的產(chǎn)品；殘菇為生長120～130 d的產(chǎn)品。樣品經(jīng)過分離、分割、60 ℃烘干后粉碎過篩，并貯藏于干燥器中備用。苯酚、濃硫酸及其他藥品均為分析純。

1.1.2儀器與設(shè)備。

T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限公司；3-18K超低溫臺式離心機，德國Sigma公司。

1.2方法

1.2.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

取6支具塞試管，分別加入100 μg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，各補加蒸餾水至1.0 mL，然后各加入5%苯酚溶液1.0 mL、濃H2SO4 5.0 mL，靜置10 min后，使用渦旋振蕩器使反應(yīng)液充分混合，在30 ℃水浴中加熱20 min冷卻至室溫后于490 nm波長處測定吸光度值，參考GB/T 15672—2009，略有改動。

1.2.2總糖提取的影響因素。

1.2.2.1粉碎目數(shù)的優(yōu)化。

取預(yù)處理后海鮮菇的根粉過100、200、300目篩，稱取2 g于燒杯中，提取料液比為1∶25（g∶mL），提取溫度75 ℃，提取時間20 min，菇根粗提液在8 000 r/min下離心20 min，收集上清液。濾渣反復(fù)提取2次，離心后收集濾液，濃縮后用苯酚硫酸法測定總糖含量。

1.2.2.2提取原料的選取。

分別取過100目篩的幼菇、殘菇、菇根2 g于燒杯中，提取料液比為1∶25（g∶mL），提取溫度75 ℃，提取時間20 min，菇粗提液在8 000 r/min下離心20 min，濾渣反復(fù)提取2次，離心后收集濾液，濃縮后用苯酚硫酸法測定總糖含量。試樣中總糖含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)（X，%）計算，計算公式如下：

X=m1×V1×10-6m2×V2×（1-w）×100%

式中，V1為樣品定容體積（mL）；V2為比色測定時所移取樣品測定液的體積（mL）；m1為從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品測定液中的含糖量（μg）；m2為樣品質(zhì)量（g）；w為樣品含水量（%）。

1.2.2.3料液比的影響。

在提取溫度為50 ℃、提取時間20 min的情況下，分別按料液比為1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50，1∶60（g∶mL）提取樣品中的總糖，樣品粗提液在8 000 r/min離心20 min，收集上層清液。濾渣反復(fù)提取2次，離心后收集濾液，濃縮后用苯酚硫酸法測定總糖含量。

1.2.2.4提取時間的影響。

在提取溫度為50 ℃、料液比1∶20（g∶mL）的條件下，分別按提取時間為5、10、20、30、40、50 min時提取樣品中的總糖，樣品粗提液在8 000 r/min離心20 min，收集上層清液。濾渣反復(fù)提取2次，離心后收集濾液，濃縮后用苯酚硫酸法測定總糖含量。

1.2.2.5提取溫度的影響。

在提取時間為20 min、料液比1∶20（g∶mL）條件下，分別按提取溫度40、50、60、70、80、90 ℃提取樣品中的總糖，樣品粗提液在8 000 r/min下離心20 min，收集上層清液。濾渣反復(fù)提取2次，離心后收集濾液，濃縮后用苯酚硫酸法測定總糖含量。

1.3數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)重復(fù)3次，用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。所有數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0進(jìn)行方差分析、顯著性分析，采用Origin 8.0 繪制曲線圖。

2結(jié)果與分析

2.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

以葡萄糖濃度（x）為橫坐標(biāo)，以吸光度值（y）為縱坐標(biāo)，在波長490 nm條件下繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。從圖1可知，相關(guān)系數(shù)R2為0.999，說明葡萄糖在0～60 μg/mL濃度范圍內(nèi)，其濃度和吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.2總糖提取影響因素分析

2.2.1粉碎目數(shù)對提取效果的影響。

從圖2可以看出，菇根100、200、300目提取的總糖含量差異不顯著，說明原料預(yù)處理中粉碎目數(shù)的改變對總糖含量的影響很小，考慮到原料的制備難易程度及效益，選擇將100目作為樣品處理目數(shù)。

2.2.2不同原料的提取效果。

圖3為殘菇、幼菇、菇根3種原料總糖提取量含量分析圖，3種樣品總糖提取率效果差異顯著，其中殘菇≈2.0倍菇根≈1.5倍幼菇，其主要原因有2個：一是殘菇為開傘菇，導(dǎo)致菌褶暴露、孢子釋放，細(xì)胞壁和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性變差，使得糖類物質(zhì)更容易溶解出來；另一個原因可能是隨著生長時間的延長，糖類物質(zhì)在不斷合成，使得總糖含量較高[9-10]。綜合以上因素，該試驗選擇殘菇作為試驗原料。

2.2.3料液比對殘菇總糖得率的影響。

提取溫度為50 ℃，提取時間20 min的情況下，按料液比為1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60（g∶mL）提取樣品中的總糖，結(jié)果如圖4所示。由圖4可知，隨著料液比中溶劑用量的增加，總糖含量先增加后減小，達(dá)到1∶20（g∶mL）時含量最高。一般來說，料液比中溶劑用量越高總糖含量也較高，但料液比中溶劑用量進(jìn)一步增加，原料中糖類物質(zhì)均溶解出來，液體量的增加不會增加總糖含量，反而給后面的蒸發(fā)濃縮工序增加困難，可能使后續(xù)處理過程中得到糖類損失而減少。在保證提取效果的同時，盡量減少水用量和降低蒸發(fā)濃縮的負(fù)荷，選取1∶20（g∶mL）作為后期優(yōu)化處理的較優(yōu)條件。

2.2.4提取時間對殘菇總糖得率的影響。

提取溫度為50 ℃，料液比1∶20（g∶mL）的條件下，分別在提取時間為5、10、20、30、40、50 min時提取總糖，如圖5所示。由圖5可以看出，隨著提取時間的增加，總糖含量逐漸升高，在提取時間為20 min 時達(dá)到最高，而后又隨時間增加有下降趨勢并處于不顯著狀態(tài)。該研究可能是因為隨著提取時間的延長，加熱溫度較高，使得一些糖類與樣品中的其他成分發(fā)生反應(yīng)而減少。

2.2.5提取溫度對殘菇總糖得率的影響。

提取時間為20 min，料液比1∶20（g∶mL）條件下，分別在提取溫度40、50、60、70、80、90 ℃時提取總糖，結(jié)果如圖6所示。由圖6可以看出，總糖含量在溫度為40～60 ℃時差異不顯著，但隨提取溫度的逐漸上升，到80 ℃的時候總糖提取含量達(dá)到最高，而后又隨溫度的升高而下降。可能是因為隨著提取溫度的增加，使得一些糖類與樣品中的其他成分發(fā)生反應(yīng)而減少。該研究與戴其強[11]研究草菇總糖提取量隨著溫度的變化結(jié)果一致。

3結(jié)論

該研究通過對原料處理目數(shù)的分析，優(yōu)化原料種類，進(jìn)

而分析影響總糖提取的料液比、提取溫度、提取時間等主要因素，分析了各個條件對總糖提取的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)粉碎目數(shù)為100目，原料以殘菇為優(yōu)，料液比1∶20（g∶mL），提取時間為20 min，提取溫度80 ℃為殘菇總糖的較優(yōu)提取條件，該條件下提取的總糖含量為13.63%。

參考文獻(xiàn)

[1]

李挺，宋斌，林群英，等.白玉菇的研究進(jìn)展[J].貴州科學(xué)，2011，29（2）：48-52.

[2] ZHNG B Z，INNGJERDINGEN K T，ZOU Y F，et al. Characterisation and immunomodulating activities of exopolysaccharides from submerged cultivation of Hypsizigus marmoreus[J].Food chemistry， 2014，163：120-128.

[3] 谷鎮(zhèn)，楊焱.食用菌呈香呈味物質(zhì)研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2013，34（5）：363-367.

[4] 賀江，向球，蔡翠玲，等.真姬菇多糖超聲波輔助提取工藝及抗氧化活性研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（4）：232-234.

[5] 劉紅紅.真姬菇SK-01胞外多糖與胞內(nèi)多糖的提取及其抗氧化活性[D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013.

[6] 聶瑩，李淑英，丁洋，等.真姬菇子實體多糖結(jié)構(gòu)特性及抗氧化活性研究[J].中國食品學(xué)報，2016，16（11）：55-61.

[7] 林啟訓(xùn)，邱蕊，毛延妮.超聲提取茶樹菇可溶性糖的影響因素及優(yōu)化[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2009，38（3）：306-309.

[8] 陳萬超，楊焱，于海龍，等.七種干香菇主要營養(yǎng)成分與可溶性糖對比及電子舌分析[J].食用菌學(xué)報，2015，22（1）：61-67.

[9] BRENNAN M，LE PORT G，GORMLEY R.Postharvest treatment with citric acid or hydrogen peroxide to extend the shelf life of fresh sliced mushrooms[J].LWTFood Science and Technology， 2000， 33（4）： 285-289.

[10] MAHAJAN P V，OLIVEIRA F A R，MACEDO I.Effect of temperature and humidity on the transpiration rate of the whole mushrooms [J]. Journal of food engineering， 2008， 84（2）： 281-288.

[11] 戴其強.草菇水溶性糖的制備及其體外益生元效應(yīng)的研究[D].南昌：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.