石 瑋,陶夢(mèng)君,袁婷婷,董 娟,李 慧,李 娜,華 龍,孫月如,袁 慧**

(1.皖南醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，安徽 蕪湖 241002；2.皖南醫(yī)學(xué)院機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)中心)

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金錢(qián)草單劑及合劑(山藥)對(duì)高尿酸血癥小鼠的影響*

石 瑋1,陶夢(mèng)君1,袁婷婷1,董 娟2,李 慧2,李 娜1,華 龍1,孫月如1,袁 慧1**

(1.皖南醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，安徽 蕪湖 241002；2.皖南醫(yī)學(xué)院機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)中心)

目的 研究金錢(qián)草單劑及金錢(qián)草山藥合劑對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響。方法 SPF級(jí)雄性昆明小鼠80只隨機(jī)分組8組，每組10只。金錢(qián)草單劑高、中、低劑量組小鼠灌胃劑量分別為80g/kg、40g/kg和20g/kg，金錢(qián)草山藥合劑高、中、低劑量組小鼠灌胃劑量其中金錢(qián)草劑量分別為80g/kg、40g/kg和20g/kg，山藥劑量均為40g/kg，空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組灌胃等體積的蒸餾水。1次/d，連續(xù)7d。末次灌胃1h后，除了空白對(duì)照，其余各組均腹腔注射次黃嘌呤500mg/kg聯(lián)合皮下注射氧嗪酸鉀50mg/kg，建立急性高尿酸血癥模型。給藥后1h進(jìn)行眼眶取血，測(cè)量小鼠血清尿酸值。結(jié)果 陽(yáng)性對(duì)照組小鼠的血尿酸明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)，金錢(qián)草單劑各劑量組與金錢(qián)草山藥合劑各劑量組均有降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸的效果，與空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，但單劑與合劑的各劑量組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 金錢(qián)草單劑及金錢(qián)草山藥合劑預(yù)防性給藥均可降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平。

金錢(qián)草；山藥；高尿酸血癥；次黃嘌呤；氧嗪酸鉀

尿酸是人類(lèi)嘌呤化合物的終末代謝產(chǎn)物，高尿酸血癥指的是在正常嘌呤飲食狀態(tài)下，非同日兩次空腹血尿酸水平男>420μmol/L或女>360μmol/L。隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)水平的提高和生活方式的改變，高尿酸血癥和痛風(fēng)的患病率呈明顯上升趨勢(shì)[1]。引起痛風(fēng)的主要生化基礎(chǔ)是高尿酸血癥(hyperuricemia,HUA)，故而對(duì)血尿酸含量的控制是防治痛風(fēng)的首要措施。同時(shí)亦有研究表明高尿酸血癥也是心血管疾病的危險(xiǎn)因子[2-3]，所以防治高尿酸血癥意義重大。臨床上常用降尿酸的藥物均為西藥，療效尚可，但久服具有嚴(yán)重副作用，且停藥易反彈[4-5]。而大量文獻(xiàn)[6-9]提示中醫(yī)藥治痛風(fēng)和高尿酸血癥具有綜合療效較好，不良反應(yīng)少，安全可靠，且無(wú)明顯毒副反應(yīng)的優(yōu)勢(shì)。因此，從中醫(yī)藥和天然藥中尋找并開(kāi)發(fā)出抗痛風(fēng)和高尿酸血癥藥物具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

金錢(qián)草，又稱(chēng)過(guò)路黃，為報(bào)春花科植物的干燥全草，具有清熱利濕，通淋，消腫之功效，金錢(qián)草的主要有效成分為黃酮類(lèi)化合物，有研究表明金錢(qián)草含有的大量酚性物質(zhì)(如黃酮類(lèi)化合物)，具有黃嘌呤氧化酶抑制作用，其水提物能顯著地降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平[7]。但金錢(qián)草性微寒，單獨(dú)使用可能會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)脾虛，故多推薦增加補(bǔ)脾氣的中藥。而山藥具備健脾開(kāi)胃的效果[10]，且有止瀉利、化痰涎等功效。故本次研究在使用金錢(qián)草單劑的同時(shí)，增加了金錢(qián)草山藥合劑進(jìn)行干預(yù)，比較單劑與合劑降低血尿酸的效果，以期為治療痛風(fēng)和高尿酸血癥藥物的開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選擇SPF級(jí)雄性昆明小鼠，每只體重約20～25g，共80只，每籠10只飼養(yǎng)，溫度22℃，自由攝食飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)5d后用于實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑：金錢(qián)草(安徽省金芙蓉中藥飲片有限公司，批號(hào)：150201)；山藥(安徽省金芙蓉中藥飲片有限公司，批號(hào)150108)；次黃嘌呤、氧嗪酸鉀[阿拉丁試劑(上海)有限公司，批號(hào)20150309、20150329]；尿酸試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20150510、20150910、20151110)。

1.1.3 主要儀器及設(shè)備：紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(UV-5100，上海元析儀器有限公司)；分析天平(FA1104，上海光正醫(yī)療器械有限公司)；高速低溫離心機(jī)(X-30R，美國(guó)Beckman-Coulter公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 高尿酸血癥小鼠模型建立 選用徐立等[11]人的方法，利用次黃嘌呤和尿酸氧化酶抑制劑聯(lián)合作用，腹腔注射次黃嘌呤500mg/kg聯(lián)合皮下注射氧嗪酸鉀50mg/kg，制造小鼠代謝性高尿酸血癥模型，在給藥后1h進(jìn)行眼眶取血，測(cè)定血尿酸值。

1.2.2 金錢(qián)草、山藥水提液的提取制備 按水煎煮工藝制備金錢(qián)草水提液：將300g的金錢(qián)草放入5000mL圓底燒瓶中，加入3L蒸餾水中，浸泡1h，武火煎煮至沸騰，改為文火煎煮60min，過(guò)濾;二次煎煮時(shí)，加2L蒸餾水，沸騰后文火煎煮60min，過(guò)濾;三次煎煮時(shí)，加2L蒸餾水，沸騰后文火煎煮60min，過(guò)濾。將三次煎煮的濾液合并，用離心機(jī)3000r/min離心10min，將上清液取出濃縮定容至0.06L，制成每1mL含5g生藥的金錢(qián)草水提液，4℃冰箱存放。

按水煎煮工藝及上述流程方式制備山藥水提液，制成含生藥5g/mL的山藥水提液，4℃冰箱存放。

使用前將金錢(qián)草水提液稀釋成單劑高、中、低三個(gè)劑量，分別含生藥4g/mL、2g/mL和1g/mL；將金錢(qián)草水提液和山藥水提液混合稀釋成合劑高、中、低三個(gè)劑量，分別含生藥金錢(qián)草4g/mL和山藥2g/mL、金錢(qián)草2g/mL和山藥2g/mL、金錢(qián)草1g/mL和山藥2g/mL，以備使用。

1.2.3 動(dòng)物分組及給藥 將完成適應(yīng)性飼養(yǎng)的雄性小鼠進(jìn)行稱(chēng)重后隨機(jī)分組，分為空白對(duì)照組組，陽(yáng)性對(duì)照組，金錢(qián)草單劑低、中、高劑量組和金錢(qián)草山藥合劑低、中、高劑量組共8組，每組10只。分組后各組小鼠體重均值分布在22.40～23.42g之間，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.448，P=0.869>0.05)。

除正常飼養(yǎng)外，每天中午各組小鼠給予灌胃措施，連續(xù)7d?？瞻讓?duì)照組與陽(yáng)性對(duì)照組每天中午灌胃0.5mL蒸餾水，各劑量組灌胃0.5mL相應(yīng)組別劑量的單劑或合劑。金錢(qián)草單劑高、中、低劑量組小鼠灌胃劑量分別為80g/kg、40g/kg和20g/kg，金錢(qián)草山藥合劑高、中、低劑量組小鼠灌胃劑量其中金錢(qián)草劑量分別為80g/kg、40g/kg和20g/kg，山藥劑量均為40g/kg。連續(xù)灌胃7d后，除空白對(duì)照組，其余各組利用氧嗪酸鉀皮下注射50mg/kg和次黃嘌呤腹腔注射500mg/kg制造小鼠高尿酸血癥模型，注射1h后小鼠眼眶取血。

1.2.4 血清尿酸測(cè)定 小鼠取血后常溫靜置30min，5000r/min，4℃離心10min，分離上清，利用血清尿酸試劑盒及紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定血清尿酸值。

2 結(jié) 果

2.1 小鼠尿酸值含量分布比較 根據(jù)各劑量組不同金錢(qián)草配方灌胃飼養(yǎng)小鼠一周后，給予高尿酸模型制造藥物造模，1h后眼眶取血，測(cè)定血清中尿酸值含量。各劑量組中金錢(qián)草山藥合劑高劑量組小鼠血清尿酸值含量最低，為(888.09±133.97)μmol/L；金錢(qián)草山藥合劑低劑量組小鼠血清尿酸值含量最高，為(979.20±43.81)μmol/L。各組間進(jìn)行方差分析，差異有顯著性(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 金錢(qián)草不同劑量組小鼠尿酸值含量分布

2.2 小鼠血尿酸值兩兩比較 將不同劑量組測(cè)定的小鼠血尿酸值進(jìn)行兩兩比較，得到如下結(jié)果，見(jiàn)表2。根據(jù)表中數(shù)據(jù)可知，每個(gè)劑量組與空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但是單劑與合劑的各劑量組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 金錢(qián)草單劑及金錢(qián)草山藥合劑各劑量組小鼠血尿酸值兩兩比較P值表

3 討 論

高尿酸血癥是預(yù)防痛風(fēng)發(fā)生的首要關(guān)鍵疾病，我國(guó)高尿酸血癥(HUA)人群患病率呈明顯上升趨勢(shì)。1998年對(duì)上海2037名人群研究發(fā)現(xiàn)男性HUA的患病率為14.2%，女性為7.1%，總體患病率10.1%[12]。2003年南京邵繼紅等[13]的研究是男性17.6%、女性9.3%。2013年哈爾濱地區(qū)人群HUA男性患病率為26.83%，女性患病率為11.12%[14]。因此對(duì)于這種疾病，我們必須給予足夠的重視。

張淑哲等[4]和張俊杰等[5]的研究中均提到目前臨床用藥均為西藥，雖然療效尚可，但久服具有嚴(yán)重的副作用，且停藥易反彈，從而影響患者的依從性。他們?cè)谄溲芯恐幸蔡岬街兴幍木C合療效較好，不良反應(yīng)少，安全可靠。劉曉平[8]在研究中所提到的傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療痛風(fēng)具有許多優(yōu)勢(shì)，可以進(jìn)行全身調(diào)節(jié)，標(biāo)本兼治，防治并舉，且無(wú)明顯毒副反應(yīng)。通過(guò)對(duì)近5年來(lái)中藥治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的文獻(xiàn)回顧,發(fā)現(xiàn)中藥內(nèi)服從脾虛濕阻、肝脾濕熱，尤其是濕濁毒瘀辨治取得良好療效，中藥內(nèi)外合治亦取得良好療效[9]。因此認(rèn)為研究人員應(yīng)結(jié)合痛風(fēng)的中醫(yī)發(fā)病機(jī)理，從調(diào)節(jié)肝、腎、脾、胃功能入手，在中醫(yī)藥和天然藥中尋找并開(kāi)發(fā)出療效明確、毒副反應(yīng)少的抗痛風(fēng)和高尿酸血癥藥物[6]。

近年來(lái)對(duì)于中草藥在痛風(fēng)治療中作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究也逐漸增多，科研人員利用大鼠或小鼠給予外源性的嘌呤來(lái)源或抑制嘌呤分解的酶制劑制造高尿酸血癥模型或痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，了解藥物對(duì)痛風(fēng)治療的效果[15-16]。

本次研究使用的主要有效藥物為金錢(qián)草，其有效成分主要為金錢(qián)草總黃酮。本次研究結(jié)果顯示陽(yáng)性對(duì)照組血尿酸值高達(dá)1114.43μmol/L，各種劑量組血尿酸值均低于980μmol/L，各劑量組包括金錢(qián)草單劑組與金錢(qián)草山藥合劑組均與模型組的血清尿酸值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明使用金錢(qián)草單劑與合劑對(duì)于降低小鼠高尿酸血癥的血清尿酸值有明顯作用。同時(shí)于舒雁[17]研究發(fā)現(xiàn)金錢(qián)草總黃酮對(duì)高尿酸血癥大鼠小鼠的血清尿酸值均有降低作用，這與本次研究的結(jié)果一致。有其他研究[18]表明金錢(qián)草具有良好的利尿作用，能夠預(yù)防腎結(jié)石的發(fā)生，故認(rèn)為金錢(qián)草能夠降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸值，可能原因是金錢(qián)草可以加快尿酸的排泄速度，起到了降低血清尿酸值的作用。但金錢(qián)草對(duì)于腎臟排泄干預(yù)的詳細(xì)機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，各劑量組之間的小鼠血清尿酸值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明各劑量組降低小鼠高尿酸血癥血清尿酸值的效果是基本一致的。盡管各組之間的血清尿酸值均值比較無(wú)差異，但高劑量金錢(qián)草山藥合劑組的尿酸值最低，為(888.09±133.97)μmol/L，提示可能是最佳劑量配方，且在實(shí)驗(yàn)灌胃過(guò)程中發(fā)現(xiàn)合劑組小鼠對(duì)于藥物的接受程度明顯好于單劑組，灌胃后出現(xiàn)的吐藥和灌胃后精神狀態(tài)不佳的情況明顯少于單劑組。但實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠之間存在較大的個(gè)體差異，可能也是本次實(shí)驗(yàn)未能看到明顯量效關(guān)系的原因之一，故對(duì)于治療小鼠高尿酸血癥的最佳金錢(qián)草劑量及配方仍需進(jìn)一步分析研究。

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The Effect of Lysimachia Cristinae Hance and Yam on Hyperuricemia in Mice

SHI Wei,TAO Meng-jun,YUAN Hui,et al

(StaffroomofPreventiveMedicine,SchoolofPublicHealth,Wannanmedicalcollege,WuhuAnhui241002,China)

Objective To study the effect of Lysimachia Cristinae Hance (mixed with Yam) on Hyperuricemia in Mice. Methods 80 male,Kunming,SPF mice were randomly dividend into 8 groups (10 mice in each group):control group,model group,different dosage groups of Lysimachia Cristinae Hance single agent (80g/kg,40g/kg and 20g/kg) and Lysimachia Cristinae Hance plus Yam mixture(80g/kg,40g/kg and 20g/kg) and the Yam agents of mixture groups(40g/kg only).To feed the mice with different dose of medicine once a day lasting one week,and after the last feeding,give the mice i.p.injection of hypoxanthine in a dose of 500 mg/kg and s.c.injection of uricase inhibitor in a dose of 50 mg/kg.An hour later，the concentration of serum uric acid was measured.Results The levels of serum uric acid in mice between different dose groups and model group were significantly different(P<0.05).The level of serum uric acid in mice among different dose groups were not significantly different.Conclusion Lysimachia Cristinae Hance single agent and Lysimachia Cristinae Hance plus Yam mixture agent could significantly decrease the level of the serum uric acid in hyperuricemic mice.

Lysimachia cristinae hance;Yam;Hyperuricemia；Hypoxanthine;Oteacil potassium

安徽省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項(xiàng)目AH201410368110

R-332

A

2095-4646(2017)02-0104-04

10.16751/j.cnki.2095-4646.2017.02.0104

2016-12-05)

**通訊作者：E-mail：782213588@qq.com