李福春

【中圖分類號】R373 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）04-0-01

志賀菌作為一種腸道傳染病菌，是經(jīng)消化道傳播，會對腸黏膜上皮細(xì)胞造成侵襲，導(dǎo)致排黏液膿血便、腹瀉、腹痛以及高熱等癥狀。相關(guān)統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，每年感染痢疾的人數(shù)高達1.6億人，而死亡的人數(shù)則高達1.1萬，在死亡病例中則主要為年齡小于5歲的兒童[1]。與發(fā)達國家相比較，發(fā)展中國家的衛(wèi)生條件更差，痢疾感染率也更高，而志賀菌則是引起感染性腹瀉病的主要病原菌。所以對志賀菌進行快速和有效的檢驗，對于疾病的防治就顯得非常重要。

1.志賀菌生物學(xué)特征分析

志賀菌作為兼性厭氧革蘭陰性短小桿菌，無鞭毛、無莢膜、無芽胞，大部分均存在菌毛；志賀菌對營養(yǎng)的要求較低，在普通培養(yǎng)基上就能生長，而生長的最佳PH值、溫度分別為7.2-7.4、37℃。志賀菌能對葡萄糖進行分解，不產(chǎn)氣能產(chǎn)酸，尿素和V-P試驗表現(xiàn)為陰性，不會形成硫化氫，不能利用丙二酸鹽或者檸檬酸鹽。志賀菌屬包括表面抗原和菌體抗原，通過菌體抗原能對菌型進行區(qū)別，表面抗原則能對菌體抗原與相應(yīng)抗血清的凝集反應(yīng)進行有效阻止。按照菌體抗原、生化反應(yīng)的差異，可以將志賀菌分為不同血清群，分別為宋內(nèi)志賀菌、鮑氏志賀菌、福氏志賀菌、痢疾志賀菌。

2.志賀菌常規(guī)檢驗技術(shù)分析

志賀菌常規(guī)檢驗技術(shù)的步驟主要為培養(yǎng)增菌、純化分離、生化試驗、血清學(xué)鑒定分型，該技術(shù)作為檢驗志賀菌的基礎(chǔ)方法，現(xiàn)階段已納入到了國家標(biāo)準(zhǔn)，志賀菌常規(guī)檢驗技術(shù)的全程用時一般為3-5天，檢驗結(jié)果能對標(biāo)本的真實狀況進行穩(wěn)定、準(zhǔn)確和直觀地反應(yīng)。在實際的實驗中，要想讓檢出率顯著提高，則可以選擇敏感性低的麥康凱、選擇性強的木糖賴氨酸去氧膽酸鈉（XLD）或者HE培養(yǎng)基，然而應(yīng)謹(jǐn)慎使用沙門氏菌-志賀菌分離培養(yǎng)基。法國梅里埃公司所生產(chǎn)的顯色培養(yǎng)基，其特異性和敏感性較高，能直接分離和鑒定志賀菌[2]。志賀菌常規(guī)檢驗技術(shù)的特異性低，而且操作比較繁瑣、費時費力，而且要求檢測者有豐富的檢測經(jīng)驗，檢驗結(jié)果是否準(zhǔn)確可靠，在很大程度上依賴檢測者的專業(yè)素質(zhì)和實驗時的工作狀態(tài)，成為檢驗部門的一項沉重負(fù)擔(dān)，無法滿足快速處理的要求，對于突發(fā)公共衛(wèi)生事件的處理和大批量健康人體的體檢需求無法有效滿足。因此有必要探索更為準(zhǔn)確、快捷、有效的志賀菌的檢驗方法。

3.志賀菌的自動化分析儀檢驗技術(shù)

在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)快速發(fā)展的過程中，微生物檢驗則正向著自動化分析儀檢驗技術(shù)的方向所發(fā)展。美國分析化學(xué)家協(xié)會將法國生物梅里埃公司的Vitek-Ams系統(tǒng)作為全自動微生物分析系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)方法，其基礎(chǔ)為細(xì)菌的微量生化反應(yīng)，通過儀器對微量培養(yǎng)基的發(fā)酵情況進行自動檢測，計算機按照所接收的發(fā)酵信息來換算，同時和數(shù)據(jù)庫對比，獲得檢驗結(jié)果。

4.志賀菌的化學(xué)鑒定技術(shù)

分析發(fā)現(xiàn)，在細(xì)菌的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞壁及其內(nèi)含物中，化學(xué)分類信息比較豐富。多糖、蛋白質(zhì)、極性脂類、脂磷壁酸、脂溶性色素等也為化學(xué)分類法的應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。臨床研究發(fā)現(xiàn)，通過對病原菌中的弧菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、大腸埃希菌屬進行分析時，發(fā)現(xiàn)不同的細(xì)菌間細(xì)菌脂肪酸組成比例存在顯著差異，通過組成差別則能快速診斷病原菌[3]。

20世紀(jì)50年代以來，為了尋求快速、準(zhǔn)確、簡便、微量的檢驗方法，國內(nèi)外學(xué)者進行了大量的研究，從以傳統(tǒng)方法為基礎(chǔ)發(fā)展到以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的或以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的快速檢測方法，并在實踐檢驗中不斷取得新進展[4]。

5.志賀菌的免疫學(xué)檢驗技術(shù)

5.1 酶聯(lián)免疫吸附法

酶聯(lián)免疫吸附法作為使用最多、發(fā)展最快、應(yīng)用最早的一種檢驗方法，是經(jīng)免疫學(xué)或者化學(xué)的方法，將免疫反應(yīng)物形成酶標(biāo)記物，并和待檢驗樣品中的相應(yīng)抗體或者抗原結(jié)合，然后形成免疫復(fù)合物，經(jīng)水解或者酶催化后，利用酶標(biāo)儀、肉眼來對底物所產(chǎn)生的顏色進行觀察。通過間接酶聯(lián)免疫吸附法來對志賀菌純培養(yǎng)液進行檢測，具有較高的重復(fù)性、準(zhǔn)確度和特異性，適合用來快速檢測志賀菌，特別適合在基層進行應(yīng)用和推廣。但是酶聯(lián)免疫吸附法的試劑具有較高的選擇性，不能對多種成分進行同時分析，對于結(jié)構(gòu)類似的化合物存在交叉反應(yīng)，保存方法、時間、溫度、環(huán)境等因素容易對檢驗結(jié)果造成影響，所以需要輔助方法來進行檢驗[3]。

5.2 SPA協(xié)同凝聚法

SPA是指金黃色葡萄糖球菌A蛋白，處于菌體細(xì)胞壁的表面，能非特異性結(jié)合IgG的Fc段[5]。在SPA和大量抗體結(jié)合后，能顯著提高其靈敏度，能在1-2天內(nèi)獲得結(jié)果，所以SPA協(xié)同凝聚法具有操作簡單方便、靈敏、快速等特點，對于食品安全檢驗和檢測工作的需求能有效滿足。

5.3 蛋白質(zhì)印跡法

蛋白質(zhì)印跡法作為蛋白質(zhì)測定技術(shù)之一，是通過特異性抗體檢測樣品中的多克隆抗體或者微量抗原來對單克隆抗體進行檢測，同時連續(xù)分析轉(zhuǎn)移到固相膜上的蛋白質(zhì)[6]。蛋白質(zhì)印跡法具有較高的敏感度和特異性，能長時間保存固相膜，而且不需要對靶蛋白實施放射性核素標(biāo)志。

6.志賀菌的分子生物檢驗技術(shù)

6.1 PCR技術(shù)

PCR作為臨床中應(yīng)用非常廣泛的一種分子生物學(xué)診斷技術(shù)，其基礎(chǔ)為核酸生物學(xué)。PCR技術(shù)的原理和DNA天然復(fù)制過程比較類似。和常規(guī)培養(yǎng)檢測相比較，PCR檢測志賀菌的陽性率顯著更高，然而卻容易造成污染，出現(xiàn)假陽性，而且技術(shù)要求和檢測費用比較高，進而對其應(yīng)用造成一定的限制。

6.2 基因芯片

基因芯片也被稱之為DNA微陣列、DNA芯片、寡核苷酸陣列，選擇顯微打印或者原位合成手段，在支持物表面骨化DNA探針，形成二維DNA探針陣列，并和標(biāo)志物品雜交，對雜交信號進行檢測，進而來實現(xiàn)高效、快速檢測生物樣品?；蛐酒夹g(shù)具有較高的敏感性和特異性，而且操作簡單方便，自動化分析結(jié)果，進而來有效防止人為因素所引起的錯誤。

6.3 基因探針

基因探針是通過人工合成的方式，從微生物中制備DNA片段，對其進行純化，然后將熒光物質(zhì)、生物素、同位素等標(biāo)記上，形成具有特異性的DNA探針，對待測樣品和標(biāo)志性DNA探針間有無雜交分子進行檢測，進而來對樣品中有無目標(biāo)微生物進行判斷。采用基因探針技術(shù)能對DNA核酸序列點突變進行準(zhǔn)確和直接的分析，然而假陽性卻比較長，和常規(guī)PCR檢測相比較，基因探針技術(shù)的檢驗時間較長，不適合用于快速檢測。

除此之外臨床中常用的分子生物檢驗技術(shù)還包括隨機擴增多態(tài)性DNA技術(shù)、脈沖場凝膠電泳技術(shù)（PFGE）以及聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)等。

7.小結(jié)

在我國社會經(jīng)濟快速發(fā)展的過程中，食品安全衛(wèi)生檢測標(biāo)準(zhǔn)也越來越高，采用便捷、準(zhǔn)確和快速的檢驗技術(shù)也就顯得越來越關(guān)鍵?，F(xiàn)階段臨床中在對志賀菌進行檢測時，可供選擇的方法較多，各種檢驗方法也均具有各自的優(yōu)點和不足，在實際的檢驗中，應(yīng)結(jié)合檢驗的實際要求來選擇合理的檢驗技術(shù)，進而來保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

參考文獻：

[1]陳峰，吳爾翔，丁鎖順等.二聚體蝎型探針熒光定量PCR快速檢測志賀菌方法的建立及初步應(yīng)用[J].中國人獸共患病學(xué)報，2013，29（9）：886-890.

[2]李勁鋒.志賀菌志賀菌檢驗技術(shù)的研究進展[J].職業(yè)與健康，2014，30（13）：1874-1877.

[3]薛澤潤，王穎芳，段廣才等.志賀菌志賀菌中成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列的分子分布特征[J].中華流行病學(xué)雜志，2015，36（8）：875-878.

[4]黎敏英， 鄧樹軒， 葉朗光，等. 沙門氏菌檢測方法研究進展[J]. 畜牧與飼料科學(xué)， 2009， 30（03）：138-140.

[5]陳柳軍，鄒碧，余鈞池等.一株與沙門菌性狀非常相似的鮑氏志賀菌鑒定結(jié)果分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38（1）：135-136.

[6]盛躍穎，陳洪友，張曦等.免疫磁珠捕獲法檢測志賀菌志賀菌的模擬研究[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2012，27（3）：167-170.