何 穎 楊 綱 王 博

(婁底市疾病預(yù)防控制中心 婁底， 417000)

市售散裝飲料中5種人工合成著色劑的測定

何 穎 楊 綱 王 博

(婁底市疾病預(yù)防控制中心 婁底， 417000)

建立了一種適宜基層食品檢驗機構(gòu)使用的用紫外檢測器-高效液相色譜同時測定飲料中5種人工合成著色劑(檸檬黃，莧菜紅，胭脂紅，日落黃，誘惑紅)的新方法。樣品經(jīng)亞鐵氰化鉀和乙酸鋅去蛋白后，用聚酰胺柱吸附，以2%的氨化甲醇解吸，氮吹至盡干，用水定容至5mL，過0.45μm微孔濾膜，以Dikma C18(4.6×250mm, 5μm)色譜柱為分離柱，以甲醇與20mmol/L的乙酸銨為流動相，梯度洗脫，流速1.0mL/min，于483nm波長下測定。結(jié)果顯示，5種人工合成著色劑在0.5μg/mL～10.0μg/mL濃度范圍線性良好，相關(guān)系數(shù)均在0.9999以上, 回收率在95.8～99.4%。該方法具有省時，省力，節(jié)約成本的優(yōu)點，對儀器設(shè)備要求低，可操作性強，具有實際應(yīng)用價值。

飲料 合成著色劑 高效液相色譜法

1 引言

著色劑是一種以改善食品感官性狀為目的的添加劑，有刺激食欲的效果。按其來源可分為人工合成色素和天然色素兩大類，前者按化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，又可分為偶氮類著色劑和非偶氮類著色劑兩種。偶氮類著色劑按其溶解性不同又分為水溶性著色劑和脂溶性著色劑，后者進入人體內(nèi)不易排出，毒性較大，世界各國基本已不再使用。當前，主要以水溶性著色劑為食品著色。中國食品添加劑使用衛(wèi)生標準[1]列入的合成著色劑有胭脂紅、莧菜紅、日落黃、赤蘚紅、檸檬黃、新紅、靛藍、亮藍等。

與天然色素相比，合成色素顏色更加鮮艷，不易褪色，且價格較低。它們通常是以苯、甲苯、萘等化工原料合成，長期食用對人體健康具有一定的危害，世界各國對此類食品添加劑的使用都有著嚴格的限制[2]。

為了對我省散裝飲料中人工合成著色劑的使用情況有一個宏觀的把握，對食品安全狀況進行有效監(jiān)督，本實驗在國標方法的基礎(chǔ)上加以適當改進，分別對全省14個地區(qū)的市售散裝飲料進行了5種人工合成著色劑的檢測，主要包括碳酸類飲料、乳品類飲料和果蔬汁飲料。

2 儀器、材料與方法

2.1 儀器

島津LC-20A型高效液相色譜儀，配SPD-20A紫外-可見光檢測器(氘燈，鎢燈)；TTL-DC型多功能氮吹儀；12位真空抽濾裝置；AUW220電子天平等。

2.2 對照品與材料

5種人工合成著色劑標準溶液檸檬黃GBW(E)100001a(0.5mg/mL)、胭脂紅GBW(E)100002a(0.5mg/mL)、莧菜紅GBW(E)100004a(0.5mg/mL)、日落黃GBW(E)100003a(0.5mg/mL)、誘惑紅GBW(E)100192(100μg/mL)均購于中國計量科學(xué)研究院；

本實驗所用樣品來源于2014年湖南省食品安全風(fēng)險監(jiān)測計劃，采自全省14個地(市、州)，共計210份，其中碳酸類飲料98份，乳制品飲料70份，果蔬類飲料42份。

2.3 色譜條件

色譜柱Dikma C18(4.6×250mm, 5μm)，以甲醇與20mmol/L的乙酸銨為流動相，梯度洗脫(見表1)；進樣量10μL，柱溫30℃，流速1.0mL/min，檢測波長483nm。

2.4 供試品溶液的制備

稱取試樣5g(精確到0.001g)，以20%的檸檬酸溶液調(diào)pH至中性，加熱至60℃，緩慢注入聚酰胺小柱，真空抽濾，流速保持1.0mL/min，用60℃

表1 流動相梯度洗脫參考條件

pH=4的水多次洗滌，接著用60%的甲醇甲酸溶液洗滌3-5次，再用水洗至中性，用2%的氨化甲醇解吸3～5次，每次5mL，收集解吸液，氮吹至近干，加水溶解，定容至5mL，過0.45μm微孔濾膜，待測。

2.5 對照品溶液的制備

準確吸取以上5種人工合成著色劑標準溶液溶于純水(18.25MΩ·cm)配制成濃度為50μg/mL的對照品混合溶液，備用。

3 方法學(xué)考察

3.1 線性考察

精密制備5種人工合成著色劑濃度梯度溶液，濃度依次為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL，分取10μL(n=3)進樣，以其色譜峰面積為Y，濃度為X，作標準曲線，線性回歸方程與相關(guān)系數(shù)見表2，對照品色譜圖見圖1。

表2 5種對照品溶液的線性關(guān)系

圖1 5種人工合成著色劑對照品色譜圖

3.2 精密度

取配制好的混合對照品溶液在設(shè)定好的色譜條件下重復(fù)進樣5次，每次10μL，5種合成色素檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅、日落黃、誘惑紅5次測定峰面積積分值的RSD值<5%，見表3，表明該方法精密度良好。

表3 精密度實驗結(jié)果

3.3 回收率實驗

精密稱取含量已知的樣品1份，加入一定量的著色劑標準溶液，按供試品制備方法制樣，測定，結(jié)果見表4。5種人工合成著色劑的平均回收率均在在95%以上，相對標準偏差RSD均<5%，回收率良好。

表4 回收率實驗結(jié)果(n=5)

4 結(jié)果討論

4.1 檢測波長的選擇

目前大多采用二極管陣列檢測器對人工合成著色劑進行分離檢測[3]，基層食品檢驗機構(gòu)大多不具備條件。依據(jù)國標方法，紫外檢測器254nm波長下，5種著色劑能夠得到較好的分離[4]，但基線漂移較大，對于成分復(fù)雜的供試品溶液，分離效果差；此外，基層食品檢驗機構(gòu)大多沒有配置二極管陣列檢測器，在此，我們在483nm波長下能夠?qū)悠分?種著色劑進行較好的分離，干擾較小，基線平穩(wěn)，峰形良好，保留時間穩(wěn)定。檢測結(jié)果表明，我省市售散裝飲料中5種人工合成著色劑的含量均在限值以內(nèi)，可放心飲用。

4.2 樣品制備方法優(yōu)化

人工合成著色劑的提取多以聚酰胺吸附，乙醇-氨水-水溶液解吸為首選，對于較難過濾的乳制品飲料，要消耗較大的精力，且解吸液中含有大量水分，不利于氮吹至近干。本實驗我們對以上問題進行了優(yōu)化，用聚酰胺小柱對所有樣品進行分離，同時配備真空抽濾裝置，可同時對12個樣品進行處理，提高了實驗效率；以2%氨化甲醇作為解吸液，不含水分，易氮吹至近干，節(jié)省氮氣使用；對于乳制品飲料，首先以亞鐵氰化鉀和乙酸鋅去除蛋白[5]，再對色素進行提取，大大縮短了樣品前處理時間。

5 結(jié)論

本法以在483nm波長下同時測定飲料中5種人工合成著色劑，線性良好，精密度和回收率高，共存雜質(zhì)干擾小，待測組分能夠得到較好的分離，能滿足食品中著色劑的檢測要求，特別是對大批量樣品的檢測分析，具有省時，省力，省成本的優(yōu)點，可為基層食品檢驗機構(gòu)提供借鑒。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部. GB2760-2011食品添加劑使用標準[S]. 北京: 中國標準出版社, 2011.

[2] 柴秋兒. 國外食品添加劑的管理法規(guī)及安全標準現(xiàn)狀[J]. 中國市場, 2009, 17(4): 62-63.

[3] 阮麗萍, 吉文亮, 劉華良, 等. 高效液相色譜法同時測定食品中10種合成著色劑[J]. 實驗技術(shù)與方法, 2011, 2(23): 151-154.

[4] 中華人民共和國衛(wèi)生部. GB/T 5009.35-2003食品中合成著色劑的測定[S]. 北京: 中國標準出版社, 2003.

[5] 中華人民共和國衛(wèi)生部. GB5009.33-2010食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定[S]. 北京: 中國標準出版社, 2010.

Simultaneous determination of five synthetic colorants in beverages by HPLC.

He Ying, Yang Gang, Wang Bo

(Loudi Center for Disease Control and Prevention, Loudi 417000, China)

Colorants were separated on a Dikma C18(4.6×250mm, 5μm)chromatographic column, the methanol and 20mmol/L ammonium acetate solution were used as mobile phase with a procedure of gradient elution, the flow rate was 1.0mL/min, the detection wavelength was 483nm.The five kinds of synthetic colorants in the range of 0.5-10.0μg/mL had a good linearity, the correlation coefficient was higher than 0.9999, and recovery of the method was 95.8%-99.4%.

beverages; synthetic colorants; HPLC

何穎，男，1975年出生，碩士研究生，中級職稱，主要從事食品安全監(jiān)管工作，E-mail: 1012358967@qq.com。

王博，男，1985年出生，碩士研究生，中級職稱，主要從事理化檢驗工作，E-mail: masterwangbo@hotmail.com。

10.3936/j.issn.1001-232x.2017.02.006

2016-10-20