朱創(chuàng),劉增輝,趙永青,邰玲玲,徐燕*
1. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院,安徽 合肥 230036;2. 茶樹生物學(xué)與資源利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,安徽 合肥 230036;3. 安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院,安徽 合肥 230061
紅茶提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠血尿酸的影響
朱創(chuàng)1,2,劉增輝3,趙永青1,2,邰玲玲1,2,徐燕1,2*
1. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院,安徽 合肥 230036;2. 茶樹生物學(xué)與資源利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,安徽 合肥 230036;3. 安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院,安徽 合肥 230061
研究紅茶提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠血尿酸的影響。將36只雄性KM小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、紅茶提取物低、中、高劑量組及別嘌呤醇組??瞻捉M和給茶組連續(xù) 1周分別灌胃生理鹽水和紅茶提取物,給茶組第7天造模后1 h給茶;模型組在第7天腹腔注射氧嗪酸鉀并灌胃酵母膏造模。測(cè)定結(jié)果顯示:與模型組相比,各給茶組血尿酸(UA)水平均降低;與模型組相比,給茶組血尿素氮(BUN)水平均降低,其中、高劑量給茶組BUN水平顯著降低(P<0.05),高劑量組差異極顯著(P<0.01);各給茶組血肌酐(Cr)值與模型組相比極顯著下降(P<0.001)。高劑量組黃嘌呤氧化酶(XOD)活性較模型組顯著降低(P<0.05),低、中劑量組有一定的抑制作用,但無(wú)顯著差異。研究表明,紅茶提取物對(duì)氧嗪酸鉀和酵母膏導(dǎo)致的小鼠高尿酸血癥有明顯的改善作用。
紅茶提取物;高尿酸血癥;尿酸;黃嘌呤氧化酶
近年來(lái),痛風(fēng)的發(fā)病率不斷上升,它是人體嘌呤代謝異常導(dǎo)致的綜合征,高尿酸血癥是其病變發(fā)展的一個(gè)重要階段。尿酸是大多數(shù)動(dòng)物體內(nèi)嘌呤代謝的終產(chǎn)物,主要由黃嘌呤氧化酶(XOD)催化次黃嘌呤與黃嘌呤而產(chǎn)生,當(dāng)動(dòng)物體內(nèi)尿酸生成增多和(或)尿酸排泄與分解減少導(dǎo)致尿酸蓄積就可能會(huì)發(fā)生高尿酸血癥。當(dāng)男性血尿酸濃度高于417 μmol·L-1,女性血尿酸濃度高于357 μmol·L-1時(shí),稱之為高尿酸血癥[1]。研究發(fā)現(xiàn),高尿酸血癥患者不僅口腔癌、肝癌等的發(fā)病率高,而且與肥胖、高血壓、高血糖等代謝性疾病密切相關(guān)[2-4]。因此,高尿酸血癥已成為影響人類健康的重要疾病。
紅茶屬于全發(fā)酵茶類,不僅含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分,而且含有兒茶素、茶黃素和茶紅素等重要的品質(zhì)和功能成分[5],具有減肥、降血糖、預(yù)防心血管疾病、抗癌、抗帕金森癥和抗HIV病毒的感染等多種功效[6-10]。文獻(xiàn)報(bào)道茶多酚[11]、茶樹根提取物[12]有一定的降尿酸作用,但目前少有文獻(xiàn)報(bào)道紅茶的降尿酸作用。本研究通過(guò)高尿酸模型小鼠實(shí)施紅茶干預(yù),探討其對(duì)高尿酸血癥小鼠的影響,并進(jìn)一步探究其作用機(jī)制,為降尿酸藥物的開發(fā)和利用提供理論依據(jù)。
1.1 材料
1.1.1 動(dòng)物
SPF級(jí)KM小鼠36只,雄性,(25±2) g,購(gòu)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(滬)2012-0002。試驗(yàn)前適應(yīng)環(huán)境1周,常規(guī)分籠飼養(yǎng)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程自由攝食和飲水。
1.1.2 儀器
H-1850R 型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī),UV-1200型紫外可見分光光度計(jì),電子天平,電熱恒溫水浴鍋,冷凍干燥機(jī),組織搗碎勻漿機(jī),漩渦混合器,解剖器械等。
1.1.3 試劑與材料
酵母膏購(gòu)于北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司,氧嗪酸鉀購(gòu)于南京都萊生物技術(shù)有限公司,別嘌呤醇片購(gòu)于上海信誼萬(wàn)象藥業(yè)股份有限公司,試劑盒(尿酸、尿素氮、肌酐、考馬斯亮藍(lán)、黃嘌呤氧化酶)購(gòu)于南京建成生物工程研究所。其他試劑均為分析純,實(shí)驗(yàn)用水為純水。紅茶購(gòu)于祁門香茶業(yè)有限公司,二級(jí)。
1.2 方法
1.2.1 紅茶提取物的制備
稱取紅茶 100 g,加入 1 L沸水水浴加熱30 min,過(guò)濾。濾渣加入500 mL沸水水浴加熱15 min,合并濾液,濃縮后預(yù)凍2 h,冷凍干燥,-20℃保存,備用。
1.2.2 試驗(yàn)分組及模型建立
將 36只小鼠稱重后隨機(jī)分為空白對(duì)照組、高尿酸血癥模型組、紅茶低(0.5 g·kg-1·d-1)、中(1 g·kg-1·d-1)、高劑量組(2 g·kg-1·d-1)、別嘌呤醇組(5 mg·kg-1·d-1)6組,每組6只。每天灌胃前一晚禁食,定時(shí)灌胃給藥。空白組和高尿酸模型組每天灌胃生理鹽水,陽(yáng)性藥物組每天腹腔注射別嘌呤醇,紅茶低、中、高劑量組每天灌胃給藥,腹腔注射及灌胃量均按體質(zhì)量給藥,連續(xù)1周。每日稱量小鼠體質(zhì)量,根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整灌胃量。水合氯醛麻醉,摘眼球取血。第7天,取血前2 h,空白組灌胃生理鹽水,其余5組小鼠腹腔注射氧嗪酸鉀200 mg·kg-1并灌胃7.5 g·kg-1酵母膏進(jìn)行造模;取血前 1 h,除模型組外,紅茶組按低、中、高劑量分別灌胃,陽(yáng)性藥組腹腔注射別嘌呤醇。
1.3 指標(biāo)檢測(cè)
1.3.1 血清中各指標(biāo)的測(cè)定
血樣室溫靜置 30 min后,4℃ 3 000 r·min-1離心10 min,分離血清,按試劑盒說(shuō)明測(cè)定血清中尿酸(UA)、尿素氮(BUN)及血肌酐(Cr)水平。
1.3.2 肝臟中黃嘌呤氧化酶(XOD)活性的測(cè)定
解剖各組小鼠,觀察腎臟有無(wú)病變,并快速取小鼠肝臟,用冷生理鹽水反復(fù)沖洗,肝組織按組織質(zhì)量與生理鹽水體積比1︰9的比例在冰水浴中制成 10%肝組織勻漿,3 000 r·min-1,離心10 min,棄去脂肪層,取上清液測(cè)定肝臟中的XOD活性。
1.4 數(shù)據(jù)處理
2.1 體質(zhì)量增長(zhǎng)情況
各組小鼠體質(zhì)量總體呈增長(zhǎng)趨勢(shì)(圖1)。在處理期內(nèi),各處理組的小鼠體質(zhì)量在相同時(shí)間無(wú)顯著性差異。說(shuō)明不同處理對(duì)小鼠體質(zhì)量無(wú)影響。
2.2 對(duì)小鼠血尿酸的影響
從圖2中得知,模型組與空白組相比血尿酸值顯著增高59.2%(P<0.01),說(shuō)明用氧嗪酸鉀和酵母膏聯(lián)合造模成功。給予別嘌呤醇后,小鼠血尿酸水平與模型組相比顯著降低54.1%(P<0.001),說(shuō)明別嘌呤醇對(duì)降尿酸有極好的療效。紅茶低劑量組與模型組相比,血尿酸含量降低24.5%;中劑量、高劑量組與模型組相比分別降低 31.6%和 31.9%(均P<0.05),且呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系,表明3種劑量的紅茶提取物均有良好的降尿酸效果。
2.3 對(duì)小鼠血尿素氮的影響
從如圖3得知,模型組及紅茶組BUN水平均高于空白對(duì)照組。其中模型組與空白組達(dá)到極顯著差異(P<0.001)。與模型組相比紅茶的中劑量組與高劑量組均能顯著降低BUN 水平,且高劑量組達(dá)極顯著差異(P<0.01),低劑量組也能降低BUN水平,但無(wú)顯著性差異。別嘌呤醇組與模型組相比,BUN水平降低,但差異不顯著。紅茶高劑量組的BUN水平低于別嘌呤醇組,預(yù)示一定劑量的紅茶提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠的腎臟有保護(hù)作用。
2.4 對(duì)小鼠血肌酐的影響
從圖 4得知,與空白組相比,模型組 Cr水平極顯著高于空白組(P<0.01);各給茶組的Cr水平呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系,且各給茶處理組與模型組相比 Cr水平均降低極顯著(P<0.001);別嘌呤醇組Cr水平也極顯著低于模型組(P<0.001);給茶組處理的Cr水平都低于別嘌呤醇處理組。
圖1 小鼠體質(zhì)量變化情況Fig. 1 Body weight changes of mice
圖2 紅茶提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠血尿酸水平的影響Fig. 2 Effects of black tea extract on serum uric acid levels in hyperuricemic mice
圖3 紅茶提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠血尿素氮的影響Fig. 3 Effects of black tea extract on BUN in hyperuricemic mice
2.5 對(duì)小鼠肝臟中黃嘌呤氧化酶活性的影響
由圖5可知,模型組小鼠肝臟中XOD活性與空白組相比顯著增強(qiáng)了19%(P<0.05)。別嘌呤醇組與模型組相比XOD的活性降低了18%(P<0.05)。與模型組相比,紅茶低、中劑量組均可抑制XOD酶的活性,而高劑量組XOD活性相比模型組降低了19.1%(P<0.05)。
高尿酸血癥是痛風(fēng)的重要生化特征。在體內(nèi),腺嘌呤核苷→次黃嘌呤核苷→次黃嘌呤→黃嘌呤→尿酸→尿素囊,尿酸經(jīng)過(guò)腎小管排出體外[13]。當(dāng)人體尿酸生成增多或排泄減少時(shí),就造成了高尿酸血癥。痛風(fēng)、高尿酸血癥與高血糖、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的發(fā)病率呈正相關(guān)。因此,高尿酸血癥應(yīng)引起人們高度重視。
圖4 紅茶提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠血肌酐水平的影響Fig. 4 Effects of black tea extract on creatinine levels in hyperuricemic mice
圖5 紅茶提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠黃嘌呤氧化酶水平的影響Fig. 5 Effects of black tea extract on XOD in hyperuricemic mice
氧嗪酸鉀是一種尿酸酶抑制劑,可以抑制體內(nèi)尿酸的分解提高血清尿酸濃度,因此可以造成高尿酸血癥動(dòng)物模型。酵母膏內(nèi)含豐富的蛋白質(zhì)、核苷酸等,在體內(nèi)水解可產(chǎn)生含氮、有機(jī)堿(包括嘌呤堿、嘧啶堿)等。當(dāng)大量酵母進(jìn)入體內(nèi),可以干擾機(jī)體正常嘌呤代謝,表現(xiàn)為XOD活性增加,加速尿酸形成,產(chǎn)生大量尿酸[14]。因此本試驗(yàn)選用氧嗪酸鉀和酵母膏聯(lián)合造成小鼠高尿酸血癥模型,模型組血尿酸值與空白相比升高59.2%,顯示造模成功。
該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,給茶組血尿酸水平明顯低于模型組,表明紅茶能降低高尿酸血癥小鼠體內(nèi)的血尿酸水平。推測(cè)是否與抑制體內(nèi)血尿酸合成有關(guān)。XOD是嘌呤代謝過(guò)程中重要的酶,其活性增強(qiáng)可加速尿酸生成。本試驗(yàn)以研究肝臟中該酶的活性來(lái)探討紅茶降低體內(nèi)血尿酸的機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),模型組肝臟中 XOD活性升高,進(jìn)一步說(shuō)明高尿酸血癥模型構(gòu)建成功。另外,紅茶低、中、高劑量組均表現(xiàn)出XOD活性被抑制,其中高劑量組可以顯著抑制XOD活性,因此可以推測(cè),因XOD活性被抑制,減少了小鼠體內(nèi)尿酸的生成,從而降低血尿酸水平。
血清尿素氮和肌酐水平可以用來(lái)反映動(dòng)物腎功能情況。本實(shí)驗(yàn),紅茶3個(gè)劑量組與模型組相比均能降低血尿素氮水平,其中中、高劑量均可明顯降低高尿酸血癥小鼠的尿素氮水平。模型組的血尿素氮水平和肌酐水平明顯高于空白對(duì)照組,說(shuō)明尿素氮在血中堆積濃度升高,造模藥物可能對(duì)腎功能造成了損傷。
綜合來(lái)看,紅茶提取物可以降低氧嗪酸鉀與酵母膏聯(lián)合誘導(dǎo)的高尿酸血癥小鼠的血尿酸、尿素氮、血肌酐及肝臟XOD水平,其作用機(jī)理可能與抑制肝臟XOD的活性有關(guān)。以后我們將對(duì)尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因表達(dá)量進(jìn)一步探究。本實(shí)驗(yàn)為紅茶適于高尿酸血癥患者飲用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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Effects of Black Tea Extract on Serum Uric Acid Levels in Hyperuricemic Mice
ZHU Chuang1,2, LIU Zenghui3, ZHAO Yongqing1,2, TAI Lingling1,2, XU Yan1,2*
1. School of Tea & Food Science, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China; 2. State Key Laboratory of Tea Biology and Utilization, Hefei 230036, China; 3. Anhui Academy of Medical Science, Hefei 230061, China
This study was aimed to investigate the effect of black tea extract on the level of serum uric acid in hyperuricemic mice. Thirty six KM male mice were randomly divided into the control group, model group, tea-treated low dose group, middle dose group, high dose group and allopurinol group. Mice in the control group and tea-treated groups were treated with saline and black tea extract respectively for consecutive 7 days. The later were given black tea extract 1 hour after modeling on the seventh day. The model group was given PO through intraperitoneal injection and yeast extract intragastrically to establish model on the seventh day. The results showed that compared with the model group, the levels of serum UA and BUN (blood urea nitrogen) were decreased in tea-treated groups, with significant decreases in the middle (P<0.05) and high dose groups (P<0.01). The serum Cr level (creatinine) of tea-treated groups were decreased and the XOD activity in the high dose group was significantly lower than those in the model group (P<0.05). there were slight but not significantly inhibitory effect in the low and middle dose groups. These date suggest that black tea extract possesses significant anti-hyperuricemic effect on hyperuricemic mice induced by PO and yeast extract.
black tea extract, hyperuricemia, uric acid, xanthine oxidase
TS272.5+2;R983+.2
A
1000-369X(2017)02-167-06
2016-12-26
2017-01-17
2017安徽省高等學(xué)校自然科學(xué)基金(kj2017A128)、安徽省科技重大專項(xiàng)項(xiàng)目(15czz03116)、安徽省茶葉化學(xué)與健康領(lǐng)軍人才團(tuán)隊(duì)引進(jìn)重大示范項(xiàng)目資助
朱創(chuàng),女,碩士研究生,主要從事茶天然產(chǎn)物與健康研究。*通訊作者:yanxu@ahau.edu.cn