劉曉慶，肖芳，劉師文，李健雄，施勇，熊英

(江西省疾病預(yù)防控制中心，江西南昌330029)

江西省2013年至2015年急性弛緩性麻痹病例病原學(xué)監(jiān)測(cè)分析

劉曉慶，肖芳，劉師文，李健雄，施勇，熊英

(江西省疾病預(yù)防控制中心，江西南昌330029)

目的通過(guò)對(duì)江西省2013年至2015年急性弛緩性麻痹病例病原學(xué)監(jiān)測(cè)，為證實(shí)江西省消滅脊髓灰質(zhì)炎提供準(zhǔn)確的、可靠的科學(xué)依據(jù)。方法采用L20B、RD細(xì)胞繼續(xù)脊髓灰質(zhì)炎病毒分離，脊髓灰質(zhì)炎毒株通過(guò)ITD方法進(jìn)行型內(nèi)鑒定，若為復(fù)合型毒株再經(jīng)過(guò)血清中和實(shí)驗(yàn)分單型后，送至國(guó)家脊髓灰質(zhì)炎實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行序列測(cè)定。結(jié)果2013年至2015年共接收1058份AFP病例糞便標(biāo)本，其中有28份分離出脊髓灰質(zhì)炎病毒，83份分離出非脊髓灰質(zhì)炎腸道病毒，分離率分別為2. 65%，7.84%；接收AFP病例接觸者糞便標(biāo)本57份，分離出脊灰病毒2份和非脊灰腸道病毒7份，平均分離率分別為3.51%，12.28%；在2013年分離出一例疫苗衍生株病例，未發(fā)現(xiàn)脊灰野病毒。結(jié)論江西省脊髓灰質(zhì)炎病毒學(xué)監(jiān)測(cè)處于較高的水平，江西省2013年至2015年急性弛緩性麻痹病例病中未發(fā)現(xiàn)脊灰野病毒，但檢出VDPV，提示我們要警惕疫苗株的變異，應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)監(jiān)測(cè)。

急性弛緩性麻痹（AFP）；脊灰疫苗衍生株（VDPV）；非脊灰腸道病毒；病原學(xué)監(jiān)測(cè)

脊髓灰質(zhì)炎（脊灰）是一種由脊髓灰質(zhì)炎病毒引起的嚴(yán)重危害兒童健康的傳染病，侵犯對(duì)象為5歲以下兒童[1]。中國(guó)脊髓灰質(zhì)炎（脊灰）監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)建立以來(lái)，在新疆維吾爾自治區(qū)、云南省、青海省有一些脊灰野病毒爆發(fā)的報(bào)告[2-5]隨著全球消滅脊灰策略的實(shí)施及脊灰口服減病毒活疫苗（OPV）的使用，脊灰野病毒毒株的傳播及流行已得到有效的控制。雖然我國(guó)已證實(shí)無(wú)脊灰狀態(tài)[6]，但是我國(guó)周邊國(guó)家仍有脊灰流行，新疆于2011年發(fā)生WPV輸入并引起局部傳播[7-9]，提示W(wǎng)PV輸入我國(guó)并引起傳播的風(fēng)險(xiǎn)始終存在。所以通過(guò)加強(qiáng)口服脊灰減毒活疫苗接種和開(kāi)展急性弛緩性麻痹（AFP）病例的監(jiān)測(cè)等一系列策略和措施，是目前我國(guó)維持無(wú)脊灰狀態(tài)的戰(zhàn)略方針。

1 材料與方法

1.1 糞便標(biāo)本來(lái)源AFP病例糞便標(biāo)本由報(bào)告AFP病例的市、縣醫(yī)院采集，在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)冷藏運(yùn)送至省脊灰實(shí)驗(yàn)室。

1.2 傳代細(xì)胞與標(biāo)準(zhǔn)血清L20B、RD細(xì)胞來(lái)源于世界衛(wèi)生組織（WHO），由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心脊髓灰質(zhì)炎實(shí)驗(yàn)室分發(fā)，省疾病預(yù)防控制中心脊髓灰質(zhì)炎實(shí)驗(yàn)室建立細(xì)胞庫(kù)，所用細(xì)胞代數(shù)均在WHO要求范圍內(nèi)；標(biāo)準(zhǔn)血清由WHO提供。

1.3病毒分離與鑒定所有糞便標(biāo)本按WHO《脊髓灰質(zhì)炎病毒實(shí)驗(yàn)室操作手冊(cè)》處理后接種于WHO推薦的RD和L20B細(xì)胞，按照《脊灰病毒實(shí)檢驗(yàn)手冊(cè)》[10]的操作規(guī)程進(jìn)行。細(xì)胞和脊灰病毒標(biāo)準(zhǔn)診斷血清由世界衛(wèi)生組織（WHO）提供。所有分離到的脊灰病毒株送國(guó)家脊灰實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行型內(nèi)鑒別和測(cè)序。

1.4 分析方法采用EXCEL 2007等軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果

2.1 2013年-2015年AFP病例病毒學(xué)監(jiān)測(cè)指針完成情況2013年-2015年本省AFP病例監(jiān)測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到了WHO的要求，所有的脊髓灰質(zhì)炎陽(yáng)性標(biāo)本都按國(guó)家要求在7d內(nèi)送到，并且定型結(jié)果與國(guó)家的檢測(cè)結(jié)果100%相符，其詳細(xì)各項(xiàng)指標(biāo)見(jiàn)表1。

2.2 AFP病例及接觸者糞便標(biāo)本病毒分離及鑒定情況2013年-2015年共接收1058份AFP病例糞便標(biāo)本，27份標(biāo)本分離出脊髓灰質(zhì)炎病毒，83份標(biāo)本分離出NPEV，2013年至2015年共接收接觸者糞便標(biāo)本57份，共分離脊髓灰質(zhì)炎病毒2株，NPEV7株（表2，3）。經(jīng)過(guò)ITD分型鑒定后，若為復(fù)合毒株則再經(jīng)過(guò)血清中和實(shí)驗(yàn)分單型后，得到單一的脊髓灰質(zhì)炎病毒毒株分別為PVI型6株，PVII型19株，PVIII型20株，其構(gòu)成比分別為13.33%，42.22%，44.44%，見(jiàn)表4，所有脊髓灰質(zhì)炎病毒毒株送至國(guó)家脊灰實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行序列測(cè)定。

2.3 2013年-2015年分離的脊髓灰質(zhì)炎陽(yáng)性標(biāo)本核苷酸變異情況經(jīng)國(guó)家脊髓灰質(zhì)炎實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行VP1區(qū)核苷酸序列分析，與昆明株和Sabin株比較，其核苷酸變化情況如表5。

表1 2013年-2015年AFP病例病毒學(xué)監(jiān)測(cè)指針完成情況[n（%）]

表2 2013年-2015年AFP病例糞便標(biāo)本病毒分離與鑒定情況

表3 2013～2015年AFP病例接觸者糞便標(biāo)本病毒分離與鑒定情況

表4 2013年-2015年份里脊髓灰質(zhì)炎各型別毒株數(shù)

表5 陽(yáng)性毒株核苷酸變異情況分析

3 討論

快速、靈敏的AFP病例監(jiān)測(cè)系統(tǒng)是消滅脊髓灰質(zhì)炎、維持無(wú)脊灰狀態(tài)的重要策略之一，是及時(shí)發(fā)現(xiàn)輸入性脊髓灰質(zhì)炎野病毒的重要途徑，對(duì)繼續(xù)維持無(wú)脊灰目標(biāo)具有重要意義[11]。江西省脊髓灰質(zhì)炎實(shí)驗(yàn)室自1992年建立AFP病例監(jiān)測(cè)系統(tǒng)以來(lái)，系統(tǒng)一直正常運(yùn)行，已連續(xù)7次通過(guò)了WHO對(duì)脊髓灰質(zhì)炎實(shí)驗(yàn)室的現(xiàn)場(chǎng)認(rèn)證，2013年-2015年江西省AFP病例監(jiān)測(cè)系統(tǒng)繼續(xù)保持較高的敏感性、及時(shí)性和完整性，各項(xiàng)監(jiān)測(cè)指標(biāo)均能達(dá)到WHO的要求，并實(shí)現(xiàn)了從1992年至今連續(xù)23年無(wú)脊灰野病毒病例發(fā)生的目標(biāo)。

通過(guò)對(duì)AFP病例、密切接觸者的病原學(xué)監(jiān)測(cè)，2013年-2015年江西省AFP每年的送檢病例數(shù)均為170例左右，數(shù)量非常相近，PV陽(yáng)性毒株3種型別均有發(fā)現(xiàn)，分別為Ⅰ型6株、Ⅱ型19株、Ⅲ型20株。從數(shù)據(jù)上看，Ⅱ型和Ⅲ型的毒株數(shù)明顯大于Ⅰ型，但這并不能說(shuō)明Ⅱ型和Ⅲ型是我省近三年的優(yōu)勢(shì)株，分析其原因，在2013年我省發(fā)現(xiàn)了一例（Ⅱ+Ⅲ）型VDPV病例，對(duì)該病例重復(fù)采集糞便標(biāo)本樣15份，分離得Ⅱ+Ⅲ型復(fù)合毒株14份以及Ⅱ型毒株1份，故在一定程度上提高Ⅱ型和Ⅲ型毒株的數(shù)量，如果撇開(kāi)這個(gè)因素，Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ型三個(gè)型別的毒株數(shù)相差不大，這與往年我省的報(bào)道Ⅲ型是我省的優(yōu)勢(shì)株不太一致[12-14]。其原因值得進(jìn)一步探討。

江西省2013年-2015年P(guān)V平均分離率為2.65%，腸道病毒平均分離率為7.84%，與全國(guó)水平大致相近，但是分年份來(lái)看，2013年P(guān)V分離率為3.94%，腸道病毒分離率為8.45%；2014年P(guān)V分離率為1.62%，腸道病毒分離率為12.94%；2015年P(guān)V分離率為2.41%，腸道病毒分離率為1.51%，可見(jiàn)2014年雖然腸道病毒分離率較高，但PV分離率卻相對(duì)較低，但是，2015年腸道病毒分離率明顯偏低，這可能與生活水平的提高、健康知識(shí)的加強(qiáng)、衛(wèi)生條件的改善有一定的關(guān)系；除此之外，這也可能與細(xì)胞經(jīng)過(guò)多年凍存其敏感性下降有一定的關(guān)系，還有RD細(xì)胞對(duì)不同的腸道病毒的敏感性不同，也許RD細(xì)胞對(duì)近年來(lái)我省流行的腸道病毒不敏感，這也會(huì)影響腸道病毒的分離率，有待于進(jìn)一步探討其原因。

與原始Sabin疫苗株病毒相比，若VP1區(qū)全基因序列的差異介于1%～15%，這就是VDPV[15]。2013年-2015年江西省雖然沒(méi)有發(fā)現(xiàn)脊灰野病毒，但是在2013年的一病例中連續(xù)采樣并分離得到了高變異脊灰毒株，本研究可以看出，Ⅱ和Ⅲ型毒株發(fā)生了高變異，不過(guò)，雖然該病例毒株產(chǎn)生了高變異，但是在其接觸者以及環(huán)境標(biāo)本中并未分離得到脊灰毒株，說(shuō)明我省脊灰相關(guān)工作人員對(duì)其監(jiān)測(cè)以及隔離保護(hù)工作做得相當(dāng)?shù)轿唬ＷC了患兒所居住的村莊以及周邊環(huán)境并沒(méi)有形成傳播。

隨著全球完成消滅脊灰目標(biāo)實(shí)現(xiàn)日期的推近，維持無(wú)脊灰工作的難度越來(lái)越大，實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)對(duì)及時(shí)發(fā)現(xiàn)輸入性野病毒和疫苗相關(guān)株起著至關(guān)重要的作用，細(xì)胞敏感性是脊灰實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證體系中的重要組成部分[16]。江西省自建立AFP網(wǎng)絡(luò)病例監(jiān)測(cè)系統(tǒng)以來(lái)，一直保持敏感、高效、準(zhǔn)確的運(yùn)行，為全球消滅脊髓灰質(zhì)炎、維持無(wú)脊灰狀態(tài)提供了有力的實(shí)驗(yàn)室保障。

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An analysis of AFP cases on vaccine associated polioviruses strains in Jiangxi province in 2013～2015

LIU Xiaoqing，XIAO Fang，LIU Shiwen，LI Jianxiong，SHI Yong，XIONG Ying.Jiangxi Provincial Center for Disease Control and Prevention，Nanchang，330029.

Objective To provide accurate，reliable science evidences for Polio free status in Jiangxi，and to analyze the lab monitoring results of the acute flaccid paralysis(AFP)case from 2013 to 2015.Methods Polio viruses were isolated by L20B cell and RD cell.The isolated Polio strains were typed by ITD test for intratypic identification and then sent to national Polio laboratory for sequencing.Result We received 1058 AFP stool specimens from 2013 to 2015.The isolates of Polio viruses and NPEV were 27(2.65%)and 83(7.84%)，respectively.Among the 57 received AFP cases contacts stool specimens，2 were identified as poliovirus and 7 were identified as NPEVs，with a separation rate of 3.51%and 12.28%on average.No wild polio virus was found but VDPVs were found from cases in 2013.Conclusion Polio virological surveillance in Jiangxi province stay at a high level.No wild polio virus was found in the AFP cases from 2013 to 2015 in Jiangxi province.But the finding of VDPVs warned us we should continue to strengthen surveillance.

Acute flaccid paralysis(AFP)；VDPV；NPEV；Virological surveillance

R512.4，R373.1+3

A

1674-1129(2017)02-0171-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.02.010

2016-09-28；

2016-12-28)

江西省衛(wèi)計(jì)委課題，編號(hào)：20166018

劉曉慶，1986年生，女，碩士，職稱(chēng)以及研究方向：檢驗(yàn)技師，脊灰病病毒的研究。E-mail:liuxiaoqing035@163.com