孫旭，劉云云，馬曉昱，馬群，王劍，陳瑤

藥學(xué)

胃炎片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究＊

孫旭，劉云云，馬曉昱，馬群，王劍，陳瑤＊

目的探討胃炎片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的控制方法。方法采用TLC對胃炎片處方中的藥材成分白芍、原兒茶醛、丹參、延胡索、白芷進(jìn)行定性鑒別，并用HPLC對胃炎片中的有效成分丹參素鈉的含量進(jìn)行測定。結(jié)果胃炎片中白芍、原兒茶醛、丹參、延胡索、白芷的供試品薄層色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；丹參素鈉含量在10.17～162.77 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率98.8%（n=6），精密度RSD=0.15%。結(jié)論該方法結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

胃炎片；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；TLC；HPLC

胃炎片是海軍青島第二療養(yǎng)院經(jīng)多年臨床研究研制出的由丹參、白芍、白芷、延胡索和當(dāng)歸等中藥組成的純中藥制劑，具有行氣導(dǎo)滯，散寒化結(jié)的作用，用于脘腹疼痛，食積嘔吐，慢性胃炎，消化性潰瘍等癥的治療，取得良好的治療效果。為了進(jìn)一步完善該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，配合醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高，筆者對該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂，采用TLC法對處方中白芍、原兒茶醛、丹參、延胡索、白芷等進(jìn)行定性鑒別，采用HPLC法測定丹參中丹參素鈉的含量，結(jié)果表明本法結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，能有效控制該制劑質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器薄層層析硅膠G、硅膠G254（青島海洋化工集團(tuán)）；ZF-6型三用紫外分析儀；METTLER AE240電子天平；Agilent 1100高效液相色譜儀；AS-B超聲波清洗儀；HH-8電熱恒溫水浴鍋；HGB電熱恒溫干燥箱。

1.2 試藥對照藥材白芷（批號120945-201309）、丹參（批號120923-201414）；對照品芍藥苷（批號110736-201337）、原兒茶醛（批號110810-201007）、延胡索乙素（批號110726-201414）、丹參素鈉（批號110855-201311所，純度98.1%），上述對照品和對照藥材均購自中國食品藥品檢定所；胃炎片（批號20130401、20130902、20140101）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 白芍的鑒別［1，2］取本品10片，研細(xì)，加乙醇30 ml，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。再取不含白芍的陰性樣品，按供試品溶液項(xiàng)下方法制成陰性對照溶液。按照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

圖1 白芍的TLC圖

2.1.2 原兒茶醛的鑒別［1，2］取本品10片，加水50 ml使溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.0～3.0，用乙醚振搖提取2次，35 ml/次，合并乙醚液，置水浴蒸干，殘渣加無水乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取原兒茶醛對照品，加無水乙醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。再取不含原兒茶醛的陰性樣品，按供試品溶液項(xiàng)下方法制成陰性對照溶液。按照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸（8∶6∶1.2）為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外燈（254 nm）下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上呈相同的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖2。

圖2 原兒茶醛的TLC圖

2.1.3 丹參的鑒別［1，2］取本品10片，研細(xì)，加乙醚振蕩提取2次，20 ml/次，濾過，濾液低溫?fù)]干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材1.0 g，按供試品溶液項(xiàng)下方法制成對照藥材溶液。再取不含丹參的陰性樣品，按供試品溶液項(xiàng)下方法制成陰性對照溶液。按照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。結(jié)果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果見圖3。

圖3 丹參的TLC圖

2.1.4 延胡索的鑒別［1，2］取本品10片，加水25 ml使溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.0，濾過，濾液用濃氨試液調(diào)節(jié)pH至10～11，用乙醚振搖提取2次，20 ml/次，合并乙醚提取液，揮干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。取不含延胡索的陰性樣品，按供試品溶液項(xiàng)下方法制成陰性對照溶液。按照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5～10 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-二氯甲烷-甲醇（12∶8∶1）為展開劑，薄層板置展開缸中預(yù)飽和20 min，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏后，置紫外燈（365 nm）下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖4。

圖4 延胡索的TLC圖

2.1.5 白芷的鑒別［1，2］取本品10片，研細(xì)，加乙醚振搖提取2次，20 ml/次，合并乙醚提取液，濾過，乙醚提取液低溫?fù)]干，殘渣加乙酸乙酯1 ml使溶解，作為供試品溶液。取白芷對照藥材0.5 g，加乙醚10 ml，按供試品溶液項(xiàng)下方法制成對照藥材溶液。取不含白芷的陰性樣品，按供試品溶液項(xiàng)下方法制成陰性對照溶液。按照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5～10 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-乙醚（3∶2）為展開劑，在25℃以下展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖5。

圖5 白芷的TLC圖

2.2 丹參素鈉的含量測定［2-4］

2.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1%醋酸溶液（2∶98）為流動相；柱溫為25℃；流速1.0 ml/min，檢測波長280 nm。理論板數(shù)按丹參素鈉峰計算應(yīng)不低于2000。陰性對照、對照品以及供試品的HPLC色譜圖見圖6、7、8。

圖6 丹參素鈉對照品HPLC色譜圖

圖7 胃炎片樣品HPLC色譜圖

圖8 陰性對照品

2.2.2 對照品溶液的制備取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成濃度為1.017 mg/ml的對照品溶液（對照品儲備液），精密量取1 ml置25 ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得濃度為40.69 μg/ml的對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備精密稱取胃炎片樣品3.0 g，置具塞錐形瓶中，加入50%甲醇25 ml精密稱定，超聲處理30 min，放冷，用50%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，靜置，濾過，即得。

2.2.4 陰性對照品溶液的制備取缺制丹參的樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備成陰性對照品溶液。

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取“2.2.2”項(xiàng)下丹參素鈉對照品貯備液適量，用50%甲醇稀釋，得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。含丹參素鈉分別為10.17、20.35、40.69、81.38、162.77 μg/ml，分別取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積值為縱坐標(biāo)（Y），濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計算得回歸方程，Y= 13.668X+5.8019，R2=0.9998。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明丹參素在10.17～162.77 μg/ml的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn)精密吸取“2.2.5”項(xiàng)下40.69 μg/ ml對照品溶液20 μl，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積值，計算RSD為0.15%。說明儀器的精密度良好。

2.2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)取胃炎片（批號20130902），按“2.2.3”項(xiàng)下方法分別制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣20 μl，記錄丹參素鈉峰面積值，計算RSD（n=6）為1.64%，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)取胃炎片（批號20130902），按“2.2.3”項(xiàng)下方法配制供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12 h進(jìn)樣20 μl，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，測定丹參素鈉的峰面積，計算RSD為1.52%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的樣品（批號20130902）6份，在線性范周內(nèi)分別加入一定量的丹參素鈉對照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，結(jié)果詳見表1。結(jié)果說明本法回收率良好。

表1 胃炎片中丹參素鈉加樣回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

2.2.10 樣品含量測定按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別精密吸取“2.2.2”“2.2.3”項(xiàng)下溶液各20 μl，照2015年版《中國藥典》四部通則0512，進(jìn)樣3批樣品，每批樣品測定2份，以外標(biāo)法計算各個樣品中丹參素鈉的含量，結(jié)果詳見表2。

表2 胃炎片中丹參素鈉含量測定結(jié)果（n=2）

3 討論

3.1 TLC鑒別該文通過實(shí)驗(yàn)制定了丹參、白芍、白芷和延胡索的TLC鑒別方法，該方法特征斑點(diǎn)明顯色譜分離清晰，可作為胃炎片中的丹參、白芍、白芷和延胡索專屬性鑒別。

3.2 樣品溶液的制備該實(shí)驗(yàn)在前處理過程中進(jìn)行了不同提取溶劑的比較［1，3-6］，如酸處理-乙酸乙酯萃取或50%甲醇回流提取，結(jié)果表明采用本品研碎直接加50%甲醇超聲30 min提取制備丹參素鈉含量測定樣品溶液，可有效提取所含丹參素鈉；該方法簡便、可靠、重現(xiàn)性好，縮短了檢驗(yàn)流程，避免了回流提取萃取分離的煩瑣操作，節(jié)省了人力物力。

3.3 流動相選擇該實(shí)驗(yàn)亦比較了不同比例流動相對峰型、分離度的影響，如甲醇-1%HAc（2∶98），甲醇-1%HAc（4∶96），甲醇-1%HAc（6∶94），最終確定流動相為甲醇-1%HAc（2∶98）時丹參素鈉峰型及分離度較好。

該實(shí)驗(yàn)建立的含量測定方法經(jīng)方法學(xué)研究結(jié)果表明，該方法簡便、可行、快捷，專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確度、靈敏度及重現(xiàn)性好，可用于胃炎片的質(zhì)量控制。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［S］．2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：488-1297．

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部［S］．2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：57-61．

［3］李海燕，李振國，宋漢敏，等.HPLC測定冠心生脈口服液中丹參素鈉的含量［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（12）：78-79.

［4］周修森，方永凱.HPLC法測定柴丹舒利膠囊中丹參素的含量［J］.中國科技，2012，25（10）：25-27.

［5］李艷麗，張虹，陳湘玲，等.高效液相色譜法測定止眩通脈膠囊中丹參素鈉的含量［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，11（11）：823-834.

［6］胡曉琴，李進(jìn)，陳濤，等.HPLC法測定新生脈散片中丹參素鈉的含量［J］.天津中醫(yī)藥，2012，4（2）：181-183.

［2016－10－23收稿，2016－11－21修回］［本文編輯：劉一洋］

Study on the quality standard for Weiyan tablets

SUN Xü①，LIU Yun-yun，MA Xiao-yu，et al.
①Institute for Drug and Instrument Control of Shenyang Joint Service Support Center，Jinan，Shandong 250022，China

ObjectiveTo establish a control method of the quality standard for Weiyan tablets.Methods Radixpaeoniaealba，Protocatechuicaldehyde，Salviaemiltiorrhizae，Corydalistuber，Radixangelicaeinthis prescription were identified by TLC；and the content of Danshensu-sodium was determined by HPLC．ResultsThe spots in the TLC of Radix paeoniae alba，Protocatechuic aldehyde，Salviae miltiorrhizae，Corydalis tuber，Radix angelicae were in the same color with those in the chromatograms of control articles；the calibration curve of Danshensu-sodium was linear over the range of 10.17-162.77 μg/ml（r=0.9998），the average recovery rate was 98.8%（n=6）.ConclusionThe above method is easy，accurate and reproducible，which can be used effectively for the quality control of this preparation．

Weiyan tablets；Quality standard；TLC；HPLC

R975.1

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.05.024

軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題計劃（14ZJZ01-2）

250022山東濟(jì)南，沈陽聯(lián)勤保障中心藥品儀器檢驗(yàn)所（孫旭，劉云云，馬曉昱，陳瑤）；266100山東青島，海軍青島第二療養(yǎng)院（馬群，王劍）

陳瑤，Email：chenyao1975@163.com