鄔登敏，陳啟紅，柳兵，曾同祥

長江大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 荊州市中心醫(yī)院皮膚科，湖北 荊州 434023

電化學(xué)發(fā)光法與時間分辨熒光免疫法檢測AFP的臨床應(yīng)用

鄔登敏，陳啟紅，柳兵，曾同祥

長江大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 荊州市中心醫(yī)院皮膚科，湖北 荊州 434023

目的：分析電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA)與時間分辨熒光免疫法(TRFIA)檢測AFP的臨床應(yīng)用。方法： 釆用ECLIA和TRFIA兩種方法同時檢測5組血清甲胎蛋白(AFP)含量，其中肝癌120例，胃癌48例，乳腺癌32例，卵巢癌45例；健康人群50例。觀察兩者的準(zhǔn)確率、穩(wěn)定性、線性范圍與相關(guān)性回歸分析。結(jié)果：肝癌組AFP值(ECLIA法: 520.36±354.26ng/mL;TRFIA 法: 558.48±360.27ng/mL)，胃癌組(ECLIA法:15.38±2.34ng/mL;TRFIA法: 18.63±1.42ng/mL)，乳腺癌組(ECLIA法:10.35±3.51ng/mL;TRFIA法: 18.63±1.42ng/mL),卵巢癌組(TRFIA法:11.81±4.36ng/mL;ECLIA法:13.53±2.96ng/mL)。正常組(ECLIA法:6.32±5.14ng/mL；TRFIA法:6.51±5.42ng/mL)，兩種方法檢測結(jié)果無顯著差異(P>0.05),其相關(guān)系數(shù)為0.992,呈正相關(guān)。ECLIA法與TRFIA法批內(nèi)批間變異系數(shù)分別低于2.9%和5.7%,前者優(yōu)于后者。結(jié)論： TRFIA法和ECLIA法檢測AFP具有較好的準(zhǔn)確率、穩(wěn)定性及相關(guān)性,可應(yīng)用于臨床血清AFP的檢測。

電化學(xué)發(fā)光法； 時間分辨熒光免疫法； 甲胎蛋白

本研究通過TRFIA法和ECLIA法檢測不同腫瘤患者血清AFP含量，并對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，旨在進(jìn)一步了解TRFIA法和ECLIA法的應(yīng)用特點(diǎn)及對各類良、惡性腫瘤AFP測定值的影響。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

各類良、惡性腫瘤標(biāo)本共245例,其中原發(fā)性肝癌120例,胃癌48例，乳腺癌32例,卵巢癌45例；健康對照組50例。均為2015年7月至2016年7月在我院住院與體檢人群,年齡和性別無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,符合美國癌癥聯(lián)合會 (AJCC2002＇6th)提出的惡性腫瘤TNM的臨床診斷與分期指標(biāo)。

采集標(biāo)本均為晨起空腹靜脈血3mL，并于2h內(nèi)分離血清，置-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 儀器與試劑

上海新波生物技術(shù)公司ANYTEST2000時間分辨熒光測定儀及配套試劑，美國雅培公司i2000SR全自動微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)操作過程均嚴(yán)格按照試劑盒說明書和儀器操作規(guī)程進(jìn)行。AFP≤20ng/mL為陰性，AFP>20ng/mL為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 ECLIA與TRFIA法測定AFP值

用ECLIA和TRFIA兩種方法同時檢測5組血清甲胎蛋白(AFP)含量數(shù)值，見表1。

表1 ECLIA與TRFIA法檢測AFP含量結(jié)果比較

注：與同組ECLIA法測定平均值比較，*P>0.05；與健康對照組比較，#P<0.01。

2.2 線性試驗(yàn)

將AFP測定值在(500～520)ng/mL范圍內(nèi)的5份血清混合，重復(fù)測定5次取平均值。將混合血清6點(diǎn)倍比稀釋，重復(fù)測定3次，以平均值為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算理論值，再根據(jù)理論值的稀釋倍數(shù)與6種濃度血清實(shí)際測定值作對比，進(jìn)行線性回歸分析。ECLIA法回歸方程為：Y= 0.9903X-3.7131,r2=0.9998；TRFIA法回歸方程為：Y=1.0171X-0.2211,r2=0.9946。

ECLIA法在(0～1000)ng/mL范圍內(nèi)線性良好，TRFIA法在(2.85～680)ng/mL范圍內(nèi)線性良好。ECLIA法比TRFIA法具有更寬的檢測范圍。

2.3 相關(guān)性分析

圖1 ECLIA法與TRFIA法相關(guān)性回歸分析

兩種方法測得結(jié)果取平均數(shù)比較(配對t檢驗(yàn))無差異性(P>0.05)；兩種方法回歸分析，以ECLIA結(jié)果為自變量X，以TRFIA結(jié)果為因變量Y,計(jì)算相關(guān)系數(shù)和回歸方程，直線回歸方程為Y=0.9891X+1.5623,r2=0.992，兩者呈顯著正相關(guān)。見圖1。

2.4 精密度試驗(yàn)

表2 ECLIA與TRFIA法重復(fù)檢測AFP標(biāo)準(zhǔn)品結(jié)果比較

3 討論

甲胎蛋白由胚胎肝、卵黃囊和胃腸上皮細(xì)胞產(chǎn)生,成人的甲胎蛋白由肝臟產(chǎn)生，是單鏈多肽糖蛋白，在血清中的半衰期為3.5～6d。肝細(xì)胞癌、卵黃囊和胚胎性腫瘤及部分肝外腫瘤可重新合成甲胎蛋白，在妊娠早期胎兒血清中濃度很高，出生后6個月～1年可降至健康成人水平。以后在沒有疾病的情況下，終身將維持低水平。但在細(xì)胞惡變過程中，某些細(xì)胞基因被重新激活，細(xì)胞重新開始合成AFP，以致其含量在腫瘤患者體內(nèi)明顯增加，故測定血清AFP濃度對各相應(yīng)惡性腫瘤的早期診斷和治療監(jiān)測具有重要參考價(jià)值[1]。

時間分辨熒光免疫測定的基本原理是以鑭系元素銪(Eu)螯合物作為熒光標(biāo)記物，利用這類熒光物質(zhì)壽命長的特點(diǎn)，延長熒光測量時間，待短壽命的自然本底熒光完全衰退后再行測定。所得信號完全為長壽命的鑭系螯合物的熒光，從而有效排除非特異性本底熒光的干擾而提高靈敏度[2]。

另外TRFIA的線性范圍寬，也是因?yàn)門RFIA采用銪離子(Eu3+)作為標(biāo)記物。由于銪離子(Eu3+)發(fā)光信號具有寬線性，同時采用獨(dú)特的熒光解離增強(qiáng)技術(shù)，有非常優(yōu)良的可檢測性，大大提高了TRFIA的檢測線性[3]。

TRFIA與傳統(tǒng)的方法相比較，具有靈敏度高、操作簡便、示蹤物穩(wěn)定、標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍寬、不受樣品自然熒光干擾、無放射性污染、標(biāo)記物儲存時間長的優(yōu)點(diǎn)[4，5]。TRFIA法也有其缺點(diǎn)，如果一次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)沒做好，這批的結(jié)果可能都會受影響，甚至完全出不了結(jié)果。TRFIA法更適合大批量標(biāo)本檢測[6]。

ECLIA法是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個過程，可對反應(yīng)進(jìn)行精確控制，能對各種物質(zhì)進(jìn)行快速分析，是目前最先進(jìn)的標(biāo)記免疫檢測技術(shù)[7]。采用電促化學(xué)發(fā)光，使用非同位素金屬三聯(lián)吡啶釕作為標(biāo)記物，但電極激發(fā)在三丙胺的參與下迅速穩(wěn)定發(fā)光，使得檢測結(jié)果穩(wěn)定可靠，磁性微珠包被技術(shù)的應(yīng)用提高了檢測的靈敏度[8]。

電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測采用磁性微珠包被技術(shù)，由于微珠體積小可以吸附更多的抗原或抗體，同時磁珠的核心是鐵，在磁場中很快下沉，因此容易進(jìn)行洗滌和固相載體分離[9]。發(fā)光信號檢測的寬線性加上獨(dú)特的標(biāo)記物本身循環(huán)發(fā)光，使電化學(xué)發(fā)光檢測的線性范圍更寬。

試劑穩(wěn)定性好、有效期長，是由于同位素金屬三聯(lián)吡啶釕在自然環(huán)境下非常穩(wěn)定，因此用它標(biāo)記的試劑也非常穩(wěn)定[10]。但檢測儀器試劑大多需進(jìn)口，成本昂貴。

本研究釆用兩種方法同時檢測4種不同腫瘤患者血清AFP含量，對比檢測結(jié)果無顯著差異(P>0．05)，其相關(guān)系數(shù)為r2=0.992，結(jié)果呈正相關(guān)。重復(fù)試驗(yàn)ECLIA法和TRFIA法批內(nèi)批間變異系數(shù)CV%均≤6% ，兩種方法略有不同。電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測結(jié)果的穩(wěn)定性、靈敏度、精密度均優(yōu)于時間分辨熒光免疫法，兩種儀器在臨床中可結(jié)合實(shí)際需要同時或交替使用。

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[編輯] 何勇

2016-12-05

鄔登敏(1984-)，女，檢驗(yàn)師，主要從事臨床檢驗(yàn)診斷工作，794948832@qq.com。

R730.23

A

1673-1409(2017)08-0044-03

[引著格式]鄔登敏，陳啟紅，柳兵，等.電化學(xué)發(fā)光法與時間分辨熒光免疫法檢測AFP的臨床應(yīng)用[J].長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版) ,2017,14(8):44～46.