李 偉 袁 方 劉丙麗 張冠群 劉 君 朱 亮 王江波 劉志廣

血清膠質(zhì)纖維酸性蛋白對腦膠質(zhì)瘤的診斷及判斷預(yù)后的價值

李 偉 袁 方 劉丙麗 張冠群 劉 君 朱 亮 王江波 劉志廣

目的 檢測膠質(zhì)瘤患者膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)，分析其與腦膠質(zhì)瘤診斷及轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。方法 選取膠質(zhì)瘤患者60例作為實驗組，顱內(nèi)良性腫瘤患者40例作為對照組，ELISA法檢測入組患者血清GFAP含量，免疫組織化學(xué)法法檢測膠質(zhì)瘤組織、癌旁組織、對照組腦組織中GFAP表達，分析膠質(zhì)瘤患者GFAP表達與其臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果 腦膠質(zhì)瘤組GFAP含量為(0.05±0.04) ng/ml，較良性腫瘤組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；膠質(zhì)瘤組織中出現(xiàn)7例GFAP陽性表達(++)，陽性率11.7%，較癌旁組織、良性腫瘤組織的低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；腦膠質(zhì)瘤組GFAP表達水平與膠質(zhì)瘤病理類型、原發(fā)灶數(shù)目及大小、其他臟器轉(zhuǎn)移、放療、化療有關(guān)(P<0.05)，與年齡、性別、PS評分無關(guān)(P>0.05)；病理類型、原發(fā)灶數(shù)目及大小、遠處轉(zhuǎn)移、放療、化療均是獨立危險因素(P<0.05)。結(jié)論

腦膠質(zhì)瘤；血清膠質(zhì)纖維酸性蛋白；臨床病理特征

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:719～721)

腦膠質(zhì)瘤是最常見的惡性顱內(nèi)原發(fā)性腫瘤，目前其診斷主要依賴影像學(xué)檢查，即使是最先進的MRI 檢查也不能完全確診，尤其是那些影像學(xué)表現(xiàn)不典型的病例[1]。研究者們致力于尋找更為準確有效的標志物來診斷膠質(zhì)瘤及判斷預(yù)后。膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)是星形細胞胞質(zhì)內(nèi)的特異性中間絲結(jié)構(gòu)蛋白[2]，研究提示，GFAP在維持星形細胞形態(tài)、決定細胞分化和細胞功能方面具有特別的作用[3]。本研究選取在我院住院的腦膠質(zhì)瘤患者，檢測其GFAP的表達變化，分析其與腦膠質(zhì)瘤診斷及轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2016年1月在我院住院的腦膠質(zhì)瘤患者60例作為實驗對象，其中，男性22 例，女性18 例，年齡30～70歲，平均年齡(43.22±6.24) 歲。均經(jīng)細胞學(xué)或組織病理學(xué)確認為腦膠質(zhì)瘤，并接受手術(shù)治療。其中，星形細胞瘤22例，室管膜瘤18例，少突膠質(zhì)細胞瘤12例，膠質(zhì)母細胞瘤8例。選擇同時期在我院住院的顱內(nèi)良性腫瘤患者40例作為對照組，其中，男性19 例，女性21 例，年齡30～68歲，平均年齡(44.12±3.44) 歲。包括垂體瘤13 例，腦膜瘤11 例，神經(jīng)鞘瘤8 例，中樞神經(jīng)細胞瘤2 例，膽脂瘤2 例，海綿狀血管瘤4 例。入組患者在年齡、性別等方面無顯著差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 實驗方法

1.2.1 試劑及器材 Na2EDTA抗凝劑；GFAP ELISA試劑盒；GFAP封閉液+一抗，兔抗鼠免疫組化二抗試劑盒；離心機(上海飛鴿)；顯微鏡(日本Olympus)；酶標儀(英國TECNA)；脫水機(日本TIYODA)；切片機(德國Leica)；計算機圖像分析系統(tǒng)(美國惠普)。

1.2.2 ELISA法檢測入組患者血液中GFAP含量 入組患者抽取空腹靜脈血，1 500 r/min離心10 min后吸取上清，保存于低溫冰箱中。計算板孔數(shù)；試劑盒常溫放置30 min；標準品稀釋；每個濃度均設(shè)5個復(fù)孔，加樣；配液；洗滌；顯色；終止；酶標儀以450 nm的波長處測量吸光值；繪制線性回歸方程，計算樣品濃度。

1.2.3 IHC法檢測組織中GFAP的表達 福爾馬林液固定、脫水、透明；包埋、切片；熱修復(fù)；過氧化氫阻斷；正常山羊血清封閉；加一抗50 μl靜置1 h；加二抗50 μl 靜置10 min；顯色、終止；復(fù)染、分化；封片。

判斷標準：GFAP陽性結(jié)果判定以細胞核不染色，胞膜或胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，陰性(-)：染色細胞數(shù)≤10%；弱陽性(+)：11%～25%；陽性(++)：26%～50%；強陽性(+++)：>50%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料用χ2檢驗，計量資料用方差分析，以(均數(shù)±標準差)表示，多因素用Logistic回歸模型，P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ELISA法檢測入組患者血清中GFAP含量

抽取入組患者外周靜脈血，檢測血清GFAP含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)瘤組GFAP為(0.05±0.04) ng/ml，較良性腫瘤組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 IHC法檢測入組患者組織中GFAP表達

對入組患者組織中GFAP的表達進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，膠質(zhì)瘤組織中出現(xiàn)7例陽性表達(++)，陽性率為11.7%，較癌旁組織、良性腫瘤組織降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；具體結(jié)果見表1。

表1 IHC法檢測入組患者組織中GFAP表達情況/例

注：*為與癌旁組織比較，P<0.05；#為與良性腫瘤組織比較，P<0.05。

2.3 GFAP表達與腦膠質(zhì)瘤臨床病理特征的相關(guān)性

GFAP表達與膠質(zhì)瘤病理類型、原發(fā)灶數(shù)目及大小、其他臟器轉(zhuǎn)移、放療、化療有關(guān)(P<0.05)，與年齡、性別、PS評分無關(guān)(P>0.05)；具體結(jié)果見表2。

表2 GFAP表達與腦膠質(zhì)瘤臨床病理特征的相關(guān)性(例，%)

2.4 GFAP表達與膠質(zhì)瘤臨床病理特征的多因素分析

多因素分析結(jié)果顯示：病理類型、原發(fā)灶數(shù)目及大小、遠處轉(zhuǎn)移、放療、化療均是獨立危險因素，具體結(jié)果見表3。

表3 GFAP表達與膠質(zhì)瘤臨床病理特征的多因素分析

3 討論

目前，改善腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的主要治療方法即手術(shù)切除，但腦膠質(zhì)瘤患者缺乏典型的早期臨床表現(xiàn)，影像學(xué)檢查在早期無法確診，常常貽誤最佳的治療時機[4]。因此，尋找能夠協(xié)助診斷及判斷預(yù)后的新指標至關(guān)重要。膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)是1種分子量為50～52 kD的酸性蛋白，屬細胞骨骼蛋白，是星形細胞的標志蛋白，在星形細胞中有豐富的、唯一的表達[5]。在缺血損傷時，刺激成熟星形細胞合成GFAP，GFAP 主要用于標記損傷后膠質(zhì)活動。在正常情況下GFAP 受星形膠質(zhì)細胞的動力調(diào)節(jié)[6]。本研究選取在我院住院的腦膠質(zhì)瘤患者，檢測其GFAP的表達變化，分析其與腦膠質(zhì)瘤診斷及轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。

在本研究中，選取我院腦膠質(zhì)瘤及良性顱腦腫瘤患者，檢測患者血清GFAP含量發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)瘤組GFAP較良性腫瘤組降低。進一步對腦膠質(zhì)瘤組織、癌旁組織及對照組腦組織中GFAP表達檢測發(fā)現(xiàn)，膠質(zhì)瘤組織中GFAP陽性率11.7%，較癌旁組織、良性腫瘤組織降低。這表明，在腦膠質(zhì)瘤血清及組織中均存在GFAP的表達下降。既往實驗發(fā)現(xiàn)，GFAP 基因敲除小鼠的星形細胞高表達祖細胞標志物nestin，且這種細胞中間絲形成減少，生長時飽和密度增高[7]，提示GFAP 表達的喪失能使細胞呈現(xiàn)惡性表型,并使膠質(zhì)瘤進展更迅速。

本研究對腦膠質(zhì)瘤組GFAP表達與臨床病理特征的關(guān)系分析發(fā)現(xiàn)，GFAP表達與膠質(zhì)瘤的病理類型、原發(fā)灶數(shù)目及大小、其他臟器轉(zhuǎn)移、放療、化療有關(guān)，與年齡、性別、PS評分無關(guān)；病理類型、原發(fā)灶數(shù)目及大小、遠處轉(zhuǎn)移、放療、化療均是獨立危險因素。許多研究者利用GFAP 免疫組織化學(xué)技術(shù)對大量腦腫瘤進行觀察表明膠質(zhì)瘤的惡性程度與GFAP 表達呈顯著負相關(guān)，即分化越差，GFAP表達越少甚至完全不表達，認為GFAP 可以作為該類腫瘤惡性程度及預(yù)后判定的一項良好的標志物[8]。將GFAP 基因?qū)氩槐磉_GFAP 的髓母細胞瘤瘤細胞中，細胞生長受抑，形態(tài)顯著改變并向星形細胞分化，GFAP 重新獲得表達，表達程度與腫瘤的增殖、分化呈明顯負相關(guān)[9]。瘤細胞對抗癌藥物的敏感性提高[10]。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤患者存在GFAP的表達降低，其表達水平與腦膠質(zhì)瘤的病理類型、原發(fā)灶數(shù)目及大小、其他臟器轉(zhuǎn)移、放療、化療有關(guān)。星形細胞瘤，原發(fā)灶數(shù)目少，病灶小，無遠處轉(zhuǎn)移，接受放化療等抗腫瘤治療者，GFAP水平升高。GFAP可能作為腦膠質(zhì)瘤患者早期診斷及判斷預(yù)后的新指標。

[1] 陳梅花,陳貴珍, 賈萬鈞.Ki67、GFAP 在人腦惡性膠質(zhì)瘤病理分級中的意義〔J〕.中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2014,18(11):31-34.

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(編輯：吳小紅)

Value of GFAP in the Diagnosis and Prediction of Clinical Outcome of Glioma

LIWei,YUANFang,LIUBingli,etal.

XuzhouCentralHospital,Xuzhou,221009

Objective To study glial fibers acidic protein (GFAP) in glioma,to analyze its relationship with the diagnosis and outcome of glioma.Methods 60 patients with glioma were selected as experimental objects,40 patients with intracranial benign tumor was the control group, ELISA method was used to detect the contents of serum GFAP,immune histochemical method was used to detect GFAP expression in glioma tissues,tissue adjacent to carcinoma,and brain tissues of the control group.Relevance of GFAP expression of glioma and clinical pathological features were analyzed.Results The expression of GFAP in glioma group was (0.05±0.04) ng/ml,which was lower than that in benign tumor group (P<0.05).There were 7 cases of GFAP positive expression in glioma tissues,(P<0.05).The expression of GFAP in the glioma group was significantly correlated with the pathological type,the number and size of the primary tumor in the glioma group,and the difference was statistically significant (P<0.05) (P<0.05),which was independent of age,sex and PS score (P>0.05).Pathological type,number and size of primary tumor,distant metastasis,radiotherapy and chemotherapy were independent risk factors (P<0.05).Conclusion Expression of GFAP in glioma patients reduced,and GFAP expression level are related with pathological type,number and size of original site of glioma,transfer of other organs,radiotherapy and chemotherapy.

Glioma;Serum acidic protein glial fibers;Clinical pathological features

江蘇省徐州市科技項目(編號:KC14SH029)

221009 江蘇省徐州市中心醫(yī)院

劉志廣

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.05.007

R739.41

A

1001-5930(2017)05-0719-03

2016-07-08

2017-03-12)

腦膠質(zhì)瘤患者存在GFAP的表達降低，其表達水平與腦膠質(zhì)瘤的病理類型、原發(fā)灶數(shù)目及大小、其他臟器轉(zhuǎn)移、放療、化療有關(guān)。