祁潔，徐穎磊，梁文怡，費朵，烏昕兒，金建昌，杜琪珍*，許勇泉，高穎

1. 浙江農(nóng)林大學農(nóng)業(yè)與食品科學學院，浙江 臨安 311300；2. 浙江樹人大學生物與環(huán)境工程學院，浙江 杭州310015；3. 中國農(nóng)業(yè)科學院茶葉研究所，浙江 杭州 310008

EGCG納米載體制備技術(shù)及其對EGCG活性影響的研究進展

祁潔1，徐穎磊1，梁文怡1，費朵1，烏昕兒1，金建昌2，杜琪珍1*，許勇泉3，高穎3

1. 浙江農(nóng)林大學農(nóng)業(yè)與食品科學學院，浙江 臨安 311300；2. 浙江樹人大學生物與環(huán)境工程學院，浙江 杭州310015；3. 中國農(nóng)業(yè)科學院茶葉研究所，浙江 杭州 310008

表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）是綠茶中最重要的生物活性成分，在腫瘤形成的各個階段都有抑癌活性。納米化途徑是提高 EGCG穩(wěn)定性和生物利用度的有效技術(shù)之一。已有較多的研究表明，多類材料可用于制備納米粒子作為EGCG載體，并在改善EGCG生物活性方面效果顯著。本文按制備納米粒子主要材料的不同，對各類納米粒子的制備方法、特性及其在改善 EGCG的生物活性方面的研究進行了分述，并對各種納米粒的增效作用進行了歸納總結(jié)。

EGCG；納米粒；材料；制備；生物有效性

表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）是綠茶中最重要的生物活性成分[1]，在動物模型的多個癌癥位點[2]及人類一些流行病學研究中[3-5]都證實了它的抗癌活性。然而，體外實驗表明，EGCG需要在相對較高的濃度條件下才能作用于相關(guān)分子靶點及影響與疾病相關(guān)的細胞進程[2]。其次 EGCG在腸液環(huán)境（pH＞7.0）易降解和聚合，導致口服的生物利用度非常低[6]。而血液環(huán)境中（pH=7.4）EGCG更不穩(wěn)定，即使靜脈給藥，EGCG在到達作用靶點前就有可能分解[7-8]。因此，提高 EGCG的穩(wěn)定性和生物利用度是將 EGCG開發(fā)為防癌治癌制品的關(guān)鍵之一。

納米粒子具有獨特的表面效應(yīng)和尺寸效應(yīng)，因而具有不同于傳統(tǒng)材料的特殊性能[9-10]。通過采用納米技術(shù)，將藥物和食品功能因子包裹于納米粒子內(nèi)部，或吸附于納米粒子表面，可以使藥物和食品功能因子避免腸胃環(huán)境的影響，實現(xiàn)可控和靶向的釋放，從而提高藥物和食品功能因子的生物利用度[11]；其次，生物利用度的提高也相對降低了藥物的毒副作用[12]。

已有較多的研究表明，多類材料可用于制備納米粒子作為EGCG載體，并在改善EGCG生物活性方面效果顯著。本文按制備納米粒子主要材料的不同，對各類納米粒子的制備方法、特性及其對 EGCG生物活性的影響方面進行綜合論述。

1 以金屬為載體EGCG納米粒制備

金屬納米粒子是指在形態(tài)上被縮小至納米程度（5～100 nm）的金屬顆粒，這種新型納米材料，其原子和電子結(jié)構(gòu)不同于化學成分相同的金屬粒子[13]。隨著粒徑的減小，納米粒子的表面原子與總原子數(shù)之比急劇增大，顯示出強烈的體積效應(yīng)（即小尺寸效應(yīng)）、量子尺寸效應(yīng)、表面效應(yīng)和宏觀量子隧道效應(yīng)[14]。

納米金是目前研究最為深入的金屬納米粒子，其自身具有一定的生物活性，能干擾血管內(nèi)皮生長因子和堿性成纖維細胞生長因子，從而抑制腫瘤的生長。納米金作為 EGCG的載體也得到了廣泛的研究。Hsieh D C等[15]人通過物理吸附法制備 EGCG-金納米粒子，通過激活線粒體通道中的Bcl-2家族的細胞凋亡蛋白酶實現(xiàn)其介導腫瘤細胞凋亡。在靶向性注射 EGCG-金納米粒子時，通過下調(diào)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）來實現(xiàn)對腫瘤的抑制；體外細胞實驗發(fā)現(xiàn)，EGCG-金納米粒子由于具有良好的協(xié)同效應(yīng)而比單純使用 EGCG對抑制老鼠體內(nèi)的膀胱腫瘤效果更好。Shukla R等[16]將放射性的198Au與 EGCG 制備成對Laminin67R受體有靶向親和作用的納米金（198AuNP-EGCG），該納米金能起到局部放療效果。小鼠動物實驗表明，在腫瘤中注射這種納米金制劑對前列腺腫瘤的抑制達到 80%。Hussain S[17]制備了一種EGCG-銀納米粒子。其制備原理是利用羥基能將銀離子還原成銀，最終形成銀納米粒子。EGCG可以快速將銀離子還原成金屬銀，自由羥基基團能夠通過納米銀和EGCG分子的氧原子表面的Ag原子之間的相互作用穩(wěn)定納米銀。Mukherjee S等[18]使用綠色納米技術(shù)合成了 EGCG-NPs納米金粒子，粒徑為 59.8 nm。納米粒子表現(xiàn)出非凡的穩(wěn)定性、細胞快速吸收性和良好的體外抗氧化性。它可以通過改變癌細胞的氧化還原狀態(tài)，引發(fā)癌細胞的凋亡，同時憑借其抗氧化性能避免正常肝細胞的損傷。Nagabhushana H等[19]采用綠色合成方法制備高純度且結(jié)晶化的EGCG-氧化鎘納米粒，平均粒徑5～17 nm，其形態(tài)與提取物濃度關(guān)系密切。此合成方法可用于大規(guī)模的 EGCG-氧化鎘納米粒的合成，雖然其進一步應(yīng)用有待研究。

2 以蛋白為載體的EGCG納米粒制備

蛋白質(zhì)類物質(zhì)在不同的溫度下展現(xiàn)不同的空間結(jié)構(gòu)，利用其內(nèi)部較多的特殊基團，可與 EGCG以多種形式進行結(jié)合，具有較好的包埋活性。常用于包埋的蛋白質(zhì)有乳球蛋白、酪蛋白、明膠、白蛋白等。

祖元剛等[20]通過去溶劑法制備了葉酸介導的 EGCG白蛋白納米粒，制得的納米粒平均粒徑為200 nm，EGCG包埋率達到81.5%，葉酸偶聯(lián)量達到18.4 μg·mg-1BSA。該納米粒能明顯提高EGCG對前列腺癌細胞PC-3的靶向效果，對癌細胞的致死效果也明顯提升。Shpigelman A等[21]將經(jīng)熱誘導的β-乳球蛋白與EGCG通過自組裝制備成EGCG-β-乳球蛋白納米粒，在最優(yōu)熱處理條件75～85℃下制備的納米粒粒徑均小于50 nm。該納米制劑能顯著抑制 EGCG的降解，從而提高了抗氧化的EGCG分子比例。其次，這種納米制劑能在腸胃中起到緩釋效果，從而提高 EGCG的生物利用度[22]。Li B 等[23]通過熱誘導法制備EGCG-β-LG納米粒，并證明了這種EGCG納米粒比單獨 EGCG的抗氧化能力的喪失時間大幅度延長。寡聚EGCG（OEGCG）及EGCG聚乙二醇衍生物（EGCG-PEG）被Chung J E等[24]用于構(gòu)建裝載蛋白抗癌藥物赫賽汀和干擾素的納米粒。該類納米粒靜脈注入荷瘤小鼠體內(nèi)后，其腫瘤抑制活性比單獨注射赫賽汀和干擾素療效超出兩倍之多。其次，通過納米載藥系統(tǒng)，藥物在小鼠肝臟和腎臟的積累降低了70%左右，在肺部的積累降低了40%，可以降低藥物的毒副作用。黃美蓉等[25]采用熱誘導法制備了 EGCG-抗壞血酸-β-乳球蛋白納米粒，該納米粒對 A-375皮膚癌細胞、TE-1食管癌細胞的增殖抑制有顯著增效作用。實驗表明，與單獨EGCG相比，納米粒能顯著提高細胞的微核率、凋亡率和壞死率。Yang R 等[26]用EGCG與去鐵的大豆鐵蛋白（apoSSF）構(gòu)建了蘆丁黃酮納米載體，該載體有效提高了蘆丁的穩(wěn)定性，使蘆丁在模擬胃和腸液中的釋放時間顯著延長，可望提高蘆丁口服的生物有效性。

3 以多糖為載體的EGCG納米粒制備

糖類物質(zhì)由于具有可降解性、安全無毒，在納米粒制備中有良好的應(yīng)用前景。常見可用于制備納米粒的糖類有環(huán)狀糊精、殼聚糖、藻酸鹽等。其中又以殼聚糖（Chitosan，CS）的使用最為廣泛，以其為載體遞送抗癌藥物、基因和疫苗的納米粒藥物輸送系統(tǒng)已經(jīng)被廣泛研究[27-28]。殼聚糖納米粒（CS-NPs）的制備方法有復凝聚法、共價交聯(lián)法、離子凝膠化法、乳滴聚結(jié)法等。

胡冰等[29]利用分子自組裝原理，通過控制殼聚糖與TPP質(zhì)量比為1.3～3.0，制備得到了粒徑 10～50 nm、分散穩(wěn)定、形態(tài)規(guī)則、表面光滑的球形納米顆粒。兒茶素與殼聚糖初始質(zhì)量濃度比為0.4時，兒茶素的包封率最高，達到50%，并且在納米膠囊包封過程中能很好地保持EGCG的穩(wěn)定性。Gomes J F P S等[30]用麥芽糊精、阿拉伯膠和蛋黃磷脂酰膽堿/硬脂胺制備出納米脂質(zhì)體（250～300 nm），該脂質(zhì)體在裝載 EGCG后能有效地緩釋 EGCG，并增強 EGCG在體液 pH環(huán)境中的穩(wěn)定性。Dube A等[31]將EGCG包埋在殼聚糖和三聚磷酸共組裝形成的納米粒（440 nm）中，該納米粒 EGCG的腸胃吸收大大改善，從而提高了EGCG的生物有效性。口服此種 EGCG納米粒，暴露于血漿的EGCG量增加1.5倍，EGCG在空腸腔的暴露增加2.3倍[32]。Peres N等[33]用麥芽糊精、阿拉伯膠通過勻漿與分散制備出平均粒徑400 nm的納米粒，納米粒裝載EGCG可使 EGCG的抗氧化性能得到較好的保護。Liang K等[34]成功地用質(zhì)粒 DNA、接支聚乙烯亞胺和透明質(zhì)酸-EGCG組裝而成具有對靶向基因釋放的納米載體（167 nm），這種納米結(jié)構(gòu)的復合物不僅能通過強的 EGCG的親和力結(jié)合到DNA位點，也便于通過受體介導的內(nèi)吞運輸將EGCG轉(zhuǎn)運到CD44細胞。這種納米結(jié)構(gòu)的復合物表現(xiàn)出增強的抗核酸酶攻擊作用和聚陰離子誘導的解離。此外，由于這種納米復合物具有CD44的靶向性，因而能在血清培養(yǎng)基中有效轉(zhuǎn)染難轉(zhuǎn)染的結(jié)腸癌HCT-116細胞。研究結(jié)果表明，這種納米復合物可望用于 CD44的靶核酸為基礎(chǔ)的治療方法。Tang D W等[35]用殼聚糖和聚谷氨酸自組裝成可食用的納米粒裝載主要含有 EGCG的茶兒茶素。他們研究認為，表面正電荷的該納米顆粒可以瞬時打開 Caco-2細胞之間的緊密連接而增加 EGCG的包外轉(zhuǎn)移，從而提高兒茶素的利用效率。Liang J等[36]以葉酸改性羧甲基殼聚糖（FA-CMC）和鹽酸化殼聚糖采用離子凝聚法制備葉酸殼聚糖包埋的 EGCG納米粒（FCS-EGCG-NPs）。制備的FCS-EGCGNPs直徑400 nm，EGCG最大裝載量達75%。該納米粒在不同的緩沖溶液中有不同的緩釋效應(yīng)，并能增加腫瘤細胞中的雙靶向抗腫瘤活性，對肺腺癌 H1299細胞的最大抑制率約為56%，而游離EGCG僅為22%。Lin Y H等[37]制備了EGCG-巖藻糖-殼聚糖/明膠納米粒，模擬胃腸實驗結(jié)果表明，該納米載體系統(tǒng)有效地控制 EGCG的釋放，可直接與幽門螺旋桿菌感染部位的細胞間相互作用。同時發(fā)現(xiàn)該納米粒對幽門螺桿菌有顯著的清除效果，可有效減少幽門螺旋桿菌引起的胃竇炎。Siddiqui I A等[38]研究發(fā)現(xiàn)裝載在殼聚糖納米粒中的EGCG對在體外和體內(nèi)生長的人體黑色素瘤細胞有優(yōu)異的抗增殖和促凋亡效應(yīng)。比單獨EGCG的效果好8倍。Hong Z等[39]將聚天冬氨酸（PAA）和殼聚糖（CS）以1∶1的質(zhì)量比制成平均直徑約 93 nm 的空白納米粒，EGCG負載在納米顆粒上制備成 EGCG-殼聚糖-聚天冬氨酸（EGCG-CS-PAA）納米粒子，粒徑約 102 nm，穩(wěn)定性良好，納米顆粒通過離心、冷凍干燥后再分散在溶液中具有較好的恢復性。白兔動物實驗表明，該納米粒在治療動脈粥樣硬化時具有比 EGCG更好的生物有效性。Zou L等[40]將硫酸葡聚糖（DS）涂布在兩親性殼聚糖衍生物表面制備出納米載體，該納米載體能裝載EGCG，EGCG包埋率達到90%。研究表明，該納米粒具有良好的胃腸道環(huán)境穩(wěn)定性和相對較好的 EGCG緩釋性能。孫靜等[41]采用離子凝膠化法制備了 EGCG殼聚糖（CS）納米粒（EGCG-CS-NPs）。制備的納米粒包埋率為 85.8%，粒徑 102.2 nm。EGCG-CS-NPs在24 h內(nèi)平穩(wěn)緩慢釋藥。Park S J等[42]利用高壓均質(zhì)法制備了 EGCG-海藻酸-殼聚糖納米粒（EGCG-ACNS）。納米粒粒徑293 nm，EGCG包埋率 80.1%。該納米粒在pH=2.6和pH6.9時對EGCG的保護作用良好。閆敬娜等[43]以殼聚糖、三聚磷酸制備納米粒，并以葉酸和聚乙二醇（Polyethylene glycol，PEG）作靶向性修飾，制備出EGCG納米粒，該納米粒對6-OHDA誘導的SH-SY5Y細胞的毒性顯著降低。

4 以聚合物為載體的EGCG納米粒制備

聚合物納米粒是由高聚物組成的實體結(jié)構(gòu)，特別適合于水溶性差的藥物。它通過化學結(jié)合或物理共聚作用，如疏水作用、離子作用或氫鍵，聚合物膠束的疏水性核可以吸附各類藥物。這類納米粒具有粒徑小、熱力學穩(wěn)定性好、可增加疏水性分子的溶解度、可緩慢釋放藥物和可避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對藥物的快速清除等優(yōu)點[44]。通常情況下聚合物膠束的核-殼結(jié)合是由兩親性嵌段共聚物形成的，在水溶液中，嵌段共聚物形成多聚體膠是一個自組裝過程。

Siddiqui A等[45]將 EGCG包埋在聚乳酸（PLA）和聚乙二醇（PEG）納米粒子中。納米粒子中的 EGCG無論是在體外（細胞培養(yǎng)體系）還是在體內(nèi)（植入了人類前列腺癌細胞的裸鼠體內(nèi)）的存留量都是沒有進行包封EGCG存留量的10倍多。Srivastava A K等[46]用溶劑揮發(fā)法制備了 EGCG的聚乳酸羥基乙酸共聚物（PLGA）納米粒。實驗得出，EGCG-PLGA納米粒促凋亡和血管生成抑制作用的劑量比單獨EGCG降低30倍。另外，EGCG的PLGA納米粒有顯著的修復XRCC1、XRCC3、ERCC3基因、p53基因、p21基因、MDM2、GADD45α和COX-2等DNA損傷應(yīng)答基因的潛力，且EGCG-PLGA納米粒具有防止DMBA誘導DNA損傷的能力。Shin Y C等[47]通過靜電吸附的方法，以PLGA和EGCG制備了具有藥物控釋功能的生物可降解的納米纖維（E-PLGA）。這種納米纖維用于皮膚損傷，可以減少組織粘連，加速愈合。納米纖維直徑300～500 nm，EGCG可隨著PLGA的降解緩慢釋放長達 28 d，同時 EGCG也不會影響纖維的使用強度。E-PLGA既可以有效清除活性氧，也能延伸凝血酶活化的時間。E-PLGA在預(yù)防手術(shù)后的粘連要明顯好于其他產(chǎn)品，具有潛在的醫(yī)用開發(fā)應(yīng)用價值。Pal S等[48]采用單乳化溶劑蒸發(fā)技術(shù)制備 PLGA納米粒子封裝EGCG。合成的納米顆粒表面光滑呈球形，平均直徑 300 nm。體內(nèi)釋放動力學實驗表明該 EGCG納米粒能延緩并控制釋放，作用于腫瘤細胞K562時，該納米系統(tǒng)的抑制效果遠高于游離的EGCG。Singh M等[49]采用溶劑蒸發(fā)法將EGCG裝載到PLGA和聚乙烯醇形成的納米粒（EGCG-NP，239 nm）。研究表明，此種納米?？鼓[瘤細胞增殖作用比EGCG高7倍。將順鉑裝載到EGCG-NP中，能增強順鉑抑制A549（肺癌）、Hela（宮頸癌）細胞的增殖。體內(nèi)實驗表明，順鉑的EGCG-NP在小鼠腫瘤化療時的增敏作用比 EGCG顯著提高。Narayanan S等[50]采用乳化-沉淀法制備出PLGA為核、酪蛋白為殼的納米載體，該納米載體可以將低極性的紫杉醇包埋在納米粒核內(nèi)，將極性較強的EGCG吸附在酪蛋白殼上，因而能實現(xiàn)紫杉醇-EGCG的順序釋放。其次，亦可將EGFR抗體偶聯(lián)到納米粒上，最終形成250 nm左右的納米藥物[51]。這種納米粒能選擇性地結(jié)合到乳腺癌細胞上，從而提高癌細胞對藥物的敏感性，增強化療的效果。

5 以脂質(zhì)為載體的EGCG納米粒制備

脂質(zhì)體是一種自組裝膠束微粒，磷脂是最常見的脂質(zhì)，常分散在水中自然形成閉合多層囊泡，每層均為脂質(zhì)的雙分子層，水溶性活性物質(zhì)包埋于水或醇相中，脂溶性活性物質(zhì)包埋在磷脂雙分子層中。因此各類水溶性、脂溶性活性物質(zhì)都可以用脂質(zhì)體作為納米載體。脂質(zhì)體具有靶向性、緩釋性、無毒性、給藥途徑多樣化等特性[52]；作為活性物質(zhì)的載體時，能促進腸道對它的吸收，提高其生物利用率[53]。

Fang J等[54]制備了含卵磷脂、膽固醇與溶于 15%乙醇的陰離子表面活性劑的脂質(zhì)體（133 nm），并對影響脂質(zhì)體理化性質(zhì)和兒茶素在體內(nèi)瘤中的沉積效果的因素進行了研究。當脂質(zhì)體作為 EGCG的載體作用于基底細胞癌、黑素瘤細胞、結(jié)腸腫瘤細胞時，有比游離EGCG高 20倍的藥物沉積。明顯地，EGCG脂質(zhì)納米粒的形式可減少因避免誘發(fā)藥物副作用所需的藥物劑量。脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)表明它們可以經(jīng)過配方設(shè)計作為有效的EGCG載體，脂質(zhì)體也能夠提供細胞內(nèi)更高的EGCG積累，并增加囊泡內(nèi)的EGCG的穩(wěn)定性。潘桂玲等[55]采用薄膜蒸發(fā)法用大豆卵磷脂、膽固醇、EGCG 制備出平均粒徑 120 nm、包封率79.8%、載藥量7.0%的EGCG納米脂質(zhì)體，其穩(wěn)定較好。Barras A等[56]用辛酸/癸酸三酸甘油酯、大豆卵磷脂、聚乙二醇660和聚乙二醇660羥基硬脂酸酯制備出裝載 EGCG的脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體能在10周內(nèi)穩(wěn)定，EGCG在貯藏過程中的泄漏率顯著降低。Smith A[57]等采用單相液體共溶法制備出 EGCG的納米脂質(zhì)體（50 nm），大鼠實驗表明，該脂質(zhì)體使得EGCG的生物有效性顯著提高，使得 EGCG誘導改善神經(jīng)元 SweAPP N2a細胞產(chǎn)生 α-分泌酶的能力提高，從而提高了 EGCG治療阿爾茨海默癥和HIV相關(guān)癡呆癥的效果。Zhang J等[58]用天然油脂，表面活性劑、殼聚糖和EGCG成功地合成了50 nm的EGCG納米脂質(zhì)體（CSNLCE）。相比非納米化的 EGCG，CSNLCE大大提高了EGCG的穩(wěn)定性，能顯著增加來自巨噬細胞的 THP-1含量，顯著降低 mRNA 水平及單核細胞分泌蛋白-1（MCP-1）在巨噬細胞中的水平，從而抑制動脈粥樣硬化病變的發(fā)展。然而，CSNLCE中含有大量的甘油三酯，可能增加血液甘油三酯的濃度，亦會帶來致心血管疾病的危險因素。為了克服這個問題，他們又用 α-生育酚乙酸酯代替甘油三酯，成功地開發(fā)了一個無甘油三酯的納米粒（Enano）[59]。Gü lseren I等[60]用牛乳磷脂、EGCG溶于咪唑-NaCl緩沖液，通過高壓勻漿制備出平均粒徑小于200 nm的納米脂質(zhì)體。體外實驗表明，該脂質(zhì)體能提高EGCG在腺癌細胞中的釋放效果。Rashidinejad A 等[61]用大豆卵磷脂和醋酸鹽緩沖液通過高速勻漿制備出納米脂質(zhì)體（133 nm），該脂質(zhì)體能包埋溶液中80%的EGCG，包埋在納米脂質(zhì)體中的 EGCG能在低脂奶酪中有效釋放。Luo X等[62]通過逆相蒸發(fā)法制備EGCG納米脂質(zhì)體。最佳制備條件為磷脂和膽固醇的比例為4，EGCG納米脂質(zhì)體的包埋率和大小分別為 85.8%和 180 nm。體外釋放試驗表明，所制備的 EGCG納米脂質(zhì)體是穩(wěn)定的，適合于口服，可以抑制腫瘤細胞的生長。Zou L等[63]利用乙醇注射法和動態(tài)高壓微射流相結(jié)合制備了EGCG納米脂質(zhì)體（EN），該脂質(zhì)體具有良好的物理化學表征（包封率92.1%，平均粒徑71.7 nm），并表現(xiàn)出相對良好的緩釋性，使EGCG在接近中性或堿性的流體中的被破壞程度降低，抗氧化時效得以延長。賈坤等[64]采用薄膜超聲法將硬脂酸、卵磷脂、吐溫 80和姜黃素-EGCG復合物制備出平均粒徑約90 nm的固體脂質(zhì)納米粒，該脂質(zhì)納米粒對CT-26和 Hela腫瘤細胞抑制作用比同劑量的 EGCG顯著提高。Zou L等[65]通過靜電相互作用將硫酸葡聚糖（DS）涂覆于兩親殼聚糖衍生物納米脂質(zhì)體（DCMC-NL）的表面上，制備出一種新型納米粒 DS-DCMC-NL。該納米粒具有高度的EGCG封裝能力，對EGCG的包埋率達到90.8%，同時表現(xiàn)出較好的EGCG緩釋性和對EGCG較強的保護能力，為EGCG在食品加工的進一步應(yīng)用提供了一個有較好應(yīng)用前景的載體。Radhakrishnan R等[66]通過乳化劑揮發(fā)法將 EGCG封裝在固體脂質(zhì)納米粒制備中制備出EGCG-SLN。EGCG-SLN表現(xiàn)出血清中的穩(wěn)定性和高的耐電解質(zhì)誘導性，可被認為是有前景的遞送 EGCG的化學治療劑。Liao B等[67]用卵磷脂、蔗糖酯、吐溫和乙醇制備出70 nm左右的醇質(zhì)體，這種醇質(zhì)體能很好地裝載 EGCG和多烯紫杉醇。EGCG裝載到醇質(zhì)體后，醇質(zhì)體的透皮性能大大改善。將多烯紫杉醇裝載到 EGCG的醇質(zhì)體上，在腫瘤表層透皮給藥可以高效地將多烯紫杉醇釋放到瘤體，實現(xiàn)多烯紫杉醇透皮給藥的治療，以降低它對其他器官的損害。

6 總結(jié)與展望

以上按制備納米粒子主要材料的不同，對各類納米粒子的制備方法、特性及其在改善EGCG的生物活性方面的研究進行了分述。金屬納米粒的制備采用的是金屬納米粒對EGCG的吸附作用；蛋白、聚合物和多糖則是利用了高分子的空間結(jié)構(gòu)及其與 EGCG的相互作用使 EGCG包埋在高分子內(nèi)部或吸附在表層；而脂質(zhì)體則主要利用的是多層脂質(zhì)結(jié)構(gòu)對 EGCG的包埋。因此，不同的材料構(gòu)建的EGCG納米體系的穩(wěn)定性、釋放性和可能的靶向性是不同的。從構(gòu)建的 EGCG納米粒的增效作用（表1）來看，大多數(shù)研究的目標是指向抑制體外、體內(nèi)腫瘤細胞的增殖和改善EGCG在胃腸道中的穩(wěn)定性、釋放性能和在腸道中的吸收率。納米 EGCG的尺度小，裝載在納米粒子上的 EGCG可以更易穿透各種阻礙到達作用靶點；裝載在納米粒子上的EGCG能延緩 EGCG在體液環(huán)境中的降解。因此，EGCG的生物利用度得以大大提高，從而提高抑制體外、體內(nèi)腫瘤細胞的增殖。金屬、蛋白、聚合物、多糖和脂質(zhì)體均能不同程度地起到以上作用。有相當多的研究的目的是想通過EGCG的納米形式改善EGCG在胃腸道中的穩(wěn)定性、釋放性能和在腸道中的吸收率，從而為口服制品的生物有效性的提高探索新的途徑。由于磷脂和多糖具有較好的安全性和在胃腸中的穩(wěn)定性，因此，這些納米體系的構(gòu)建主要采用殼聚糖、磷脂等材料。其次，將EGCG用于構(gòu)建納米粒，可以改變納米粒的透皮性、釋放性等功能性質(zhì)，EGCG納米粒在裝載其他藥物（如多烯紫杉醇、赫塞汀、順鉑、蘆丁）后可以在利用藥物功能的同時發(fā)揮 EGCG的功能，從而同時提高 EGCG和所載藥物的生 物利用度。

表1 EGCG納米粒的增效作用及其構(gòu)建的納米體系Table 1 Improvement of effectiveness by EGCG nanoparticles formulation and the composition of the nano formulation

將 EGCG通過納米載體提高其穩(wěn)定性和生物有效性已取得了較大進展，但是想要在人體實驗中獲得成功還有較長的路要走。（1）一些納米載體的制備成本還較高，如金納米粒；（2）納米粒本身的穩(wěn)定時效有待延長；（3）EGCG納米粒的生物活性離藥物水平還有一定的差距；（4）臨床試驗驗證已有的體外和動物實驗結(jié)果亟待進行。其次，納米 EGCG的研究還可以從以下幾方面深入下去：（1）研發(fā)新的能對抗消化吸收環(huán)境的、穩(wěn)定性強的EGCG納米粒，這種EGCG納米粒在EGCG功能食品和口服藥品的開發(fā)方面極有潛能；（2）研發(fā)新的能對抗血液環(huán)境的穩(wěn)定性強的EGCG納米粒，這種 EGCG納米粒具有靜脈給藥的可行性；（3）將 EGCG與其他生物活性成分聯(lián)用，制備功能、活性更強的 EGCG納米粒，如EGCG與紫杉醇等抗癌藥物；（4）將抗體、抗原偶聯(lián)至納米載體上提高 EGCG的靶向性。我們認為，制備靶向性納米制品應(yīng)該是最有前途的方向。這方面已有相關(guān)的研究報道。如Zhang J等[59]用α-生育酚乙酸酯、表面活性劑、殼聚糖和 EGCG成功地合成開發(fā)了一種納米粒（Enano），并將CD36靶向物（1-棕櫚酰）-2-（5-酮基-6-辛烯酰）磷脂酰膽堿（Ligand）偶聯(lián)到 Enano上形成 108 nm 的L-Enano。裝載EGCG的L-Enano（108 nm）對 THP-1源性巨噬細胞的親和力顯著增強，從而提高了 EGCG-Enano用于抑制動脈粥樣硬化病變的安全性（圖1）。

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圖1 CD36靶向EGCG納米復合體及其靶向作用于巨噬細胞的機理[58]Fig. 1 Illustration of targeted L-Enanocomposition, structure and targeting mechanisms to macrophages

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Progress on the Preparation Technologies and the Active Improvement of EGCG Nano-carriers

QI Jie1, XU Yinglei1, LIANG Wenyi1, FEI Duo1, WU Xiner1, JIN Jianchang2, DU Qizhen1*, XU Yongquan3, GAO Ying3

1. College of Agriculture and Food Science, Zhejiang Agriculture and Forestry University, Lin'an 311300, China; 2. College of Biological and Environmental Engineering, Zhejiang Shuren University, Hangzhou 310015, China 3. Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310008, China

(-)-Epigallocatechin gallate (EGCG) is one of the most important bioactive compounds in green tea, which has shown antitumor activity in various stages of tumor formation. Loading EGCG in nano-carriers is an effective technique to improve the stability and bioavailability of EGCG. Many studies had shown that various kinds of materials can be used for the preparation of nanoparticles as a EGCG nano-carrier, which significantly improved the biological activity of EGCG. The preparation methods, characteristics and the biological activity of EGCG nano-carrier were reviewed, and the improvement of effectiveness by EGCG nanoparticles formulation was also dicussed.

(-)-Epigallocatechin gallate, nano-carrier, material, preparation, bioavailability

TS272；Q946.84+1

A

1000-369X（2017）02-119-11

2016-08-16

2016-10-13

國家大學生創(chuàng)新項目（201610341007）、浙江農(nóng)林大學人才發(fā)展基金（2014FR064）、國家自然科學基金（31270724）

祁潔，女，本科生，國家大學生創(chuàng)新項目主持人。*通訊作者：qizhendu@163.com